劉兆良++袁忠林++羅蘭

摘要：為明確供試的8種殺菌劑防治黃瓜細(xì)菌性角斑病的效果，采用含毒介質(zhì)法、瓊脂擴(kuò)散法和盆栽法測定了8種殺菌劑對(duì)丁香假單胞桿菌的最小抑菌濃度（MIC）、抑菌圈大小及保護(hù)和治療效果。結(jié)果表明，0.3%四霉素AS、80%乙蒜素EC、5%中生菌素WP、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP、20%乙酸銅WP和46%可殺得叁千WG的MIC分別為20、80、200、400、800 mg/L和2 000 mg/L。當(dāng)濃度為400 mg/L時(shí)，0.3%四霉素AS、5%中生菌素WP、20%乙酸銅WP和80%乙蒜素EC的抑菌圈直徑分別為1.75、1.33、0.93 cm和0.90 cm。盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，保護(hù)作用好于治療作用，其中20%噻菌銅SC、46%可殺得叁千WG、5%中生菌素WP、20%乙酸銅WP和72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP在濃度200～400 mg/L時(shí)，保護(hù)作用的防治效果分別為78.9%～82.2%、78.1%～81.0%、69.7%～78.3%、61.7%～63.1%和57.1%～65.0%。綜合考慮，20%噻菌銅SC、46%可殺得叁千WG、5%中生菌素WP、20%乙酸銅WP和72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病有較好的防治效果。

關(guān)鍵詞：黃瓜細(xì)菌性角斑?。粴⒕鷦?；MIC；防效

中圖分類號(hào)：S436.421.1+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2017）06-0107-05

AbstractIn order to screen the commercial bactericides for effectively controlling cucumber bacterial angular leaf spot， the MIC， inhibition zone and preventative and therapeutic effects of 8 bactericides were detected by toxic media method and disk diffusion method in laboratory and pot method in greenhouse. The results showed that the MIC of 0.3% tetramycin AS， 80% ethylicin EC， 5% zhongshengmycin WP， 72% streptomycin sulphate SP， 20% copper acetate WP and 46% kocide 3 000 WG was 20， 80， 200， 400， 800 and 2 000 mg/L， respectively. The inhibition zone width of 0.3% tetramycin AS， 5% zhongshengmycin WP， 20% copper acetate WP and 80% ethylicin EC was 1.75， 1.33， 0.93 and 0.90 cm at the concentration of 400 mg/L， respectively. The pot experiments showed that the preventative effect was better than therapeutic effect. The preventative efficacy of 20% thiodiazole-copper SC， 46% kocide 3 000 WG， 5% zhongshengmycin WP， 20% copper acetate WP and 72% streptomycin sulphate SP was 78.9%～82.2%， 78.1%～81.0%， 69.7%～78.3%， 61.7%～63.1% and 57.1%～65.0% at the concentration of 200～400 mg/L， respectively. Comprehensively considering， 20% thiodiazole-copper SC， 46% kocide 3 000 WG， 5% zhongshengmycin WP， 20% copper acetate WP and 72% streptomycin sulphate SP had effective control effect on cucumber bacterial angular leaf spot.

KeywordsCucumber bacterial angular leaf spot； Bactericide； MIC； Control effect

黃瓜細(xì)菌性角斑病是由丁香假單胞桿菌黃瓜致病變種（Pseudomonas syringae pv.lachrymans）引起的細(xì)菌性病害，于20世紀(jì)初首次被Carsener等[1]報(bào)道。自20世紀(jì)50年代該病害在中國就有了發(fā)生記載，但后續(xù)研究報(bào)道較少，直到七八十年代在東北三省和北京郊區(qū)的大發(fā)生，才引起人們重視[2]。20世紀(jì)80—90年代，美國[3]、日本[4]和埃及[5]等地因?yàn)榧?xì)菌性角斑病遭受了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著保護(hù)地面積的增大，栽培環(huán)境條件有利于細(xì)菌性病害的發(fā)生流行，黃瓜細(xì)菌性角斑病有逐年加重的趨勢(shì)[6]。該病發(fā)病時(shí)間短，擴(kuò)展蔓延速度非?？欤谶m宜發(fā)病條件下，只需7～10天，除頂端嫩葉外，可使黃瓜整株葉片枯死，葉片干枯卷曲脫落，果實(shí)腐爛，造成損失達(dá)50%以上[7，8]，嚴(yán)重威脅黃瓜安全生產(chǎn)。如何有效控制該病害的蔓延已成為生產(chǎn)中的突出問題。

