張向陽 趙如同 劉春燕 張文立 田河林

(河北工程大學醫(yī)學院生化教研室，河北 邯鄲 056002)

地榆、地榆炭對小鼠止血作用影響的實驗研究※

張向陽 趙如同 劉春燕 張文立 田河林

(河北工程大學醫(yī)學院生化教研室，河北 邯鄲 056002)

目的 探討地榆及地榆炭止血作用機制。方法 將240只昆明種小鼠隨機分為4個實驗組，每組60只，雌雄各半，各組再隨機分為空白組、云南白藥組、地榆大劑量組、地榆小劑量組、地榆炭大劑量組、地榆炭小劑量組，每組10只，比較地榆炭和地榆對小鼠凝血時間、出血時間、血小板計數、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)及活化部分凝血活酶時間(APTT)的影響。結果 云南白藥組、地榆大劑量組、地榆小劑量組、地榆炭大劑量組小鼠出血時間較空白組均縮短(P<0.01，P<0.05)。地榆炭小劑量組出血時間與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組與地榆炭大劑量組出血時間比較差異無統計學意義(P>0.05)，地榆小劑量組與地榆炭小劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。云南白藥組、地榆大劑量組、地榆炭大劑量組小鼠凝血時間較空白組均縮短(P<0.01)。地榆小劑量組、地榆炭小劑量組凝血時間與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組與地榆炭大劑量組凝血時間比較差異無統計學意義(P>0.05)，地榆小劑量組與地榆炭小劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組、地榆小劑量組、地榆炭大劑量組小鼠血小板計數較空白組均升高(P<0.01，P<0.05)。云南白藥組、地榆炭小劑量組血小板計數與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組血小板計數高于地榆炭大劑量組(P<0.01)；地榆小劑量組血小板計數高于地榆炭小劑量組(P<0.05)。云南白藥組、地榆大劑量組、地榆炭大劑量組小鼠PT、TT及APTT較空白組均縮短(P<0.05，P<0.01)。地榆小劑量組、地榆炭小劑量組PT、TT及APTT與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組與地榆炭大劑量組PT、TT及APTT比較差異無統計學意義(P>0.05)，地榆小劑量組與地榆炭小劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。結論 地榆和地榆炭的止血機制存在差異，但炒炭與否對止血作用沒有顯著影響。

地榆；止血；動物，實驗

地榆為薔薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.或長葉地榆SanguisorbaofficinalisL. var.longifolia(Bert.)Yü et Li的干燥根，其性微寒，味苦、澀、酸，歸肝、大腸經，具有解毒斂瘡、涼血止血的作用[1]。中藥炭化的目的為緩和藥物藥性，降低藥物毒性，增強或產生收斂、止瀉、止血作用[2]，有些中藥炒炭后止血作用明顯增強，也有些中藥炒炭后止血作用反而減弱。地榆和地榆炭止血機制未見報道，本實驗通過對地榆和地榆炭的止血機制研究，為地榆、地榆炭的臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥品 地榆和地榆炭藥材購自北京同仁堂藥店，經河北省邯鄲市藥品檢驗所專家鑒定為薔薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.的干燥根。按照水煎劑的制備方法[3]，將地榆和地榆炭制備成1 g/mL的水煎液。云南白藥(云南白藥集團股份有限公司，國藥準字Z53020798，批號ZFA1316)。

1.2 動物 昆明種小鼠240只，雌雄各半，體質量(20±2) g，許可證編號：SCXK(冀)2008-1-003，動物合格證編號：1303141，購自河北省實驗動物中心。

1.3 分組及給藥 將240只昆明種小鼠隨機分為4個實驗組，每個實驗組60只，雌雄各半，各實驗組再隨機分為6組，分別為空白組、云南白藥組、地榆大劑量組、地榆小劑量組、地榆炭大劑量組、地榆炭小劑量組，每組10只，雌雄各半。給藥：云南白藥組0.667 g/kg，地榆大劑量組8.000 g/kg，地榆小劑量組2.000 g/kg，地榆炭大劑量組8.000 g/kg，地榆炭小劑量組2.000 g/kg，每日灌胃1次，連續(xù)3 d。

1.4 儀器 START-4半自動血凝儀(法國倍肯公司)；TG16-WS臺式高速離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)公司)；202-3型電熱恒溫干燥箱(上海實驗儀器廠)；B203LED型生物顯微鏡(重慶奧特光學儀器有限責任公司)。

1.5 觀察指標

1.5.1 出血時間 實驗1組第3次給藥1 h后，每只小鼠在距尾尖3 mm處將其剪斷，自斷尾處有血液溢出開始計時，每間隔30 s用濾紙輕輕吸去血滴，在斷尾處吸不到血時停止計時，即為小鼠出血時間。

1.5.2 凝血時間 實驗2組第3次給藥1 h后摘小鼠左側眼球，舍棄第1滴血液，迅速在潔凈載玻片滴約直徑8 mm左右的血滴，立即計時，每間隔30 s從血滴邊緣用大頭針向中間輕挑1次，能挑起絲狀纖維蛋白時終止計時，即為凝血時間。

