王穎超，朱桂英，張秋堂，蔣蘭君，李壯壯

·論著·

傳染性單核細(xì)胞增多癥和慢性活動性EB病毒感染患兒免疫功能分析

王穎超1*，朱桂英1，張秋堂2，蔣蘭君1，李壯壯1

傳染性單核細(xì)胞增多癥；皰疹病毒4型,人；T淋巴細(xì)胞亞群；免疫球蛋白同型

王穎超，朱桂英，張秋堂，等.傳染性單核細(xì)胞增多癥和慢性活動性EB病毒感染患兒免疫功能分析[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2017，20(17)：2089-2094.[www.chinagp.net]

WANG Y C,ZHU G Y,ZHANG Q T.Immunologic function in children with infectious mononucleosis and infected with Epstein-Barr virus[J].Chinese General Practice，2017，20(17)：2089-2094.

Immunologic Function in Children with Infectious Mononucleosis and Infected with Epstein-Barr VirusWANGYing-chao1*,ZHUGui-ying1,ZHANGQiu-tang2,JIANGLan-jun1,LIZhuang-zhuang1

1.DepartmentofPediatrics,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

2.InstituteofHematology,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China

*Correspondingauthor:WANGYing-chao,Associatechiefphysician,Mainresearchdirection:bloodandtumordiseasesinchildren;E-mail:yingchaowang152@163.com

Infectious mononucleosis；Herpesvirus 4,human；T-lymphocyte subsets；Immunoglobulin isotypes

同行評議：

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)，又稱人類皰疹病毒4型(human herpes virus 4,HHV-4)，屬于皰疹病毒科嗜淋巴細(xì)胞病毒屬成員。人群對EBV普遍易感，多數(shù)人初次感染發(fā)生在兒童或者青少年時期，并可終生攜帶。據(jù)統(tǒng)計，中國>8歲人群90%以上血清學(xué)陽性[1]。典型的EBV初次感染表現(xiàn)為傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)，多呈自限性，預(yù)后良好[2]；值得注意的是，在免疫抑制、遺傳缺陷或潛伏感染反復(fù)激活的情況下，EBV感染可導(dǎo)致不良預(yù)后，如進(jìn)展為慢性活動性EBV感染(CAEBV)、EBV相關(guān)噬血細(xì)胞綜合征、淋巴瘤等。有研究認(rèn)為，EBV能有效刺激細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，影響機(jī)體免疫功能，且免疫功能低下者感染EBV后病情易惡化，病死率較高[3-4]。EBV可感染T、B淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞，引起免疫系統(tǒng)紊亂，因此宿主對EBV的免疫應(yīng)答功能狀態(tài)與感染后不同臨床表現(xiàn)、疾病轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。本研究通過檢測EBV感染引起的兒童IM和CAEBV外周血淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白的水平，并與健康兒童的相應(yīng)指標(biāo)作對比分析，旨在深化對該病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，為臨床診治提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2010年5月—2016年5月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科診治，且進(jìn)行過外周血淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白檢測的EBV感染患兒共34例，其中IM組20例、CAEBV組14例。IM、CAEBV診斷均符合《兒童主要非腫瘤性EB病毒感染相關(guān)疾病的診斷和治療原則建議》[5]。IM組納入標(biāo)準(zhǔn)：包括IM的臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)。臨床診斷：滿足下列臨床指標(biāo)中任意3項(xiàng)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)中第4項(xiàng)；實(shí)驗(yàn)室診斷：滿足下列臨床指標(biāo)中任意3項(xiàng)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)中第1～3項(xiàng)中任意1項(xiàng)。臨床指標(biāo)：(1)發(fā)熱；(2)咽扁桃體炎；(3)頸淋巴結(jié)腫大；(4)脾大；(5)肝大；(6)眼瞼水腫。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)：(1)抗EBV-病毒衣殼抗原(VCA)-IgM和抗EBV-VCA-IgG抗體陽性，且抗EBV-核抗原(NA)-IgG陰性；(2)抗EBV-VCA-IgM陰性，但EBV-VCA-IgG抗體陽性，且為低親和力抗體；(3)雙份血清抗EBV-VCA-IgG抗體滴度4倍以上升高；(4)外周血異型淋巴細(xì)胞分?jǐn)?shù)≥0.10和/或淋巴細(xì)胞計數(shù)增多≥5.0×109/L。CAEBV組納入標(biāo)準(zhǔn)：同時滿足下列(1)、(2)和(3)者，(1)IM樣癥狀持續(xù)或反復(fù)發(fā)作3個月以上；(2)EBV感染及引起組織病理損害的證據(jù)，即①血清EBV抗體滴度異常增高，包括抗VCA-IgG≥1∶640或抗EA-IgG≥1∶160，VCA-IgA和/或EA-IgA陽性；②外周血單核細(xì)胞(PBMC)中EBV-DNA水平高于1.0×102.5拷貝/μg，或血清、血漿EBV-DNA陽性；③受累組織中EBV-EBERs原位雜交或EBV-潛伏膜蛋白1(LMP-1)免疫組織化學(xué)染色陽性；(4)Southern雜交在組織或外周血細(xì)胞中檢測出EBV-DNA；(3)排除目前已知自身免疫性疾病、腫瘤性疾病以及免疫缺陷性疾病所致的上述臨床表現(xiàn)。選取體檢健康的兒童20例為對照組，對照組兒童均無急慢性疾病史及家族遺傳性疾病史。

