彭 卓 牛澤群 萬 林 王 妮 楊拴盈

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長鏈非編碼RNA MALAT1與非小細胞肺癌患者腫瘤復發(fā)和預后的相關性研究

彭 卓 牛澤群 萬 林 王 妮 楊拴盈

目的 研究長鏈非編碼RNA MALAT1與非小細胞肺癌患者腫瘤復發(fā)和預后的相關性。方法 選擇原發(fā)性非小細胞肺癌患者60例，取其腫瘤組織及癌旁組織，應用RT-PCR技術測定原發(fā)性非小細胞肺癌腫瘤組織中MALAT1的表達情況，分析MALAT1表達與非小細胞肺癌患者術后復發(fā)及總體生存預后的關系。結果 與癌旁組織相比，肺癌組織中MALAT1表達量顯著升高(P<0.05)。MALAT1 表達與患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)量、腫瘤分期、腫瘤分化程度以及術前甲胎蛋白水平等無顯著相關性；Cox 回歸分析結果顯示，腫瘤直徑>5 cm、有血管侵犯、術前AFP含量≥400 ng/ml 以及高MALAT1表達量是影響患者術后復發(fā)和總生存的高危因素(P<0.05)。結果 MALAT1 在非小細胞肺癌中表達量高與非小細胞肺癌手術后腫瘤復發(fā)和預后有顯著關系，可為非小細胞肺癌患者的復發(fā)和預后提供參考，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。

長鏈非編碼RNA；非小細胞肺癌；復發(fā)；預后

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1056～1058)

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，其病死率位列惡性腫瘤之首。其中約80%左右的患者患有非小細胞肺癌(NSCLC)。NSCLC是全球多發(fā)性的惡性腫瘤，病死率高[1]。因此，尋找1種分子標志物，有效提高早期診斷率、指導治療及預后是目前亟待解決的問題。有研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA參與到基因調控的各個過程，與非小細胞肺癌的發(fā)生及其各個發(fā)展階段有關[2]。本研究通過檢測長鏈非編碼RNA MALAT1在非小細胞肺癌患者的表達情況，擬探討長鏈非編碼RNA MALAT1與NSCLC的復發(fā)與預后的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年1月至2014年12月來我院診治的原發(fā)性非小細胞肺癌患者60例，收集其肺癌組織及其相應的癌旁組織。納入標準：①通過手術病理檢測確診為非小細胞肺癌患者；②術前未接受過化療或分子靶向治療；③病例資料完整；④入組患者均簽署知情同意書。排除標準：①嚴重器官功能障礙者；②患有自身免疫性疾??；③病毒性感染者；④精神疾病患者。其中男性38例，女性22例，年齡38～80歲，平均年齡(48.7±7.8)歲；其中單發(fā)腫瘤24例，多發(fā)腫瘤36例；血管侵染者23例，未發(fā)生血管侵染者37例；按美國癌癥聯(lián)合委員會的癌癥分期標準：Ⅰ期12例，Ⅱ期20例，Ⅲ期28例；病理分化程度，高分化和中分化共48例，低分化12例；術前甲胎蛋白(AFP)<400 ng/ml 29例，AFP≤400 ng/ml 31例；復發(fā)患者37例，未復發(fā)者23例。所有研究內容均符合本院倫理委員會制定的標準。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 所有患者均行根治術，術后切除的組織立即放入液氮中，隨即轉到-80 ℃冰箱中保存，整個過程應按照無酶的原則進行操作。術后對行根治術的患者進行隨訪，中位隨訪時間為36.8個月。

1.2.2 試劑與儀器 lncRNA MALAT1 引物、GAPDH引物及Triazol 購于美國Invitrogen 公司。RNA逆轉錄試劑盒、PCR試劑盒、RNA酶抑制劑、dNTPs SYBR Mastermix購自大連TaKaRa 公司。

1.2.3 實時定量PCR 取凍存的標本各50 mg 磨成粉末，加入購買好的RNA提取物抽提RNA，抽提時每1×107個細胞中加入1 ml提取液。嚴格按照說明書的要求進行操作。抽提后，用分光光度計對抽提出的RNA進行測定，確定RNA的質量。取1 ng～1 μg RNA，按照試劑說明書要求對RNA進行逆轉錄生成cDNA。實時定量PCR采用Power SEBR Green PCR Master試劑盒及德國Eppendorf公司生產的PCR儀，按照說明書制備反應體系并進行PCR擴增。收集每份檢測樣品的CT值結果，并設定內參GAPDH，依據(jù)標準計算方法對NSCLC中相關轉錄因子(MALAT1)的表達量進行相對定量分析。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 17.0對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示，患者累計生存時間以Kaplan-Meier 法計算，生存分析采用Log-rank 計算法；風險分析采用Cox比例分析回歸模型；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學差異。

