王衛(wèi)杰，郭閃閃，何棟，李惠，王樂，徐丹

(1.開封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所,河南 開封 475000；2.開封市中醫(yī)院，河南 開封 475000)

地骨皮游離蒽醌對(duì)高脂大鼠模型降脂作用的實(shí)驗(yàn)研究

王衛(wèi)杰1，郭閃閃2，何棟1，李惠1，王樂1，徐丹1

(1.開封市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所,河南 開封 475000；2.開封市中醫(yī)院，河南 開封 475000)

目的：對(duì)單方中藥地骨皮中蒽醌成分對(duì)高脂血癥大鼠體內(nèi)脂代謝的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究。方法：采用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，通過以高脂飼料誘導(dǎo)的高脂血癥大鼠作為動(dòng)物模型。使用地骨皮游離蒽醌對(duì)高脂模型大鼠進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：高脂飼料誘導(dǎo)高脂血癥大鼠后，實(shí)驗(yàn)組模型組大鼠的總膽固醇、總甘油三酯、低密度脂蛋白的含量明顯降低，提示地骨皮蒽醌類成分具有良好的降脂作用。結(jié)論：和模型組比較，地骨皮游離蒽醌能顯著降低高脂大鼠的總膽固醇、總甘油三酯和低密度脂蛋白。

地骨皮；游離蒽醌；高脂大鼠模型；血脂

高脂血癥(HLP)是代謝性疾病中一種常見而多發(fā)的重要病癥，臨床常用的西藥降血脂藥如辛伐他汀、普伐他汀，降脂作用療效肯定，但副作用大[1]。近年來有大量研究表明，中藥可從不同環(huán)節(jié)干預(yù)高脂血癥，效果明顯，所以，中藥復(fù)方制劑和中藥單味藥及其提取物的降脂作用研究將越來越得到重視[2]；而地骨皮單味藥及其提取物的降脂作用鮮有人研究。本實(shí)驗(yàn)以高脂飼料誘導(dǎo)的高脂血癥大鼠作為動(dòng)物模型，研究單方中藥地骨皮中蒽醌成分對(duì)高脂血癥大鼠體內(nèi)脂代謝的調(diào)節(jié)作用，闡明地骨皮調(diào)節(jié)血脂的有效成分及其機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠購(gòu)于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心:SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量為(185.05±4.48)g。動(dòng)物到達(dá)后單只單籠飼養(yǎng)，喂食基礎(chǔ)飼料(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料，購(gòu)于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，自由飲水，實(shí)驗(yàn)室溫度22～24℃，空氣相對(duì)濕度50%～65%，室內(nèi)照明12 h明暗交替。

1.2 飼料添加劑

膽鹽20130911；膽固醇20130825；蛋黃粉20130905；(北京華邁科生物技術(shù)有限責(zé)任公司),全脂奶粉(伊利)；豬油市售。

1.3 主要儀器及試劑

紫外分光光度計(jì)(UV-2550日本島津)；超聲清洗儀(KQ-100昆山)；索氏提取器(SXT-02上海洪紀(jì))；低密度脂蛋白測(cè)定試劑盒，2014080025；總甘油三酯測(cè)定試劑盒，2014060007，(南京建成生物工程研究所)；辛伐他汀，20140718(海南海靈化學(xué)制藥有限公司)；膽汁酸檢測(cè)試劑盒，20140526(威特曼生物科技有限公司)；地骨皮內(nèi)的蒽醌類成分(實(shí)驗(yàn)室提取，參照何棟[3]等的反高效液相色譜法測(cè)定地骨皮中大黃素、大黃素甲醚實(shí)驗(yàn)研究)。

1.4 飼料制備

1.4.1 普通飼料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。

1.4.2 高脂飼料制備

以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料為基礎(chǔ)飼料飼料，配成含基礎(chǔ)飼料78.9%，膽固醇1%，膽鹽0.1%，蛋黃粉5%，全脂奶粉5%，豬油10%的高脂飼料。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組及方法

1.5.1 高脂大鼠模型構(gòu)建

雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后。隨機(jī)分為正常對(duì)照組(10只，喂飼普通飼料)和模型組(50只，喂飼高脂飼料)。每?jī)芍軘辔膊裳?次，分離血清并檢測(cè)TC，TG，LDL-C水平(按試劑盒說明書檢測(cè))。4周后按照林征[4]等人造模標(biāo)準(zhǔn)取模型組TC>2.12 mmol/L、TG>2.43 mmol/L、LDL-C>0.82 mmol/L的大鼠作為成功高脂模型納入試驗(yàn)。正常對(duì)照組大鼠血脂水平均未達(dá)到該水平。

1.5.2 分組及藥品干預(yù)

將造模成功大鼠40只隨機(jī)分為辛伐他汀組、地骨皮蒽醌低、高劑量組，每組10只。正常對(duì)照組和陰性對(duì)照組灌喂相應(yīng)體積蒸餾水；辛伐他汀組(SIM)給藥劑量為4 mg/(kg·d)；地骨皮蒽醌低、高劑量組給藥劑量分別為40 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d),用生理鹽水2 mL溶解，各組每日灌胃1次。