1.3 免疫球蛋白檢測 采集清晨空腹靜脈血2 ml于干燥試管中，待凝固后3 400 r/min離心8 min(離心半徑15 cm)，立即分離血清，嚴(yán)格按照廠家說明書進(jìn)行操作，采用免疫散射比濁法檢測血清IgA、IgG、IgM水平，所用試劑由美國Beckman Coulter公司提供。

2 結(jié)果

2.1 3組性別、年齡比較 3組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

2.3 3組免疫球蛋白水平比較 3組IgM比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；3組IgA、IgG比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中IM組和CAEBV組IgA、IgG較對照組升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表3)。

表1 3組性別、年齡比較

注：IM=傳染性單核細(xì)胞增多癥，CAEBV=慢性活動性EB病毒感染；a為H值

表3 3組免疫球蛋白水平比較

注：與對照組比較，aP<0.05

表2 3組外周血血常規(guī)及淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較〔M(P25，P75),×109/L〕

注：與對照組比較，aP<0.05；與IM組比較，bP<0.05

注：IM=傳染性單核細(xì)胞增多癥，CAEBV=慢性活動性EB病毒感染，F(xiàn)ITC=異硫氰酸熒光素，APC=藻青蛋白，PE=藻紅蛋白

圖1 3組外周血淋巴細(xì)胞亞群流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果

Figure 1 Flow cytometry results of lymphocyte subsets in peripheral blood among three groups

3 討論

本研究結(jié)果表明，IM和CAEBV組患兒外周血IgA、IgG水平均明顯高于對照組，提示患兒體內(nèi)存在強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。EBV長期潛伏于人體是其致病的一個重要條件，作為抗原，EBV能通過刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，形成免疫復(fù)合物；另外，促使補(bǔ)體激活免疫細(xì)胞，引發(fā)強(qiáng)大的免疫效應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致自身免疫系統(tǒng)受損[15]。然而，這些免疫紊亂是否是由EBV感染引起的，還是患兒本身存在免疫缺陷并在EBV的誘導(dǎo)下而表現(xiàn)出來，或者還有其他目前不清楚的原因，尚待進(jìn)一步研究。

作者貢獻(xiàn)：王穎超進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理；朱桂英、張秋堂進(jìn)行研究的實(shí)施與可行性分析；李壯壯進(jìn)行數(shù)據(jù)收集；蔣蘭君進(jìn)行數(shù)據(jù)整理；朱桂英、蔣蘭君進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理；王穎超、朱桂英進(jìn)行結(jié)果的分析與解釋,論文的修訂；朱桂英撰寫論文。

本文無利益沖突。

[1]XIONG G,ZHANG B,HUANG M Y,et al.Epstein-Barr virus (EBV) infection in Chinese children:a retrospective study of age-specific prevalence[J].PLoS One,2014,9(6):e99857.DOI:10.1371/journal.pone.0099857.

[2]LENNON P,CROTTY M,FENTON J E.Infectious mononucleosis[J].BMJ,2015,350:h1825.DOI:10.1136/bmj.h1825.