2 結果

根據(jù)MALAT1表達量，將NSCLC患者分為MALAT1高表達組(為MALAT1>0.40)及MALAT1低表達組(MALAT1≤0.40)。

2.1 MALAT1 表達量與NSCLC臨床病理的關系

研究發(fā)現(xiàn)：MALAT1表達與患者年齡、腫瘤直徑、血管是否受侵染、腫瘤分期、腫瘤病理分化程度、腫瘤數(shù)量以及甲胎蛋白含量無顯著相關性，見表1。

表1 MALAT1表達與NSCLC臨床病理特征的關系/例

2.2 非小細胞肺癌組織及癌旁組織中MALAT1的表達情況

MALAT1在非小細胞肺癌組織中的表達量為0.54±0.10，癌旁組織中其表達量為0.2±0.07，結果表明，與癌旁組織比較，肺癌組織中其表達水平顯著增高(P<0.05)。

2.3 非小細胞肺癌組織中MALAT1表達與患者術后復發(fā)和預后的關系

結果表明：與MALAT1低表達患者相比，MALAT1高表達的患者預后更差。MALAT1表達量低，患者術后第1、3、5年的無復發(fā)生存率，顯著高于MALAT1表達量高患者，見表2。

表2 MALAT1表達與NSCLL患者術后無復發(fā)生存率的關系/%

2.4 術后腫瘤復發(fā)與總生存的多因素分析

多因素Cox回歸分析結果表明，腫瘤直徑>5 cm、血管被侵犯、術前甲胎蛋白含量≥400 μg/L 以及MALAT1表達量高是非小細胞肺癌患者手術后復發(fā)和預后差的危險因素，見表3。

表3 非小細胞肺癌患者術后腫瘤復發(fā)多因素分析結果

3 討論

非小細胞肺癌主要包括3種類型：肺鱗癌、肺腺癌以及大細胞肺癌。根治性手術、放射療法以及與順鉑聯(lián)合化療是目前治療非小細胞肺癌的主要方法。但這些方法通常不能根治非小細胞肺癌，很難達到預想的治療效果，預后較差[3]。因此，提高非小細胞肺癌患者的總生存率，應從其發(fā)病機制進行深入探索，從而在惡性腫瘤發(fā)生增殖和侵襲轉移前對其進行抑制[4-6]。ENCODE項目研究組對人類基因組調節(jié)和結構組成進行了長時間的研究，結果表明僅有1.5%的基因組中能夠編碼蛋白質的序列，以前的研究中表明其余的序列為無用的[7]。但最新研究表明這些序列絕大部分都可以被轉錄生成非編碼RNA[8]。目前人們對其研究進展十分關注，因此不少學者對長鏈非編碼RNA的生物學功能及其作用機制進行進一步研究。長鏈非編碼RNA的長度大約為200nt，一般不編碼蛋白或編碼蛋白極少，其主要是通過表觀遺傳學、轉錄以及轉錄后調控等形式調控靶基因的表達，在腫瘤生成的過程中占重要的地位[9-10]。最初的研究發(fā)現(xiàn)，MALAT1的表達量在不同類型的肺癌中存在差異，研究者認為MALAT1在腫瘤的侵襲和轉移等發(fā)展過程中起著重要作用?？偠灾?，長鏈非編碼RNA 主要是表現(xiàn)為癌基因或抑癌基因的生物學作用，可促進或抑制腫瘤細胞的生長。

本研究探討MALAT1 在非小細胞肺癌組織樣本及癌旁組織中的表達情況，通過RT-PCR法對樣本中的MALAT1的定量檢測發(fā)現(xiàn)：與癌旁組織相比，MALAT1在肺癌組織中的表達量顯著升高(P<0.05)。這一結果提示MALAT1的表達情況與非小細胞肺癌的產生、惡化以及復發(fā)有一定相關性，為肺癌患者臨床診斷、預測腫瘤復發(fā)率提供依據(jù)。本研究對MALAT1的表達情況與患者臨床病理特征進行相關性分析，結果表明，MALAT1表達情況與患者年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)目、腫瘤分期、血管是否侵染、病理分化程度以及甲胎蛋白含量等無顯著相關性，這一結果提示，MALAT1與臨床病理特征因素無關，是NSCLC的一個獨立指標。多因素Cox回歸分析結果表明，可預測患者術后復發(fā)和預后的因素包括：腫瘤直徑大、數(shù)量多、出現(xiàn)血管侵襲及MALAT1表達量高。MALAT1 是預測術后復發(fā)和預后的獨立危險因素。

