張琦雪 張曉芳 盧雪嬌

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口腔舌厚度與舌鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

張琦雪 張曉芳 盧雪嬌

目的 探討口腔舌厚度與舌鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用三步法，檢測(cè)96例舌鱗狀細(xì)胞癌患者口腔舌厚度。結(jié)果 口腔舌厚度測(cè)量值與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、侵襲深度，腫瘤分期及分化程度、是否轉(zhuǎn)移等并不存在相關(guān)性(P>0.05)；而淋巴結(jié)受累者口腔舌厚度測(cè)量值明顯上調(diào)(P<0.05)，而無(wú)淋巴結(jié)受累者其測(cè)量值與正常組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，口腔舌厚度測(cè)量值的增加與淋巴結(jié)受累有關(guān)。結(jié)論 口腔舌厚度測(cè)量值水平與舌鱗狀細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有一定的相關(guān)性，但還需進(jìn)一步系統(tǒng)研究。

舌鱗狀細(xì)胞癌；預(yù)后；不同口腔舌厚度；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；相關(guān)性

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1162～1164)

舌鱗狀細(xì)胞癌占全身惡性腫瘤發(fā)病率的第六位，多數(shù)患者患病后初次就診已經(jīng)伴有廣泛的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者遠(yuǎn)端的轉(zhuǎn)移，就已處于該病的晚期，失去根治手術(shù)的機(jī)會(huì)，耽誤了治療的最佳時(shí)機(jī)，早期診斷對(duì)疾病的及時(shí)發(fā)現(xiàn)及治療具有重要的臨床意義，從而盡可能避免對(duì)患者的過(guò)度治療或延誤治療[1-2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在不同口腔舌厚度在癌瘤區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中具有重要的作用[3]，臨床中我們發(fā)現(xiàn)在舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病中存在不同口腔舌厚度增厚。本研究收集舌鱗狀細(xì)胞癌患者不同口腔舌厚度的表達(dá)情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移資料，通過(guò)分析舌鱗狀細(xì)胞癌癌瘤區(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后與不同口腔舌厚度的演變規(guī)律，進(jìn)一步探討舌鱗狀細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)后情況。

1 資料與方法

1.1 病例收集

納入我院口腔外科2012年1月至2015年1月行舌鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除的96例患者病例樣本，經(jīng)病理檢查均確診為原發(fā)性舌鱗狀細(xì)胞癌，納入研究的所有患者均為初診的患者，且在術(shù)前未進(jìn)行任何放療、化療及分子靶向治療等。96例中男性74例，女性22例，年齡42～78歲，平均年齡為(61.34±1.13)歲。在術(shù)中取材之后，腫瘤的位置以病理組織報(bào)告為標(biāo)準(zhǔn)，患者入組后進(jìn)行口腔舌厚度的測(cè)量，同時(shí)進(jìn)行病理學(xué)的監(jiān)測(cè)，對(duì)舌鱗狀細(xì)胞癌組織的病理學(xué)進(jìn)行分型，腫瘤的浸潤(rùn)程度按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)分類[4]，淋巴分化以及轉(zhuǎn)移采用的國(guó)際WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]進(jìn)行分析判斷，對(duì)所有手術(shù)治療的患者從出院到死亡進(jìn)行隨訪觀察，每月1次。同時(shí)納入健康人群23例作為對(duì)照組，所有受試者簽訂知情同意書，收集標(biāo)本前該臨床試驗(yàn)研究通過(guò)了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 口腔舌厚度測(cè)量

口腔舌厚度參照國(guó)際測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)，舌厚度為舌癌組織上皮到最深肌肉及基質(zhì)的長(zhǎng)度，對(duì)于舌癌組織形成潰瘍的患者，測(cè)量的厚度應(yīng)當(dāng)為潰瘍底到舌癌最深的部位。