[3]GAO L,AI J,XIE Z,et al.Dynamic expression of viral and cellular microRNAs in infectious mononucleosis caused by primary Epstein-Barr virus infection in children[J].Virol J,2015,12(1):208.DOI:10.1186/s12985-015-0441-y.

[4]HISLOP A D.Early vimlogical and immunological events in Epstein-Barr virus infection[J].Curr Opin Virul,2015,15:75-79.DOI:10.1016/j.coviro.2015.08.002.

[5]中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會感染學(xué)組,全國兒童EB病毒感染協(xié)作組.兒童主要非腫瘤性EB病毒感染相關(guān)疾病的診斷和治療原則建議[J].中華兒科雜志,2016,54(8)：563-568.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2016.08.002. Infection Group,Pediatrics Society,Chinese Medical Association，the National Cooperative Group of Children with EB Virus Infection.Advice on the diagnosis and treatment of major non neoplastic EB virus infection-associated diseases in children[J].Chinese Journal of Pediatrics,2016,54(8):563-568.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2016.08.002.

[6]LIMA M,TEIXEIRA MDOS A,QUEIROS M L,et al.Immunophenotype and TCR-Vbeta repertoire of peripheral blood T-cells in acute infectious mononucleosis[J].Blood Cells Mol Dis,2003,30(1):1-12.DOI:10.1016/S1079-9796(03)00014-7.

[7]WILLIAMS H,CRAWFORD D H.Epsteion-Barr virus:the impact of scientific advances on clinical practice[J].Blood,2006,107(3):862-869.DOI:10.1182/blood-2005-07-2702.

[10]黎四平,陸小梅,劉紹基,等.傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒免疫功能分析[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2012,27(16):1264-1266.DOI:10.3969/j.issn.1003-515X.2012.16.017. LI S P,LU X M,LIU S J,et al.Analysis of immune function of infectious mononucleosis in children [J].Journal of Applied Clinical Pediatrics,2012,27(16):1264-1266.DOI:10.3969/j.issn.1003-515X.2012.16.017.

[11]邢燕,宋紅梅,李太生,等.慢性活動性EB病毒感染外周血淋巴細(xì)胞免疫亞群變化特征的研究[J].中華兒科雜志,2009,47(6):441-445.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2009.06.011. XING Y,SONG H M,LI T S,et al.Characteristics of peripheral blood lymphocyte immune subsets in patients with chronic active Epstein-Barr virus infection[J].Chinese Journal of Pediatrics,2009,47(6):441-445.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2009.06.011.

[13]OHSHIMA K,KIMURA H,YOSHINO T,et al.Proposed categorization of pathological states of EBV-associated T/natural killer-cell lymphoproliferative disorder (LPD) in children and young adults:overlap with chronic active EBV infection and infantile fulminant EBV T-LPD[J].Pathol Int,2008,58(4):209-217.DOI:10.1111/j.1440-1827.2008.02213.x.

[14]邢燕,宋紅梅,吳曉燕,等.慢性活動性EB病毒感染患兒外周血單個核細(xì)胞EB病毒DNA及感染細(xì)胞類型檢測的臨床意義[J].中華兒科雜志,2011,49(7):495-500.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2011.07.004. XING Y,SONG H M,WU X Y,et al.Significance of detecting the EBV-DNA level in peripheral blood mononuclear cells and the EBV infected cell type in patients with chronic active EBV infection[J].Chinese Journal of Pediatrics,2011,49(7):495-500.DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2011.07.004.

[15]COLEMAN C B，WOHLFORD E M，SMITH N A，et al.Epstein-Barr virus type 2 latently infects T cells，inducing an atypical activation characterized by expression of lymphotactic cytokines[J].J Virol，2015,89(4):2301-2312.DOI:10.1128/JVI.03001-14.

(本文編輯：陳素芳)

R 512.7

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.17.010

2016-09-26；

2017-03-30)

1.450052河南省鄭州市，鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科

2.450052河南省鄭州市，鄭州大學(xué)血液病研究所

*通信作者：王穎超，副主任醫(yī)師，主要研究方向：兒科血液與腫瘤；E-mail：yingchaowang152@163.com