在黃瓜細(xì)菌性角斑病防治方面，目前主要采取選種抗病品種[9]、加強(qiáng)栽培管理、化學(xué)防治和生態(tài)防治[10]等措施，但化學(xué)防治仍是目前最直接、最簡便、最有效的手段。國內(nèi)防治主要有銅制劑[11-13]、抗生素類及各種復(fù)配劑[14，15]的研究報(bào)道，另外，還有生物源殺菌劑[16，17]和微生物生防菌[18]的篩選研究。目前黃瓜細(xì)菌性角斑病的用藥較為混亂，且尚缺乏系統(tǒng)研究，為進(jìn)一步探究黃瓜細(xì)菌性角斑病的化學(xué)防治技術(shù)，本文選擇20%噻菌銅SC、46%可殺得叁千WG、5%中生菌素WP等 8種不同類型的殺菌劑，采用瓊脂擴(kuò)散法和抑菌圈法測定其對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的MIC和抑菌效果，結(jié)合溫室盆栽試驗(yàn)，篩選對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病有較好防治效果的殺菌劑，為該病的防治提供技術(shù)指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1材料

供試藥劑：5%中生菌素WP（福建凱立生物制品有限公司）；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP（華北制藥有限公司）；80%乙蒜素EC（德州祥龍生化有限公司）；0.3%四霉素AS（遼寧微科生物工程有限公司）；20%噻菌銅SC（浙江龍灣化工有限公司）；20%葉唑枯WP（一帆生物科技集團(tuán)有限公司）；46%可殺得叁千WG（上海杜邦農(nóng)化有限公司）；20%乙酸銅WP（山東濰坊雙星農(nóng)藥有限公司）。以上藥劑均為市售產(chǎn)品。

靶標(biāo)菌種：丁香假單胞桿菌（Pseudomonas syringae pv. lachrymans），青島農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與植物保護(hù)學(xué)院農(nóng)藥學(xué)教研室于4℃冰箱保存，試驗(yàn)前接種至King B培養(yǎng)基上26℃恒溫培養(yǎng)，備用。

供試黃瓜品種：魯黃瓜3號(hào)，購于城陽種子市場。采用基質(zhì)育苗，待幼苗長至2～3葉期，用于試驗(yàn)。

儀器：GXZ智能光照培養(yǎng)箱，寧波江南儀器廠；LCT-29C-A超凈化工作臺(tái)，濟(jì)南綠之潔科技有限公司；GI54T立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器，致微（廈門）儀器有限公司；DHG-9245A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海柏欣儀器設(shè)備廠；MGC-250BP-2光照培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；BCD-649WE冰箱，青島海爾股份有限公司。

1.2方法

1.2.18種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌最小抑制濃度采用含毒介質(zhì)法測定8種殺菌劑對(duì)靶標(biāo)菌的最小抑制濃度（MIC）[19]。在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將各待測藥劑稀釋成4個(gè)濃度梯度（表1），分別取1 mL稀釋液加入融化冷卻至40～50℃的49 mL KBM培養(yǎng)基中充分混勻，制成含毒平板，然后將培養(yǎng)24 h的靶標(biāo)菌劃“Z”形線接入，每濃度重復(fù)3次，對(duì)照加入1 mL無菌水，培養(yǎng)皿用封口膜封口，置于27℃恒溫箱中培養(yǎng)48 h后檢查菌落生長情況。接菌點(diǎn)沒有生長或看不見菌落，為抑制生長，用“-”表示，該濃度就用“C-”表示；接菌點(diǎn)只要有生長，無論菌落直徑大小都用“+”表示，該濃度用“C+”表示。