等效劑量計(jì)算：根據(jù)徐叔云教授《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，人與大鼠等效劑量系數(shù)為6.3。辛伐他汀人體最大用量40 mg/d,則大鼠用量=40÷60×6.3=4 mg/(kg·d),地骨皮人體最大用量為30 g，總蒽醌含量約為1%，則大鼠總蒽醌用量=30÷60×1%×6.3=30 mg/(kg·d)。

1.5.3 膽汁酸檢測(cè)

大鼠單籠單只養(yǎng)殖，在0、1、2月，各收集4天糞便標(biāo)本，干燥、粉碎，以乙醇-KOH抽提予酶法測(cè)定膽汁酸及膽固醇濃度，觀察地骨皮蒽醌對(duì)高脂血地鼠糞便膽汁酸排泄的影響。

2 結(jié)果

2.1 大鼠體質(zhì)量的變化

本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前各組大鼠體質(zhì)量之間無顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)中期(建模成功)，模型組大鼠體質(zhì)量組間無顯著性差異，與對(duì)照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)?zāi)?藥物干預(yù)后)。各劑量組與模型組比均有差異(P<0.05)，蒽醌高劑量組與模型組具顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)各組大鼠體質(zhì)量變化結(jié)果

注：與正常對(duì)照組比較，△P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2 大鼠總膽固醇的變化

本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前各組大鼠TC之間無顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)中期(建模成功)，模型組大鼠TC組間無顯著性差異，與對(duì)照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)?zāi)?藥物干預(yù)后)。蒽醌高、低劑量組、辛伐他汀組與模型組比均有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)各組大鼠TC變化結(jié)果

注：與正常對(duì)照組比較，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.3 大鼠甘油三酯的變化

本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前各組大鼠TG之間無顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)中期(建模成功)，模型組大鼠TG組間無顯著性差異，與對(duì)照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)?zāi)?藥物干預(yù)后)。蒽醌高劑量組、辛伐他汀組與模型組比均有顯著性差異(P<0.01)，蒽醌低劑量組與模型組無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)各組大鼠TG變化結(jié)果

注：與正常對(duì)照組比較，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.4 大鼠低密度脂蛋白的變化

本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前各組大鼠LDL-C之間無顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)中期(建模成功)，模型組大鼠TG組間無顯著性差異，與對(duì)照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)?zāi)?藥物干預(yù)后)蒽醌高、低劑量組、辛伐他汀組與模型組比均有顯著性差異(P<0.01),結(jié)果見表4。

表4 實(shí)驗(yàn)各組大鼠LDL-C變化結(jié)果

注：與空白對(duì)照組比較，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.5 大鼠糞便膽汁酸的變化

本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)前大鼠糞便膽汁酸各組之間無顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)中期(建模成功)，模型組大鼠組間無顯著性差異，與對(duì)照組相比均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)?zāi)?藥物干預(yù)后)。蒽醌高、低劑量組與模型組有顯著性差異(P<0.01)，辛伐他汀組與模型組比無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表5。

表5 實(shí)驗(yàn)各組大鼠糞便膽汁酸變化結(jié)果

注：與正常對(duì)照組比較，△△P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

3 討論

高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化的促發(fā)因素，對(duì)高脂血癥的治療是防治缺血性心臟病及腦梗死的關(guān)鍵；在治療藥物的選擇上，天然藥物與化學(xué)藥物相比在長(zhǎng)期應(yīng)用的順應(yīng)性方面具有一定優(yōu)勢(shì)，而且從天然藥物中尋找新的活性成分是創(chuàng)新藥物的有效途徑。

在本隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，50只SD大鼠以林征等人提出短期高脂飼料配方喂養(yǎng)1個(gè)月，第1個(gè)月末檢測(cè)大鼠血脂四項(xiàng)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)SD大鼠總膽固醇、總甘油三酯、低密度脂蛋白濃度逐漸升高，說明高脂模型建立成功，與林征[4]等人的研究結(jié)果相符。

第2個(gè)月，模型組總膽固醇、總甘油三酯、低密度脂蛋白濃度持續(xù)升高。與模型組比較，辛伐他汀降低TC37.2%，地骨皮高劑量組降低21.7%，約為辛伐他汀的56%；辛伐他汀降低TG25.3%，地骨皮高劑量組降低15.3%，約為辛伐他汀的60.8%；辛伐他汀降低LDL-C56.2%，地骨皮高劑量組降低33.5%，約為辛伐他汀的59.8%；蒽醌、低劑量組TC、TG、LDL-C在第2個(gè)月末也均有下降。這可能與中藥及中藥有效成分對(duì)人體的雙向調(diào)節(jié)有關(guān)。