1.5.3 血小板計數 實驗3組第3次給藥1 h后從小鼠內眥球后靜脈叢吸血20 μL,放入380 μL血小板稀釋液中，立即混勻，然后取懸液1滴加入血細胞計數板內，在顯微鏡40倍數下對小鼠血小板計數。

1.5.4 小鼠凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、活化部分凝血活酶時間(APTT) 實驗4組第3次給藥1 h后，用眼科鑷摘除小鼠眼球，舍去第1滴血液，在含3.8%枸櫞酸鈉0.1 mL的eppendorf管中加入0.9 mL血，混勻后離心，3 000 r/min，15 min，取上層血漿，在2 h內測定PT、TT、APTT。

2 結 果

2.1 各組小鼠出血時間比較 見表1。

表1 各組小鼠出血時間比較 ±s

與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01

由表1可見，云南白藥組、地榆大劑量組、地榆小劑量組、地榆炭大劑量組小鼠出血時間較空白組均縮短，差異有統計學意義(P<0.01，P<0.05)。地榆炭小劑量組出血時間與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組與地榆炭大劑量組出血時間比較差異無統計學意義(P>0.05)，地榆小劑量組與地榆炭小劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 各組小鼠凝血時間比較 見表2。

表2 各組小鼠凝血時間比較 ±s

與空白組相比，**P<0.01

由表2可見，云南白藥組、地榆大劑量組、地榆炭大劑量組小鼠凝血時間較空白組均縮短，差異有統計學意義(P<0.01)。地榆小劑量組、地榆炭小劑量組凝血時間與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組與地榆炭大劑量組凝血時間比較差異無統計學意義(P>0.05)，地榆小劑量組與地榆炭小劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 各組小鼠血小板計數比較 見表3。

表3 各組小鼠血小板計數比較

組 別n血小板計數空白組10657.40±108.29云南白藥組10754.70±120.12地榆大劑量組10972.10±186.44**△△地榆小劑量組10797.70±126.89*#地榆炭大劑量組10787.40±89.54*地榆炭小劑量組10663.10±94.58

與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01；與地榆炭大劑量組比較，△△P<0.01;與地榆炭小劑量組比較，#P<0.05

由表3可見，地榆大劑量組、地榆小劑量組、地榆炭大劑量組小鼠血小板計數較空白組均升高，差異有統計學意義(P<0.01，P<0.05)。云南白藥組、地榆炭小劑量組血小板計數與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑組血小板計數高于地榆炭大劑量組，差異有統計學意義(P<0.01)；地榆小劑量組血小板計數高于地榆炭小劑量組，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.4 各組小鼠PT、TT及APTT比較 見表4。

由表4可見，云南白藥組、地榆大劑量組、地榆炭大劑量組小鼠PT、TT及APTT較空白組均縮短，差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)。地榆小劑量組、地榆炭小劑量組PT、TT及APTT與空白組比較差異無統計學意義(P>0.05)。地榆大劑量組與地榆炭大劑量組PT、TT及APTT比較差異無統計學意義(P>0.05)，地榆小劑量組與地榆炭小劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

表4 各組小鼠PT、TT及APTT比較

組 別nPTTTAPTT空白組1018.48±1.5136.71±4.0527.33±1.53云南白藥組1017.03±1.45*29.40±2.36**24.58±1.78**地榆大劑量組1017.20±1.16*32.11±3.19**25.44±1.18**地榆小劑量組1017.81±1.3334.29±3.9426.50±1.66地榆炭大劑量組1017.15±1.41*33.41±2.82*25.66±1.45*地榆炭小劑量組1017.92±1.6434.91±3.2926.81±1.89

與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01

3 討 論

正常凝血和止血機制包括血小板、凝血因子和血管壁三方面的作用，凝血因子止血作用又分為內源性、外源性和共同途徑3條途徑[4]。PT能反映出外源性凝血系統活性，其時間長短與外源性凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的活性相關；TT反映出纖維蛋白原的利用度；APTT反映出內源性凝血系統中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ等因子的活性[5]。

地榆根部鞣質類化合物的含量約17%[6]，鞣質具有降低毛細血管通透性，收縮微血管的作用[7]，鞣質還能與蛋白質結合在血管破損處形成硬塊，血液外流受阻而達到止血目的。地榆中鞣質的單體沒食子酸及d-兒茶素，能增強血小板的聚集和黏附功能，沒食子酸單體還能增高Az-巨球蛋白含量，競爭性抑制纖溶酶原活化素及纖溶酶的活力，導致纖溶活力的降低，從而起到止血作用[8]。地榆中還含有總皂苷，具有促骨髓細胞增殖作用，對血小板數量、外周血白細胞和紅細胞有明顯的改善作用[9]。可見，地榆通過凝血因子、血小板及血管壁三方面因素的作用，最終達到止血效果。