1.3 RNA提取及qPCR檢測(cè)

對(duì)96例舌鱗狀細(xì)胞癌組織采用RNA提取試劑盒進(jìn)行RNA提取，采用TaqMan RNA試劑盒檢測(cè)不同口腔舌厚度的VEGF測(cè)量值。采用RNU6作為內(nèi)參進(jìn)行校正。對(duì)口腔舌厚度采用二步法進(jìn)行檢測(cè)，第一步是通過(guò)莖環(huán)引物來(lái)合成互補(bǔ)DNA，再通過(guò)RNA的逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)對(duì)10 ng RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)了反應(yīng)體系進(jìn)行反應(yīng)，在PCR管加入10 μl的逆轉(zhuǎn)錄緩沖液，總的RNA濃度調(diào)整到2 ng/μl，最后加入5 μl的逆轉(zhuǎn)錄引物，在冰上混勻之后反應(yīng)5 min，行梯度變形反應(yīng)，反應(yīng)條件為94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、60 s，72 ℃、7 min，一次遞減；第二步采用Platinum SYBR Green qPCR的反應(yīng)體系，該體系具體形式：Taqman RNA的特異性引物與2×Taqman Universal混合液相互混合之后通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)，再加入5 μl cDNA到RNA的酶溶液中，將體積擴(kuò)增至20 μl，通過(guò)循環(huán)反應(yīng)94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、60 s，72 ℃、7 min，遞減的擴(kuò)張40個(gè)循環(huán)之后，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，采用熒光實(shí)時(shí)定量反應(yīng)，按照PCR操作說(shuō)明，Ct的檢測(cè)值應(yīng)當(dāng)在20～32之外的需要進(jìn)行第2次檢測(cè)。應(yīng)用△Ct=Ct不同口腔舌厚度-CtRNU6的計(jì)算公式計(jì)算不同口腔舌厚度的VEGF測(cè)量值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)

所有納入分析研究的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 21.0的統(tǒng)計(jì)軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，將不同口腔舌厚度分為2組，小于平均值為低表達(dá)組，大于平均值作為高表達(dá)組。通過(guò)分析不同口腔舌厚度與發(fā)病相關(guān)因素分析以逐步回歸法篩選有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量，對(duì)臨床病理因素之間的風(fēng)險(xiǎn)情況采用logistic回歸分析，組間比較用方差分析，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，組間率的比較用卡方檢驗(yàn)，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。應(yīng)用Kruskal-wallis H檢驗(yàn)進(jìn)行多組間數(shù)據(jù)的比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的以P<0.05表示。

2 結(jié)果

2.1 口腔舌厚度測(cè)量值與舌鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的相關(guān)性

96例舌鱗狀細(xì)胞癌組織口腔舌平均厚度為5.436 mm，95%CI為0.323～0.534。測(cè)量值低于平均值的有42例，高于平均值的有54例，口腔舌厚度測(cè)量值與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、侵襲深度、腫瘤分期、分化程度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等無(wú)相關(guān)性(P>0.05)；而淋巴結(jié)受累者口腔舌厚度測(cè)量值明顯上調(diào)(P<0.05)，而無(wú)淋巴結(jié)受累者其測(cè)量值與正常組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，見(jiàn)表1。

表1 口腔舌厚度測(cè)量值與舌鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的相關(guān)性

2.2 口腔舌厚度測(cè)量值與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

采用logistic回歸分析口腔舌厚度測(cè)量值與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，口腔舌厚度測(cè)量值上升會(huì)增加舌鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)性，通過(guò)調(diào)整風(fēng)險(xiǎn),其OR=5.16，95%CI為1.27～20.83，P=0.03，見(jiàn)表2。

表2 口腔舌厚度測(cè)量值與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

2.3 口腔舌厚度與VEGF表達(dá)相關(guān)性

口腔舌厚度與VEGF表達(dá)具有相關(guān)性，見(jiàn)表3。

表3 舌鱗狀細(xì)胞癌患者口腔舌厚度與VEGF表達(dá)的關(guān)系

3 討論

近年來(lái)舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，雖然治療水平不斷提高，但是患者的生存率并未得到明顯提高，其轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)仍是其死亡的主要原因[4]。國(guó)內(nèi)外目前對(duì)舌鱗狀細(xì)胞癌的診斷研究主要集中在病因?qū)W、遺傳基因、早期診斷手段的研究，治療方面研究主要集中在放射、化學(xué)以及手術(shù)方法改進(jìn)等方面，雖然取得了一定進(jìn)展，但該病的發(fā)病率及死亡率并未得到明顯降低，說(shuō)明研究的深度尚不足，研究還處于基礎(chǔ)階段尚未應(yīng)用于臨床。由于舌鱗狀細(xì)胞癌作為惡性腫瘤，對(duì)人類生命具有重大的威脅[5-6]。因此，進(jìn)一步尋找有關(guān)舌鱗狀細(xì)胞癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移生物標(biāo)記物及敏感特異是該病有效治療、提高生存率的關(guān)鍵點(diǎn)。其次做好舌鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病的預(yù)防及早期發(fā)現(xiàn)，減少其發(fā)病率和轉(zhuǎn)移率，是今后研究的重要方向[7]。

