趙赫，趙慶彬，王穆峰，陳立冬，楊志勇

(1.天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381；2.赤峰市元寶山區(qū)獸醫(yī)局，赤峰 024000)

口蹄疫三價(jià)苗對(duì)荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

趙赫1，趙慶彬1，王穆峰1，陳立冬2，楊志勇1

(1.天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381；2.赤峰市元寶山區(qū)獸醫(yī)局，赤峰 024000)

為研究口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響，本研究對(duì) 2～11歲荷斯坦種公牛肌肉注射口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗后，統(tǒng)計(jì)分析注射前半個(gè)月及注射后第1、2、3、4周的荷斯坦種公牛射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、凍精精子畸形率和凍精產(chǎn)量的差異性。結(jié)果顯示：（1）2～11歲種公牛各時(shí)間段的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量無(wú)顯著差異（P＞0．05）；而注射后第1周的凍精產(chǎn)量、注射后第2周的畸形率顯著高于注射前半個(gè)月（P＜0．05），其他各時(shí)間段之間無(wú)顯著差異（P＞0．05）。（2）2歲種公牛，注射后第2周的畸形率顯著高于注射前半個(gè)月（P＜0．05），其他各時(shí)間段之間無(wú)顯著差異（P＞0．05）；（3）3～5歲種公牛注射后第2周的畸形率顯著高于注射后第1周（P＜0．05），其他各時(shí)間段差異不顯著（P＞0．05）。（4）7～11歲種公牛，注射后第1周的畸形率和凍精產(chǎn)量顯著高于注射前半個(gè)月（P＜0．05），其他各時(shí)間段差異不顯著（P＞0．05）?？梢缘贸?，口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力無(wú)顯著影響，對(duì)凍精產(chǎn)量無(wú)不利影響，并導(dǎo)致畸形率升高，但對(duì)不同年齡段種公牛影響不完全相同。

口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗；種公牛；精液

口蹄疫是發(fā)生在偶蹄動(dòng)物中的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，發(fā)病率高，可引起大范圍的易感動(dòng)物感染發(fā)病，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類(lèi)疫病中第一位烈性傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部也將其列為A類(lèi)傳染病之首[1]。根據(jù)我國(guó)《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》的相關(guān)規(guī)定[2]，國(guó)家對(duì)口蹄疫實(shí)行強(qiáng)制免疫，免疫方法為口蹄疫疫苗注射。口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗是近幾年我國(guó)自主研制的新型口蹄疫疫苗，達(dá)到了口蹄疫防疫中的“一針?lè)廊　钡男Ч?，?guó)內(nèi)多個(gè)種公牛站采用口蹄疫三價(jià)苗來(lái)防控口蹄疫疫病。本試驗(yàn)對(duì)口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗（以下稱(chēng)口蹄疫三價(jià)苗）注射前后，2～11歲荷斯坦種公牛的射精量、精液品質(zhì)及凍精產(chǎn)量進(jìn)行了對(duì)比分析，評(píng)估了口蹄疫三價(jià)苗注射對(duì)種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)動(dòng)物

25頭體格健壯、性欲旺盛、正常進(jìn)行精液生產(chǎn)且年齡為2～11歲的荷斯坦種公牛，統(tǒng)一進(jìn)行飼養(yǎng)、采精，自由飲水、運(yùn)動(dòng)。飼養(yǎng)管理參照《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》（NY/T1446-2007）[3]進(jìn)行。

表1 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)2～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

1．2 主要儀器

數(shù)顯水浴鍋（TL402～420B，江蘇姜堰市醫(yī)療器械公司），彩色攝像機(jī)（TK～C1481BEC，JVC JAPAN），鏡檢加熱器（NFV52，富士平工業(yè)株式會(huì)社），相差顯微鏡（BX41，OLYMPUS JAPAN），密度儀（ACCUCELL，IMV FRANCE）分析天平（ER～108A，AND JAPAN），精液二次稀釋裝置（FA～435，F(xiàn)HK JAPAN），全自動(dòng)細(xì)管精液冷凍儀（EUROTHERM 2704，IMV FRANCE），超凈工作臺(tái)（DL～CJ～1ND～Ⅱ，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司），高壓滅菌器（SS～325，TOMY JAPAN），恒溫培養(yǎng)箱（MIR～260，三洋電機(jī)株式會(huì)社）。

1．3 疫苗免疫

在秋季，采用口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型、A型三價(jià)滅活疫苗（金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)），在種公牛頸部進(jìn)行肌肉注射，劑量為1mL/頭。