1.2.28種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的抑菌作用采用瓊脂擴(kuò)散法[18]測定8種殺菌劑對(duì)靶標(biāo)菌的抑制作用。分別將5%中生菌素WP、0.3%四霉素AS、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP、80%乙蒜素EC和20%乙酸銅WP設(shè)置4個(gè)濃度800、400、200、100 mg/L；將46%可殺得叁千WG、20%噻菌銅SC和20%葉唑枯WP設(shè)置4個(gè)濃度4 000、2 000、1 000、500 mg/L。將靶標(biāo)菌均勻涂布在直徑為9 cm的KBM平板上，取6 mm滅菌濾紙片分別置于平板中心和距中心2.5 cm的等距離分布的4個(gè)點(diǎn)處，用移液槍量取20 μL的藥液加在濾紙片上，使濾紙片潤濕平展在培養(yǎng)基上，中心點(diǎn)以無菌水為對(duì)照。放入27℃培養(yǎng)箱中，48 h后采用十字交叉法測量抑菌圈直徑。

1.2.38種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病防治效果盆栽試驗(yàn)方法[17]：黃瓜種催芽24 h后選取發(fā)芽整齊一致的種子單粒種植在苗杯中，共100株，進(jìn)行正常管理，待幼苗長至2～3片真葉時(shí)用于試驗(yàn)。（1）保護(hù)作用試驗(yàn)：將殺菌劑藥液均勻噴灑黃瓜苗葉片，24 h后接種黃瓜細(xì)菌性角斑病病原菌菌懸液。（2）治療作用試驗(yàn)：將黃瓜細(xì)菌性角斑病菌懸液噴霧接種黃瓜葉片，24 h后用上述藥液進(jìn)行葉面噴霧防治。每藥劑設(shè)200 mg/L和400 mg/L兩個(gè)濃度，每濃度處理10株黃瓜苗，重復(fù)3次，設(shè)清水為空白對(duì)照，接種后保濕48 h。接種后10天進(jìn)行防治效果調(diào)查。

黃瓜細(xì)菌角斑病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[20]：0級(jí)：全葉無病；1級(jí)：有很少病斑，占葉面積1/5 以下；2級(jí)：少數(shù)小斑，占葉面積的1/5～1/3；3級(jí)：許多病斑，占葉面積1/3～2/3；4級(jí)：許多中等大小病斑，占葉面積2/3以上，細(xì)菌溢量中度；5級(jí)：全葉發(fā)病，細(xì)菌溢量多，部分病斑干枯形成穿孔。

病情指數(shù)=∑（各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)應(yīng)級(jí)數(shù)值）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×5）×100；

防治效果（%）=（對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100。

1.3數(shù)據(jù)分析

用 SPSS 21.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，比較各處理間的差異顯著性。

2結(jié)果與分析

2.18種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的最小抑制濃度（MIC）

不同殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的抑制效果差異很大。抑菌效果最好的藥劑是0.3%四霉素AS，最小抑制濃度為20 mg/L；80%乙蒜素EC次之，最小抑制濃度為80 mg/L；再次為5%中生菌素WP，最小抑制濃度為200 mg/L；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP和20%乙酸銅WP的最小抑制濃度分別為400 mg/L和800 mg/L；46%可殺得叁千WG抑菌效果較差，最小抑菌濃度達(dá)到2 000 mg/L；20%葉唑枯WP和20%噻菌銅SC最小抑制濃度大于2 000 mg/L（表1）。

2.28種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的抑制效果

由表2可見，8種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的抑制效果差異較大。當(dāng)濃度為100 mg/L時(shí)，0.3%四霉素AS的抑菌圈最大，為1.27 cm；5%中生菌素WP次之，抑菌圈0.93 cm（見圖1）；80%乙蒜素EC和20%乙酸銅WP的抑菌圈0.67 cm；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP無抑菌圈。隨著濃度增加，抑菌圈增大。當(dāng)濃度為800 mg/L時(shí)，抑菌順序?yàn)?.3%四霉素AS>5%中生菌素WP>80%乙蒜素EC>20%乙酸銅WP>72%農(nóng)用鏈霉素SP。46%可殺得叁千WG、20%噻菌銅SC和20%葉唑枯WP在供試濃度沒有抑菌圈（未列出）。

2.38種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病的防治效果

表3盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示，8種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病均有一定保護(hù)作用，但差異很大。當(dāng)濃度為200 mg/L時(shí)，20%噻菌銅SC和46%可殺得叁千WG的保護(hù)作用最好，防效分別為78.9%和78.1%；其次為5%中生菌素WP，防效為69.7%；20%乙酸銅WP和72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP防效分別為61.7%和57.1%；80%乙蒜素EC和20%葉唑枯WP防效不足50%。當(dāng)濃度為400 mg/L時(shí)，20%噻菌銅SC和46%可殺得叁千WG的防效在80%以上；5%中生菌素WP的防效接近80%，其他藥劑的防效也有所提高。0.3%四霉素AS在噴藥后產(chǎn)生枯斑癥狀的藥害（不列出）。