高脂飲食可增加糞便中膽汁酸含量，本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組大鼠糞便中膽汁酸的排量一直無明顯變化。模型組大鼠在高脂飼養(yǎng)以后，糞便中膽汁酸呈上升趨勢(shì)。與0月時(shí)比較，地骨皮蒽醌高低劑量組2月時(shí)糞便膽汁酸含量分別增加2.5倍和2.38倍，顯著高于高脂模型，其降脂機(jī)制可能與膽汁酸的外排有關(guān)。

正常人體肝臟內(nèi)膽汁酸池不過3～5 g，而維持脂類物質(zhì)消化吸收，需要肝臟每天合成16～32 g，依靠膽汁酸的腸肝循環(huán)可彌補(bǔ)膽汁酸的合成不足。每次飯后可以進(jìn)行2～4次腸肝循環(huán)，使有限的膽汁酸池能夠發(fā)揮最大限度的乳化作用，以維持脂類食物消化吸收的正常進(jìn)行[5-10]。而地骨皮總蒽醌通過增加膽汁酸的外排，影響膽汁酸的肝腸循環(huán)，影響脂類物質(zhì)的消化和吸收，從而達(dá)到降脂的作用。唐大軒[11]等人研究發(fā)現(xiàn)，大黃蒽醌可以增加小鼠胃內(nèi)容物以及小腸和結(jié)腸內(nèi)容物；并可通過刺激胃腸道粘膜而增加蛋白質(zhì)的分泌。魏風(fēng)鈴[12]等人研究發(fā)現(xiàn)，大黃總蒽醌有促進(jìn)腸蠕動(dòng)和致瀉作用。推測(cè)地骨皮總蒽醌增加膽汁酸外排的機(jī)理可能與以上兩點(diǎn)有關(guān)。

[1] 張秀云,周鳳琴.地骨皮藥理及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].廣州化工,2012(7):48-49,59.

[2] 李紅霞.降脂通絡(luò)軟膠囊對(duì)高脂血癥大鼠血管內(nèi)皮的干預(yù)作用[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué),2007.

[3] 何棟,盧大雷,劉威峰,等.反高效液相色譜法測(cè)定地骨皮中大黃素、大黃素甲醚實(shí)驗(yàn)研究[J].河南中醫(yī),2015,35(12):3195-3196.

[4] 林征,吳小南,汪家梨.雄性SD大鼠高脂血癥模型飼料配方的實(shí)驗(yàn)研究[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2007,13(6):56-57.

[5] 孫瑞紅,李琨,滕文麗,等.大豆異黃酮對(duì)高脂大鼠血脂的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2012,40(6):50-53.

[6] 何光星,劉潔,艾麗,等.降脂膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂大鼠血脂的影響[J].中藥藥理與臨床,2007,23(6):69-70.

[7] 邱樑,李晟,姚琪,等.纈沙坦對(duì)高脂大鼠模型血脂水平的影響及抗炎分子機(jī)制分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,11(16):20-23.

[8] 駱慶峰,孫蘭,斯建勇,等.木豆葉芪類提取物對(duì)高脂模型小鼠血脂和肝臟膽固醇的降低作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2008,43(2):145-149.

[9] 曹蘭秀,周永學(xué),頓寶生,等.女貞子總黃酮對(duì)高脂模型大鼠脂代謝的影響[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,30(20):2129-2132.

[10] 陳美娟,邱服斌,張海杰,等.建立雄性SD大鼠高脂血癥模型研究[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010,11(11):1113-1115.

[11] 唐大軒.大黃蒽醌致瀉作用及其機(jī)理的初步研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18(6):1312-1314.

[12] 魏鳳玲.大黃中結(jié)合蒽醌的致瀉作用及藥動(dòng)學(xué)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,1999,12(5):53-55.

Experimental Study on Hypolipidemic Effects in Hyperlipidemia Rats by Free Anthraquinone inCortexLyciiRadicis

WANG Wei-jie1, GUO Shan-shan2, HE Dong1, LI Hui1, WANG Le1, XU Dan1

(1.KaifengInstituteofMedicalSciences,Kaifeng475000,China;2.CityHospitalofKaifeng,Kaifeng475000,China)

Objective: To research the regulation effect of lipid metabolism in hyperlipidemia rats by using free anthraquinone inCortexLyciiRadicis(Di Gu Pi). Methods: SD rats were induced to the hyperlipidemia models with high fat diet. Free anthraquinone fromCortexLyciiRadiciswas used to intervene. Results: The levels of total cholesterol(TC), triglyceride(TG), and low density lipoprotein(LDL) hyperlipidemic rats induced by high fat diet, decreased significantly compared to experimental model group, suggesting Digupi Anthra quinones have good lipid-lowering effect. Conclusions：Anthraquinone in Cortex Lycii Radicis has a significant lipid-lowering effect.

CortexLyciiRadicis(Di Gu Pi); Free anthraquinone; Hyperlipidemia Rats; Blood fat

2016-06-06

2016-10-30

河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(122102310008)

王衛(wèi)杰(1987-)，女，碩士研究生，實(shí)習(xí)研究員，研究方向:生物醫(yī)學(xué)研究。

R285.5

A

1002-2392(2017)03-0017-03