地榆中大量的鈣以草酸鈣晶體的形式存在，通過制炭過程的高溫可釋放出可溶性鈣離子。鈣離子為凝血因子，對血小板、內源性和外源性凝血系統有激活作用，轉化纖維素蛋白原為纖維蛋白，起到促進凝血、止血的作用[10]。地榆炒炭過程中會產生大量炭素，血液遇炭素后可釋放一種使平滑肌緊張性加強的物質，能促進血管收縮而止血，同時炭素可以促進釋放血小板因子、血漿凝血因子激活及血小板裂解，促進血液凝固[11]；但同時，地榆炒炭過程中，由于時間和溫度參數不易控制，導致部分地榆發(fā)生灰化，致使地榆中總皂苷、鞣質等止血成分減少，減弱止血作用[12]。另外，地榆炭與地榆相比，由于制炭過程發(fā)生的化學、物理變化，地榆炭中的鐵、鋁、錳、鋅、銅等19種微量元素含量均高于地榆[13]，而以上這些微量元素都是血液中不可或缺的物質，它們或通過影響血液成分，或間接作用于凝血因子，或參與激素和酶的活動，從而對全身性和局部性的凝血、出血過程產生影響。

本研究結果表明，地榆和地榆炭均能縮短小鼠出血時間和凝血時間，二者比較差異無統計學意義；地榆和地榆炭均能升高小鼠血小板，地榆作用更強；與空白組相比，地榆和地榆炭能縮短小鼠PT、TT和APTT，二者比較差異無統計學意義。

綜上所述，地榆炒炭后，成分發(fā)生變化，導致地榆和地榆炭的止血機制存在差異，但從實驗數據看，二者的止血作用差異無統計學意義。由于止血作用是多種成分協同作用的結果，而中藥成分復雜，影響因素比較多，對于地榆制炭后止血作用機制的變化還需進一步實驗研究。

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(本文編輯：李珊珊)

Experimental study on hemostatic function of Radix Sanguisorbae and Charred Radix Sanguisorbae in mice

ZHANGXiangyang,ZHAORutong,LIUChunyan,etal.

DepartmentofBiochemistryandofMolecularBiologyLaboratory,MedicalcollegeofHebeiUniversityofEngineering,Hebei,HanDan056002

Objective To explore the hemostasis mechanisms of Radix Sanguisorbae and charred Radix Sanguisorbae. Methods 240 Kunming mice were randomly divided into 4 groups, 60 mice in each group with half males and half females. The rats in each group were randomly divided into blank group, Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of Radix Sanguisorbae group, high dose of charred Radix Sanguisorbae group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group, 10 mice in each group. The effects of clotting time, bleeding time, platelets count, thrombin time (TT), prothrombin time (PT) and activated partialthromboplastin time (APTT) were compared between the Radix Sanguisorbae and charred Radix Sanguisorbae in mice. Results The bleeding time in Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group were shorter than those in blank group (P<0.01,P<0.05). There was no statistical difference on bleeding time between low dose of Radix Sanguisorbae group and blank group (P>0.05), high dose of Radix Sanguisorbaeand high dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05), low dose of Radix Sanguisorbae group and low dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05). The clotting time in Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group was shorter than that in blank group (P<0.01). There was no statistical difference on clotting time among low dose of charred Radix Sanguisorbae group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group and blank group (P<0.05). There was no statistical difference on clotting time between high dose of Radix Sanguisorbae high and dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05), low dose of Radix Sanguisorbae group and low dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05). The platelets count in high dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group was higher than that in blank group (P<0.01,P<0.05). There was no statistical difference on platelets count among Yunnanbaiyao group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group and blank group (P>0.05). The platelets count in high dose of Radix Sanguisorbae was higher than that in high dose of charred Radix Sanguisorbae group (P<0.01), and which in low dose of charred Radix Sanguisorbae group was higher than that in low dose of charred Radix Sanguisorbae group (P<0.05). The PT, TT and APTT in Yunnanbaiyao group, high dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group were shorter than that in blank group (P<0.05,P<0.01). There was no statistical difference on PT, TT and APTT among low dose of Radix Sanguisorbae group, low dose of charred Radix Sanguisorbae group and blank group (P>0.05). There was no statistical difference on PT, TT and APTT between high dose of Radix Sanguisorbae group and high dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05), low dose of Radix Sanguisorbae group and low dose of charred Radix Sanguisorbae group(P>0.05). Conclusion Radix Sanguisorbae and charred Radix Sanguisorbae have different hemostasis mechanisms, but frying charcoal or not have no significant effect on the hemostasis function.

Radix Sanguisorbae; Hemostasis; Animal; Experiment

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.05.023

※ 項目來源：河北省邯鄲市科學技術研究與發(fā)展計劃(編號：1523108076-8)

張向陽(1970—)，男，高級實驗師，碩士。主要從事基礎中醫(yī)藥學方面的研究。

R973.1

A

1002-2619(2017)05-0735-04

2016-11-23)