表4結(jié)果表明，8種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病的治療作用效果均不好，46%可殺得叁千WG在濃度為400 mg/L時(shí)，防效僅為42.1%。

3討論與結(jié)論

黃瓜在我國各地普遍種植，是溫室主要蔬菜品種之一。溫室環(huán)境使黃瓜病害發(fā)生較為嚴(yán)重，細(xì)菌性角斑病是溫室黃瓜主要病害之一，對(duì)黃瓜生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。有關(guān)中生菌素、乙蒜素、葉枯唑及噻菌酮等不同類型殺菌劑防治黃瓜角斑病雖有報(bào)道，但在田間藥效試驗(yàn)測定藥劑適宜使用劑量或濃度時(shí)，由于植株個(gè)體間差異及發(fā)病條件等因素常導(dǎo)致研究結(jié)果存在較大差異。本研究采用室內(nèi)離體和溫室盆栽測定生產(chǎn)上常用的8種殺菌劑對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病菌的抑菌效果。結(jié)果表明，20%噻菌銅SC、46%可殺得叁千WG、5%中生菌素WP、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素和20%乙酸銅WP在黃瓜細(xì)菌性角斑病發(fā)病前噴施具有較好的防治效果。

部分殺菌劑離體與盆栽試驗(yàn)結(jié)果相差較大。四霉素（tetramycin）是一種新型農(nóng)用抗生素，具有內(nèi)吸性，對(duì)多種植物病原菌有較高的抑制活性，是一種高效低毒的防治真菌病害的生物農(nóng)藥，目前主要應(yīng)用于防治水稻及果樹病害，防治效果較好[21]。本研究在室內(nèi)測定的最小抑制濃度最小，為20 mg/L，但在盆栽試驗(yàn)時(shí)對(duì)黃瓜有藥害，所以不能用于黃瓜，若能進(jìn)行助劑改善性能，有望在黃瓜上施用。噻菌銅（龍克菌）和可殺得離體效果較差，但盆栽具有較好防治效果，這與徐森富研究結(jié)果相同[12，22]，噻菌銅對(duì)其他作物的細(xì)菌性病害也有很好的防治效果[23]。葉枯唑（bismerthiazol）是我國20世紀(jì)70年代自主創(chuàng)制研發(fā)的殺菌劑，主要登記用于水稻白葉枯病、大白菜軟腐病等細(xì)菌性病害防治，具有內(nèi)吸性，易產(chǎn)生抗藥性[24]。但在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病防治效果較差，可能與抗藥性有關(guān)。乙蒜素是一種植物仿生農(nóng)藥，系使用大蒜提取物，對(duì)細(xì)菌性病害有較好防效[25]，但本試驗(yàn)中對(duì)黃瓜細(xì)菌性角斑病防治效果較差，與張惠淳等的田間藥效試驗(yàn)結(jié)果不同[16]。中生霉素（zhongshengmycin）是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物防治研究所研制的一種新型農(nóng)用抗生素，具有觸殺、滲透作用，是廣譜保護(hù)性殺菌劑。本研究表明其對(duì)黃瓜細(xì)菌性病害有較好的防效，與田間藥效結(jié)果相同[26]。

本試驗(yàn)結(jié)果還顯示，農(nóng)用抗生素如四霉素、中生菌素和農(nóng)用鏈霉素的最小抑制濃度均好于銅制劑如噻菌銅和可殺得，但銅制劑具有很好的保護(hù)作用。建議抗生素類與銅制劑類交替使用，以防抗藥性的產(chǎn)生。黃瓜細(xì)菌性角斑病的防治以預(yù)防為主，綜合治理，在生產(chǎn)上應(yīng)加強(qiáng)農(nóng)業(yè)防治、生態(tài)防治和栽培管理，根據(jù)環(huán)境條件在發(fā)病之前用藥，才能達(dá)到較好的防治效果。本研究篩選出的部分藥劑可用于黃瓜細(xì)菌性角斑病的防治。

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