1．4 精液采集、質(zhì)量檢測(cè)和冷凍精液制作

口蹄疫三價(jià)苗注射前后，嚴(yán)格按照《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》（NY/T1234-2006）[4]對(duì)種公牛進(jìn)行精液采集，并對(duì)精液進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)、稀釋、冷凍制作和儲(chǔ)存。采精頻率為2次/周。

由采精人員進(jìn)行精液采集，室內(nèi)技術(shù)人員利用相差顯微鏡及相應(yīng)的顯像系統(tǒng)進(jìn)行鮮精活力檢查，并通過(guò)密度儀來(lái)檢測(cè)鮮精密度，再利用分析天平稱(chēng)量精液采集管和精液的重量來(lái)計(jì)算射精量。將鮮精活力達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的精液用種公牛站配置的專(zhuān)用稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)胖?℃冷柜中平衡，并通過(guò)精液二次稀釋裝置對(duì)其進(jìn)行二次稀釋。然后進(jìn)行分裝、打印、冷凍，并將凍精產(chǎn)品暫時(shí)儲(chǔ)存起來(lái)。待經(jīng)過(guò)型式檢驗(yàn)合格后，方可儲(chǔ)存于相應(yīng)的液氮罐中，并放置于冷凍精液儲(chǔ)存庫(kù)中長(zhǎng)期貯存。

1．5 凍精產(chǎn)品型式檢驗(yàn)

嚴(yán)格按照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《牛冷凍精液》（GB 4143-2008）[5]進(jìn)行型式檢驗(yàn)，包括鮮精活力、凍精活力、凍精精子畸形率（簡(jiǎn)稱(chēng)“畸形率”，下同）等。

1．6 統(tǒng)計(jì)分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0 One Way ANOVA進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行Duncan檢驗(yàn) ，各時(shí)間段數(shù)據(jù)均以“Mean±SD”表示。

2 結(jié)果與分析

2．1 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)2～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響從表1可以看出，注射前半個(gè)月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力差異均不顯著（P＞0.05）；而注射后第1周的凍精產(chǎn)量（簡(jiǎn)稱(chēng)“產(chǎn)量”，下同）、注射后第2周的畸形率均顯著高于注射前半個(gè)月（P＜0.05），其他各時(shí)間段差異不顯著（P＞0.05）。

2．2 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

從表2可以看出，注射前半個(gè)月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力和產(chǎn)量差異不顯著（P＞0.05），而注射后第2周的畸形率顯著高于注射前半個(gè)月（P＜0.05），其他各時(shí)間段差異不顯著（P＞0.05）。

表2 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

表3 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)3～5歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

2．3 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)3～5歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

從表3可以看出，注射前半個(gè)月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力和產(chǎn)量差異不顯著（P＞0.05）。而注射后第2周的畸形率顯著高于其注射后第1周（P＜0.05），其他各時(shí)間段差異不顯著（P＞0.05）。

2．4 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)7～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

從表4可以看出，注射前半個(gè)月及注射后第1、2、3、4周的射精量、鮮精活力、鮮精密度和凍精活力差異不顯著（P＞0.05）。而注射后第1周的畸形率和產(chǎn)量顯著高于注射前半個(gè)月（P＜0.05），其他各時(shí)間段差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

口蹄疫三價(jià)滅活疫苗一免多效，縮短了防疫周期，使防疫工作省工省時(shí)，減少了對(duì)牲畜的免疫刺激次數(shù)，其免疫效果良好、安全性高、防疫范圍更廣，自面世以來(lái)，深受市場(chǎng)歡迎，并已逐漸成為口蹄疫疫苗的主要選擇對(duì)象?？谔阋咭呙缱⑸涫欠N公牛站春秋兩季防疫的工作重點(diǎn)，而種公牛在24～36月齡達(dá)到體成熟，3～6歲時(shí)是利用的最佳年齡，種公牛以后隨著年齡的增長(zhǎng)，公牛的性欲與精液品質(zhì)開(kāi)始下降[6]。所以，本試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析了口蹄疫三價(jià)苗對(duì)2～11歲荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響，并分析了其對(duì)2歲、3～5歲和7～11歲三個(gè)年齡段種公牛影響的差異性。

從統(tǒng)計(jì)結(jié)果來(lái)看，口蹄疫三價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛的射精量、鮮精活力、鮮精密度和凍精活力無(wú)顯著影響；而相對(duì)于注射前半個(gè)月，注射后第1周的產(chǎn)量、注射后第2周的畸形率均升高。這表明，口蹄疫三價(jià)苗注射后未對(duì)精液產(chǎn)量產(chǎn)生不利影響，但卻導(dǎo)致了注射后第2周的畸形率升高，影響時(shí)間為1周，而其他方面無(wú)顯著影響。但對(duì)不同年齡段的公牛影響又不盡相同。相同之處是對(duì)射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力無(wú)顯著影響。不同之處是，2歲種公牛注射后第2周的畸形率與注射前半個(gè)月相比，顯著升高；3～5歲種公牛注射后第2周的畸形率與注射后第1周相比，顯著升高； 而7～9歲種公牛注射后第1周的畸形率和產(chǎn)量與

