黃文華 陳文 李秀英 馬龍川

肝益復(fù)膠囊治療肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究※

黃文華 陳文 李秀英 馬龍川

（江西中醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，撫州344000）

目的研究肝益復(fù)膠囊對(duì)D-氨基半乳糖急性肝損傷小鼠和四氯化碳慢性肝損傷大鼠的保肝作用。方法以腹腔注射D-氨基半乳糖復(fù)制小鼠急性肝損傷模型、皮下注射CCl4復(fù)制大鼠慢性肝損傷模型。以血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，肝組織超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量、肝羥脯氨酸(Hyp)、肝組織病理學(xué)檢查等為指標(biāo)，觀察肝益復(fù)膠囊的抗肝損傷作用。結(jié)果肝益復(fù)膠囊對(duì)D-氨基半乳糖造成的急性肝損傷小鼠ALT，AST活性升高有顯著的降低作用。肝益復(fù)膠囊可顯著降低CCl4慢性肝損傷大鼠ALT，AST活性，升高肝組織SOD、GSH水平，降低MDA、Hyp水平。結(jié)論肝益復(fù)膠囊對(duì)D-氨基半乳糖急性肝損傷小鼠和四氯化碳慢性肝損傷大鼠均有顯著的保肝作用。

肝益復(fù)膠囊；肝損傷；實(shí)驗(yàn)研究

肝損傷是由病毒、酒精、理化等多因素導(dǎo)致的臨床常見(jiàn)的危害人類(lèi)健康的疾病。肝益復(fù)膠囊是本課題組篩選臨床經(jīng)驗(yàn)方并結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理研究設(shè)計(jì)研制的保肝制劑。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物昆明種小鼠，體重（20±2）g，雌雄兼用；SD大鼠，體重（210±30）g，雌雄兼用，以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，合格證號(hào)：02196-02。

1.2 受試藥物肝益復(fù)膠囊，以下簡(jiǎn)稱GYF膠囊，由本校制劑室制備，由葉下珠、白芍、黃芪、丹參、三七、虎刺、茯苓、甘草等藥物成分組成，給藥劑量(按生藥計(jì)）大鼠低、中、高劑量組依次為1.5 g/kg、3.0 g/ kg、6.0 g/kg。小鼠低、中、高劑量組依次為2.5 g/kg、5.0 g/kg、10.0 g/kg。

對(duì)照藥物：聯(lián)苯雙酯，北京協(xié)和藥廠生產(chǎn)，規(guī)格1.5 gm×500粒/瓶，生產(chǎn)批號(hào)：14090103批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H11020980給藥劑量大鼠為50 mg/kg，小鼠為80 mg/kg。

1.3 試劑超氧化物歧化酶試劑盒、谷胱甘肽試劑盒、丙二醛試劑盒、羥脯氨酸試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。四氯化碳：天津市化學(xué)試劑一廠，D-氨基半乳糖：Sigma公司。

1.4 研究方法

1.4.1 GYF膠囊對(duì)D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的影響昆明種小鼠60只，體重（20 g±2）g，雌雄兼用。小鼠購(gòu)入后適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型組、GYF膠囊低、中、高劑量組、聯(lián)苯雙酯組，每組10只。GYF膠囊低、中、高劑量組分別按2.5 g/kg、5.0 g/kg、10.0 g/k劑量灌胃。聯(lián)苯雙酯組按80 mg/kg灌胃。正常對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，1次／d．連續(xù)5 d。末次給藥后2 h，給予8%的D-氨基半乳糖0.1 ml／10 g，ip，注射后禁食2 h。于注射后40 h，禁食12 h，全部小鼠眼眶取血，置離心機(jī)中4000 r/min離心10 min，分離血清，以賴氏法測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平、以比色法測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平。

1.4.2 GYF膠囊對(duì)四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的影響取SD大鼠60只，雌雄各半，體重160～200 g。大鼠購(gòu)入后適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、GYF膠囊低、中、高劑量組、聯(lián)苯雙酯組，每組10只。除正常對(duì)照組外，各組大鼠按體重皮下注射40%CCl4橄欖油溶液3 ml/kg（首次注射劑量為為5 ml/kg），2次/W，共8 W。自造模之日起，GYF膠囊低、中、高劑量組分別按1.5 g/kg、3.0 g/kg、6.0 g/kg劑量灌胃、聯(lián)苯雙酯組按50 mg/kg劑量灌胃，正常對(duì)照組和模型組均以等體積生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)用藥8 W。第8周末，將大鼠頸靜脈采血后處死，用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)肝功能指標(biāo)ALT、AST、ALB、GLO。，取肝右葉制成組織勻漿，按南京建成生物工程研究所試劑盒方法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽（GSH）、羥脯氨酸（hyp）含量。取肝左葉固定，按冰凍切片法制作切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，樣本均數(shù)總體差異比較用方差分析，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 GYF膠囊對(duì)D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01；與GYF低劑量組比較#P＜0.05，##P＜0.01

表1 GYF膠囊對(duì)四氯化碳致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST含量的影響（x±s，n=10）

