陳寅生，趙穎，李文

(南京市中醫(yī)院，江蘇 南京 210001)

決明退障口服液指紋圖譜研究

陳寅生，趙穎*，李文

(南京市中醫(yī)院，江蘇 南京 210001)

目的：建立了決明退障口服液的HPLC-DAD指紋圖譜分析方法，確定了部分特征峰的歸屬。方法：采用HPLC法，Dikma Diamonsil C18色譜柱( 250 mm×4.6 mm,5 μm)，以乙腈-0.1%醋酸水為流動相梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果：建立了10批決明退障口服液的指紋圖譜，共有28個共有峰，多數(shù)峰分離度較好，具有較高的相似度。結(jié)論：建立的HPLC指紋圖譜有較高的特征性和穩(wěn)定性，為質(zhì)量控制提供依據(jù)。

決明退障口服液；HPLC；指紋圖譜

決明退障口服液為我院常用的醫(yī)院制劑，包括珍珠母、決明子、枸杞子、白芍、甘草和當(dāng)歸等九味飲片，具有平肝養(yǎng)血，益腎滋陰功效，主要用于治療白內(nèi)障，已經(jīng)有多年的臨床應(yīng)用。醫(yī)院制劑的質(zhì)量提升是保持醫(yī)院特色及其優(yōu)勢的重要內(nèi)容之一，應(yīng)當(dāng)運用現(xiàn)代化的分析檢測技術(shù)為質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。針對中藥及其制劑成分復(fù)雜多樣性，中藥指紋圖譜技術(shù)可以綜合反映中藥材中各主要成分及其相對含量[1-6]，能有效評價中藥制劑的質(zhì)量的技術(shù)評價方法。

1 材料

1.1 儀器與試藥

Agilent-1260 Infinity型高效液相色譜儀(包括Chemstation化學(xué)工作站、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、G1315D二極管陣列檢測器)，Mettler Toledo XS205 Dual Range型分析天平(瑞士梅特勒～托利多公司)，GWA-UN型超純水器(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

決明退障口服液(批號：150618、150730、150827、150924、151019、151119、151212、160109、160124、160404，分別以S1-S10表示)由南京市中醫(yī)院提供;芍藥苷(批號：110736-201438，含量以96.4%計);橙黃決明素(批號：111900-201504，含量以97.5%計)由中國食品藥品檢定研究院提供;乙腈、甲醇為色譜級;純化水為自制(經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾);冰醋酸為分析級。

指紋圖譜分析用軟件為中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A 版(國家藥典委員會)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；檢測波長： 280 nm；柱溫 ：30 ℃；流速 ：1.0 mL/min；進(jìn)樣量 ：10 μL；流動相：乙腈-0.1%冰醋酸水溶液，梯度洗脫程序：0～10 min，5%～5%乙腈；10～15 min，5%～8%乙腈；15～30 min，8%～15%乙腈；30～40 min，15%～18%乙腈；40～60 min，18%～30%乙腈；60～80 min，30%～60%乙腈；80～95 min，60%～100%乙腈；95～100 min，100%～100%乙腈[7]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

取芍藥苷及橙黃決明素對照品適量，精密稱定，甲醇配制成芍藥苷的濃度為0.766 mg/mL，橙黃決明素為0.020 mg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液

分別取決明退障口服液適量，移取2 mL至10 mL量瓶中。加水至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗

取批號為160404的口服液樣品1份，按“2.2.2”項下方法制備，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察色譜峰相對保留時間和峰面積。經(jīng)計算，相對保留時間及峰面積(大于2%)的色譜峰RSD均小于2.7%，表明儀器穩(wěn)定，精密度良好。

2.3.2 重復(fù)性試驗

取批號160404的口服液樣品6份，按“2.2.2”項下方法制備，分別進(jìn)樣檢測，考察色譜峰相對保留時間和峰面積。經(jīng)計算，相對保留時間及峰面積(大于2%)的色譜峰RSD均小于3.0%，表明方法具有較好的可重復(fù)性。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗

取批號160404的口服液樣品1份，按“2.2.2”項下方法制備，分別在0、4、8、12、24 h進(jìn)樣檢測，考察色譜峰相對保留時間和峰面積。經(jīng)計算，相對保留時間及峰面積(大于2%)的色譜峰RSD均小于3.0%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 指紋圖譜的測定及共有峰的確定

按照確定的指紋圖譜檢測方法分別檢測10批決明退障口服液液相色譜(圖2)，對10批樣品液相色譜圖進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果確定了28個色譜峰為決明退障口服液所共有峰，見圖1。

圖1 對照指紋圖譜

2.5 指紋圖譜相似度評價

參照文獻(xiàn)[8],采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版”。分別設(shè)置參數(shù)：(1)參照圖譜：采用批號為160404樣品的色譜圖(S1)作為參照譜圖。(2)時間窗寬度：0.10。(3)校正方式：多點校正。校正色譜峰的確定：實驗色譜圖保留時間為100 min，結(jié)果表明特征峰在0～90 min。(4)指紋圖譜生成：10批樣品色譜圖生成指紋圖譜見圖2，以生成的對照圖譜作為相似度計算時校正的參照圖譜。將測定獲得的10批樣品數(shù)據(jù)采用指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)與生成的對照指紋圖譜進(jìn)行相似度評價，結(jié)果見表1。