表4 口蹄疫三價(jià)苗對(duì)7～11歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

4 結(jié)論

口蹄疫三價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力無(wú)顯著影響，對(duì)凍精產(chǎn)量無(wú)不利影響，并能導(dǎo)致畸形率升高，但對(duì)不同年齡段種公牛影響不完全相同。其中，凍精產(chǎn)量升高應(yīng)該是種公牛冷凍精液生產(chǎn)受夏季高溫不利影響逐漸消失、產(chǎn)量不斷恢復(fù)的結(jié)果；而口蹄疫三價(jià)苗注射前后畸形率的變化，可能與疫苗的注射應(yīng)激及疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對(duì)動(dòng)物細(xì)胞具有毒性作用有關(guān)[7]，也可能與口蹄疫免疫反應(yīng)有關(guān)。對(duì)不同年齡段種公牛產(chǎn)生不同的影響，這可能與不同生理階段的生殖機(jī)能特點(diǎn)有關(guān)，其影響機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

[1] 陳征,鄭明．口蹄疫疫苗的正確使用[J]．中國(guó)獸藥雜志,2009,43(9): 55-56．

[2] 《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》農(nóng)醫(yī)發(fā)[2007]12號(hào)．

[3] 《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》（NY/T1446-2007）．

[4] 《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》（NY/T1234-2006）．

[5] 《牛冷凍精液》（GB 4143-2008）．

[6] 翁春玲,佟國(guó)軍,隋明． 影響種公牛精液品質(zhì)的因素[J]．黑龍江動(dòng)物繁殖,2009,17(2):42-44．

[7] 蔣文俊,李華春,李樂(lè),等．口蹄疫疫苗研究進(jìn)展[J]．畜牧與獸醫(yī),2004,36(5):42-43．

The Effect of Foot-and-mouth Disease Trivalent Vaccine on the Production of Frozen Semen of Holstein Bull

ZHAO He1, ZHAO Qing-bin1, WANG Mu-feng1, CHEN Li-dong2, YANG Zhi-yong1
(1.Tianjin Diary Cattle Development Center, Tianjin 300381; 2.The Veterinary Bureau of Yuanbaoshan District, Chifeng 024000)

The objective of the study was to explore the effect of injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 ,and Type A) Bivalent Vaccine on the production of frozen semen of Holstein bulls. After intramuscular injecting Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 ,and Type A)Trivalent Vaccine into Holstein bull of 2～11 years old, the difference of the volume per ejaculate, the sperm motility and theconcentration of fresh semen, the sperm motility, the abnormal sperm percentage and the production of frozen semen were analyzed statistically, when two weeks before the injection, the first week, the second week, the third week and the fourth week after the injection. Results showed that: (1)In Holstein bulls of 2～11years old, it had no significant difference in each period that the volume per ejaculate, the concentration and the sperm motility of fresh semen, the sperm motility of frozen semen (P＞0.05); the production of the first week and the abnormal sperm percentage of the second week were higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05), and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05).(2)In bulls of 2 years old, the abnormal sperm percentage of the second week was higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05),and it had no significant difference in each period(P＞0.05).(3)In bulls of 3～5 years old, the abnormal sperm percentage of the second week were higher than that of the first week after the injection (P＜0.05),and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05). (4) In bulls of 7～11 years old, the production and the abnormal sperm percentage of the first week were higher than that of two weeks before the injection (P＜0.05), and it had no significant difference in the other periods (P＞0.05). The conclusion could be drawn that there was no statistical differences in the volume per ejaculate, the sperm motility and the concentration of fresh semen, the sperm motility of frozen semen of Holstein bull kept for covering that the injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 and Type A) Trivalent Vaccine, and had no adverse effect on the production, and induced the higher of the abnormal sperm percentage of frozen semen, and these statistical differences in different stages of the age were different.

Foot-and-Mouth Disease (Type O, Type Asia 1 and Type A) Trivalent Vaccine, Inactivated; Bull kept for covering; Semen

S858.23

A

1004-4264（2017）05-0024-05

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.05.007

第二屆“牛人”攝影大賽作品 《收獲》——王學(xué)凱 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院

2016-09-27

趙赫（1981-），女，天津人，碩士，主要從事奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定工作。