臨床實(shí)踐研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)早期舌鱗狀細(xì)胞癌在發(fā)病的初期并無(wú)明顯的臨床癥狀，在首次就診時(shí)大部分舌鱗狀細(xì)胞癌患者已經(jīng)進(jìn)入中晚期，因此舌鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后極差，生存率較低[8]。通過(guò)大量的臨床研究發(fā)現(xiàn)，舌癌淋巴轉(zhuǎn)移是重要的轉(zhuǎn)移方式，然而對(duì)其診斷方面并無(wú)有效的早期診斷指標(biāo)，因此尋找早期診斷舌癌轉(zhuǎn)移的有效方法是當(dāng)今口腔腫瘤亟待解決的問(wèn)題[9]。近年來(lái)的研究直接對(duì)癌組織淋巴浸潤(rùn)深度及病理分級(jí)作為評(píng)估淋巴轉(zhuǎn)移的有效方法，但是該方法存在較大的主觀性，對(duì)評(píng)估結(jié)果造成一定的誤差，因此對(duì)臨床疾病的診斷并不為良好的方法[10]。部分研究通過(guò)采用術(shù)前的MRI檢測(cè)，但該項(xiàng)操作價(jià)格昂貴，操作復(fù)雜，因此不適于普通人群的檢測(cè)[11]。我們通過(guò)長(zhǎng)期的臨床觀察發(fā)現(xiàn)，口腔舌厚度對(duì)疾病的發(fā)展具有一定的預(yù)測(cè)作用，而有關(guān)口腔舌厚度與預(yù)后的關(guān)系鮮見(jiàn)報(bào)道。因此我們通過(guò)本研究以探討兩者之間的相關(guān)性。

腫瘤轉(zhuǎn)移是1個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，有賴于新生血管的生成，不同口腔舌厚度具有增強(qiáng)微血管通透性，為腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移提供條件，刺激內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)腫瘤血管生成。腫瘤細(xì)胞中不同VEGF的水平上調(diào)，具有促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)的作用[12-13]。本研究通過(guò)分析不同口腔舌厚度在舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)與VEGF和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及舌鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系，為舌鱗狀細(xì)胞癌的抗血管生成治療研究提供理論依據(jù)。結(jié)果顯示，不同口腔舌厚度測(cè)量值與患者的一般資料如年齡、性別、以及腫瘤的特征如大小、發(fā)病的部位、侵襲深度，腫瘤的分期及分化程度、是否轉(zhuǎn)移等并不存在相關(guān)性；而淋巴受累方面，淋巴受累組的不同口腔舌厚度測(cè)量值明顯上調(diào)，不同口腔舌厚度測(cè)量值明顯上調(diào)與淋巴結(jié)受累轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同口腔舌厚度與VEGF差異表達(dá)具有相關(guān)性，對(duì)早期舌鱗狀細(xì)胞癌的診斷具有一定的作用。

綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)口腔舌厚度在舌鱗狀細(xì)胞癌具有相關(guān)性，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有著密切的相關(guān)性，提示口腔舌厚度可能與舌鱗狀細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移侵襲等影響預(yù)后的因素有關(guān)，該VEGF差異性表達(dá)推測(cè)可能是舌鱗狀細(xì)胞癌早期的潛在靶點(diǎn)，但是本研究不足的是病例數(shù)還較少，不同口腔舌厚度在舌鱗狀細(xì)胞癌中的作用機(jī)制和靶基因生物學(xué)預(yù)測(cè)和闡明有待于進(jìn)一步研究。

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(編輯：吳小紅)

Relationship between Oral Tongue Thickness and Lymph Node Metastasis of Tongue Squamous Cell

ZHANGQixue,XIAOFangzhang,LUXuejiao.OralCavityHospitalAffiliatedtoChinaMedicalUniversity,Shenyang,110000

Objective To study the thickness of the tongue and oral tongue squamous cell carcinoma lymph node metastasis and prognosis.Methods The tongue thickness of 96 patients with squamous cell carcinoma was detected by 3 steps.Results

There was no correlation between the measured values of oral tongue thickness and the age,sex,tumor size,tumor location,depth of invasion,tumor stage and degree of differentiation,whether metastasis or not (P>0.05),and the thickness of oral tongue was significant (P<0.05).There was no significant difference between the measured values and the normal group (P>0.05).The increase of oral tongue thickness was related to lymph node involvement.Conclusion Oral tongue thickness measurement and level tongue squamous cell carcinoma with lymph node metastasis and prognosis of relevant,but need to be further studied.

Squamous cell carcinoma;Prognosis;Different oral tongue thickness;Lymph node metastasis;Correlation

110000 遼寧省沈陽(yáng)市中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.036

R739.86

A

1001-5930(2017)07-1162-03

2016-08-08

2017-04-10)