由此得出，長鏈非編碼RNA MALAT1表達量過高時可以提示NSCLC的復發(fā)和預后，其與患者預后有顯著相關關系，是影響患者術后復發(fā)及總生存率的獨立危險因素。

[1] 陳 璇,周光華.3D-CRT低劑量區(qū)V5體積的大小對非小細胞肺癌患者肺功能的影響〔J〕.湖南師范大學學報(醫(yī)學版),2016,13(2):46-48.

[2] 黃友為,周光華.TGFβ1 T29C多態(tài)性與NSCLC易感性及放射敏感性的相關性研究〔J〕.湖南師范大學學報(醫(yī)學版),2014,11(1):34-37.

[3] 徐麗娟,劉 華,李 進,等.?？颂婺岷图翘婺嵋痪€治療晚期非小細胞肺癌患者的療效觀察〔J〕.湖南師范大學學報(醫(yī)學版),2015,12(6):94-97.

[4] Osarogiagbon RU,Lin CC,Smeltzer MP,et al.Prevalence,prognostic implications,and survival modulators of incompletely resected non-small cell lung cancer in the US National Cancer Data Base〔J〕.J Thorac Oncol,2016,11(1):e5-e16.

[5] Pilyugin M,lrminger Finger I.Long non-coding RNA and micro-RNAs might act in Regulating the expression of BARDl mRNAs〔J〕.Int J Biochem Cell Biol,2014,54(12):356-367.

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[7] Wen W,Lu L,He Y,et al.LincRNAs and base modifications ofp53inducedbyarsenicmethylationin workers〔J〕.Chem Biol Interact,2016,246(1):1-10.

[8] Verdecchia A,Francisci S,Brenner H,et al.EUROCARE 4Working Group.Recent cancer survival in Europe:a 2000-02 period analysis of EUROCARE 4 data〔J〕.Lancet Oncol,2007,8(9):784-796.

[9] 周 鵬,張晗婕,劉向華.長鏈非編碼RNA:非小細胞肺癌研究的一個新領域?〔J〕.臨床腫瘤學雜志,2015,20(3):266-270.

[10] 張澤雨,易升明,張 巖.長鏈非編碼RNA HOTAIR在非小細胞肺癌中的表達及意義〔J〕.臨床肺科雜志,2015,20(1):102-105.

(編輯：吳小紅)

The Predicting Effect of Long Chain Non-coding RNA MALAT1 on Tumor Recurrence and Patient’s Prognosis for Non-small Cell Lung Cancer

PENGZhuo,NIUZequn,WANLin,etal.SecondAffiliatedHospitalofXi'anJiaoTongUniversity,Xi'an,710004

Objective To investigate the relationship of long chain non-encoding RNA in the patients with non-small cell lung cancer.Methods 60 cases of primary NSCLC patients accepted were selected,and tumor tissues and the corresponding paracarcinoma tissues were collected.The expression of MALAT1 in tissues from these patients was determined by quantitative real-time poly merase chain reaction.The correlation between MALAT1 expression and the recurrence of NSCLC and overall survival prognosis after surgery were analyzed.Results MALAT1 expression in NSCLC was up-regulated,and it was also up-regulated in patients with NSCLC recurrence.Compared with the MALAT1 expression in corresponding paracarcinoma tissues,the MALAT1 expression was obviously higher in NSCLC tissues.The expression of MALAT1 was not significantly correlated with age,tumor diameter,tumor number,tumor TNM stage,vascular invasion,pathological differentiation and preoperative AFP content.Cox regression analysis showed that tumor diameter greater than 5 cm,multiple tumor vascular invasion,AFP content which was more than or equal to 400 μg/L,and higher expression of MAIAT1 were the main risk factors affecting recurrence and overall survival of NSCIC patients after surgery(P<0.05).Conclusion The up-expression of MALAT1 in NSCLC could be a promising biomarker to predict the tumor recurrence and prognosis of patients with NSCIC,and it could be used for providing a evidence of the recurrence and prognosis of patients with NSCIC,and a basis for clinical diagnosis and treatment.

Long chain non-coding RNA;Non-small cell lung cancer;Recurrence;Prognosis

710004 西安交通大學第二附屬醫(yī)院

楊拴盈

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.004

R734.2

A

1001-5930(2017)07-1056-03

2017-02-22

2017-04-20)