圖2 10批決明退障口服液指紋圖譜

表1 決明退障口服液HPLC指紋圖譜相似度數(shù)據(jù)

上述數(shù)據(jù)表明，10批樣品中有5批樣品相似度處于0.8～0.9之間，其余5批決明退障口服液的指紋圖譜的相似度均大于0.9，說明本品的批件質(zhì)量穩(wěn)定性不高。而部分批次間，如區(qū)別于其他批次S2、S3、S6、S9色譜中保留時間為46.5 min具有較大的色譜峰，其紫外全波長掃描圖一致，以這四批之間做相似度計算，均大于0.9。

2.6 色譜峰的指認(rèn)

采用高效液相色譜儀分別檢測供試品溶液、對照品溶液，記錄色譜圖，通過保留時間和紫外全波長掃描的比較，對色譜峰進(jìn)行指認(rèn)，共指認(rèn)了2個色譜峰。16號共有峰為芍藥苷，27號共有峰為橙黃決明素。見圖3。

圖3 芍藥苷(S1)與橙黃決明素(S2)色譜圖

3 討論

該方法首次采用同一色譜條件同時檢測芍藥苷、橙黃決明素2個成分。

色譜條件的確定，通過比較甲醇-水、甲醇-酸水、乙腈-水、乙腈-酸水等溶劑系統(tǒng)觀察比較，乙腈-酸水峰型較好；通過比較色譜柱Agilent puls C18、Kromasil 100-5 C18、Dikma Diamonsil C18色譜柱比較，Dikma Diamonsil C18色譜柱塔板數(shù)較高，峰型好；在選定的液相色譜條件下，采用二極管陣列檢測器對供試品溶液進(jìn)行測定，綜合考慮基線、色譜峰的數(shù)目及信號響應(yīng)值，確定280 nm為最佳檢測波長。

本品為水煎煮提取，多為水溶性化學(xué)成分，通過指紋圖譜初步研究了決明退障口服液的色譜圖，可見其成分非常復(fù)雜；指標(biāo)性成分需要利用相對保留時間和全波長紫外圖進(jìn)行對比分析。后續(xù)研究可以運用HPLC-MS技術(shù)，進(jìn)一步揭示其成分組成。

通過指紋圖譜研究發(fā)現(xiàn)本產(chǎn)品批次間一致性較差、藥效物質(zhì)“控制窗”過寬，可能與不同批次間的投料飲片的產(chǎn)地、批次、質(zhì)量差異有關(guān)。下一步需要考察主要差異色譜峰的藥味歸屬[9]，控制其產(chǎn)地或品種。

[1] 聶磊,羅國安,曹進(jìn),等.中藥二維信息指紋圖譜模式識別[J].藥學(xué)學(xué)報,2004,39(2):136-139.

[2] 趙旭，馬曉鵬.GC-MS-AMDIS 結(jié)合保留指數(shù)技術(shù)用于纈草揮發(fā)性成分指紋圖譜的研究[J].中醫(yī)藥信息,2015,32(3):29-31.

[3] 楊柳，張穎，劉季田媛,等.牛膝各化學(xué)拆分組分指紋圖譜研究[J].中醫(yī)藥信息,2015,32(6):16-19.

[4] 唐先明,何志一,剛宏林.中藥指紋圖譜在藥品質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2014,42(2):86-88.

[5] 劉斌,熊輝樸,成玉,等.補(bǔ)陽還五湯的HPLC指紋圖譜研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2016,44(4):5-9.

[6] 郝變,潘麗麗,袁少雄,等.不同品種、產(chǎn)地瓜蔞皮中游離氨基酸類成分指紋圖譜研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2015,43(2):14-18.

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[9] 祝明，陳碧蓮，石上梅.中藥指紋圖譜技術(shù)在中國藥典2015年版一部中的應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2016,33(5):611-614.

Study on the Fingerprint of Jueming Tuizhang Oral Liquid

CHEN Yin-sheng, ZHAO Ying, LI Wen

(NanjingHospitalofTraditionalChineseMedicine)

Objective: An HPLC-DAD fingerprint method for Jueming Tuizhang Oral Liquid was developed and some characteristic peaks were marked. Methods: A Dikma Diamonsil C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used in HPLC, with acetonitrile-0.1% acetic acid water as mobile phase, under the 280 nm detection wavelength. The column temperature was 30℃ with the flow rate of 1.0 mL/min, the sample volume was 10 μL. Results: 10 batches of HPLC fingerprints were established. 28 common peaks were selected in all samples. Among the obtained fingerprints, most of the detected peaks were separated effectively. Conclusion: The established HPLC fingerprint has repeatability and stability, which provides quality control reference for Jueming Tuizhang Oral Liquid.

Jueming Tuizhang Oral Liquid; HPLC; Fingerprint

2016-12-22

2017-04-28

陳寅生(1974-)，男，副主任藥師，研究方向：臨床藥學(xué)、藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)和信息藥學(xué)。

*通訊作者：趙穎(1984-)，女，碩士，主管中藥師，研究方向：中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

R284.1

A

1002-2392(2017)03-0039-02