2.2 GYF膠囊對(duì)四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

表2 GYF膠囊對(duì)CCl4致慢性肝損傷大鼠血清ALT、AST、ALB、GLO的影響（xs，n=10）

表2 GYF膠囊對(duì)CCl4致慢性肝損傷大鼠血清ALT、AST、ALB、GLO的影響（xs，n=10）

組別劑量(g/kg)ALT(U/L)AST(U/L)ALB(g/L)GLO(g/L)正常組34.62±5.4337.46±5.4636.52±3.1723.82±2.43模型組118.65±14.26121.38±15.2424.52±2.2337.26±3.56 GYF膠囊6.052.53±11.58**#63.67±10.92**#31.46±2.98**#25.16±2.93**#3.053.75±8.62**#61.75±9.76**#32.59±3.56**#24.28±2.16**#1.560.64±7.56**71.65±7.48**28.82±2.89*29.17±2.24*聯(lián)苯雙酯0.0564.39±8.32**63.25±8.35**29.86±2.15*28.21±2.93*

與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01；與GYF低劑量組比較#P＜0.05##P＜0.01

表3 GYF膠囊對(duì)CCl4致慢性肝損傷大鼠肝組織SOD、MDA、GSH、hyp的影響（x±s，n=10）

與模型組比較*P＜0.05**P＜0.01；與GYF低劑量組比較#P＜0.05；與聯(lián)苯雙酯組比較★P＜0.05

2.3 對(duì)四氯化碳慢性肝損傷大鼠肝組織病理變化的影響光鏡下觀察可見(jiàn)模型組大鼠肝細(xì)胞呈脂肪變性及點(diǎn)狀壞死，肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)可見(jiàn)纖維細(xì)胞增生；GYF膠囊高、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維細(xì)胞增生，但病理程度較模型組明顯減輕；GYF膠囊中劑量組匯管區(qū)未見(jiàn)纖維細(xì)胞增生。

3 討論

肝益復(fù)膠囊由葉下珠、白芍、黃芪、丹參、三七、虎刺、茯苓、甘草等藥物成分組成，葉下珠有平肝清熱、利水解毒之功效，我國(guó)民間用治黃疸、肝炎等癥有良好效果[1]。白芍是肝炎及肝硬化中醫(yī)治療的重要組方之一，其有效成分白芍總苷可顯著降低肝損傷小鼠的血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，并能對(duì)肝細(xì)胞變性和壞死有明顯保護(hù)作用[2]。黃芪具有清除自由基和穩(wěn)定肝細(xì)胞膜作用．能減少肝細(xì)胞壞死，促進(jìn)肝細(xì)胞再生[3]。丹參中主要的水溶性成分—丹參酸乙對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞采用體外四氯化碳熏蒸直接造成的肝細(xì)胞損傷具有明顯的保護(hù)作用[4]，三七具有止血、散瘀、消腫、止痛、生肌、增強(qiáng)免疫、強(qiáng)壯、抑制腫瘤等多種功效[5]，甘草為中醫(yī)調(diào)百藥之品，甘草通過(guò)物理、化學(xué)方式的沉淀、吸附與結(jié)合來(lái)加強(qiáng)肝臟的解毒功能，故具有保肝、抗病毒、抗炎、抗菌等多種活性。本實(shí)驗(yàn)表明肝益復(fù)膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝損傷具有明顯的保肝作用。

[1]全國(guó)中草藥匯編編寫(xiě)組編.全國(guó)中草藥匯編：上冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1987.

[2]戴俐明，陳學(xué)廣，徐叔云.白芍總甙對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝炎的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1993，9(6)：449-453.

[3]吳炎，田怡，陳建文.黃芪注射液對(duì)肝硬化患者肝功能的影響.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1999，19(6)：363.

[4]陳岳祥，李石，范列英，等.丹參單體IH764-3抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，1998，76（8）：636.

[5]中藥藥理學(xué)[M].沈映君，北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.

Experimental Study on Ganyifu Capsule in the Treatment of Hepatic Injury

HUANG Wenhua,CHEN Wen,LI Xiuying,MA Longchuan
(Pharmacy Department,Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine,Jiangxi Province,Fuzhou 344000,China)

Objective To investigate the effec ts of Ganyifu capsule on D-galactosamine acute liver injury mice and carbon tetrachloride chronic liver injury rats.Methods By taking lumbar injection D-galactosamine to build the acute mouse liver injury mode1,injecting hypodermic CCl4 to set up the acute rat liver injury model and chronic rat hepatic injury mode1,Ganyifu capsule was given intragastrically in the treated groups.At the end of test,the concentrations of ALT and AST in serum of mouse,the SOD, GSH,MDA and Hyp in liver homogenate were detected.Liver was for histopathologleal examination.Results For the acute hepatic injury mouse induced by CCl4,Ganyifu capsule can significantly inhibit the elevation of ALT and AST in seram.In the chronic hepatic injury mode1 rats,Ganyifu capsule can significantly bring down the ALT and AST,increase significantly the SOD,GSH,and decrease MDA and Hyp in liver homogenate.Conclusion Ganyifu capsule showed a remarkable protective effect in the treatment of experimental hepatic injury in rats and mice.

Ganyifu capsule;hepatic injury;experimental study

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.12.062

1672-2779（2017）-12-0137-02

：李海燕本文校對(duì)：王英

2017-04-07）

江西省撫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目【（2014）13號(hào)】