楊惟喜

（南平市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，福建 南平 353000）

全自動固相萃取儀分析蔬菜中5種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法研究

楊惟喜

（南平市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，福建 南平 353000）

文中建立了利用全自動固相萃取儀（Fotector 02HT）對蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢驗方法。蔬菜經(jīng)過制樣超聲提取后，分取，使用Auto EVA-60濃縮至3.0mL后經(jīng)過 Fotector 02HT全自動固相萃取儀凈化，自動完成 SPE 柱活化、樣品上樣、淋洗、收集等步驟，經(jīng)過濃縮后的收集液經(jīng)過氮吹濃縮、溶劑轉(zhuǎn)換、定容后，用氣相色譜檢測，外標(biāo)法定量。通過全自動固相萃取的蔬菜樣品，目標(biāo)組分的回收富集更加充分，經(jīng)多次試驗發(fā)現(xiàn)，蔬菜樣品的加標(biāo)回收率均在84.7%～92.7%，相關(guān)系數(shù)在0.9998～0.9999，線性關(guān)系很好，RSD均小于10%。通過該方法，能夠比較快速準(zhǔn)確測定五種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留含量。

有機(jī)磷；氣相色譜；全自動固相萃取

1 引言

近年來我國農(nóng)業(yè)病蟲害的不斷發(fā)生，農(nóng)民以及部分蔬菜生產(chǎn)基地，為了獲得更美觀更豐產(chǎn)的蔬菜，過量使用有機(jī)磷等農(nóng)藥。根據(jù)國家質(zhì)檢總局以及各省質(zhì)監(jiān)局試驗數(shù)據(jù)通報中發(fā)現(xiàn)，農(nóng)藥殘留超標(biāo)情況依然存在，尤其是三唑磷、毒死蜱農(nóng)藥殘留在蔬菜中超標(biāo)的問題多次被曝光，這些農(nóng)藥會通過生物富集和食物鏈的作用，富集和傳遞，嚴(yán)重危害人類的健康[1]。蓄積的殘留農(nóng)藥甚至能通過母乳排出，影響下一代[2]。目前，針對我國農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥最高殘留限量（MRL）已經(jīng)制定了嚴(yán)格的國家標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)藥殘留檢驗仍然是目前各個質(zhì)檢機(jī)構(gòu)面臨的比較艱巨的檢驗任務(wù)。針對廣大質(zhì)檢工作者困惑的有機(jī)磷前處理回收率低，檢出限不夠靈敏的問題，文中采用Fotector 02HT全自動固相萃取儀，建立蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留全自動固相萃取前處理方法，檢出限及加標(biāo)回收率令人滿意。

2 所需試劑、儀器及耗材

2.1 試劑

（1）農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99%；5種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品儲備液：分別稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解，配制成1000mg/L的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-18℃保存；農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：量取適量的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液用丙酮配制成50.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，-18℃保存；量取適量的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用丙酮配制成5.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

（2）乙腈（色譜純），甲苯（色譜純），正己烷（色譜純），無水硫酸鈉（優(yōu)級純）。

2.2 儀器及耗材

瑞科全自動固相萃取系統(tǒng)(Fotector 02HT SPE)；

氣相色譜儀器（島津氣相GC2010plus）；

Auto EVA-60全自動平行濃縮儀；

C18(CNW,500mg/6mL)；

石墨化碳氨基復(fù)合柱NH2carb(CNW,500mg/6mL)。

3 實驗方法

3.1 樣品制備

稱取蓋菜、菠菜以及豆角各200g，取可食部分將其研磨粉碎。經(jīng)過研磨的樣品10.00g（精確至0.01g）加入一定的標(biāo)準(zhǔn)溶液，樣品制備及加標(biāo)信息見下表1，加入40.0mL乙腈高速均質(zhì)2min。勻漿后的樣品經(jīng)4000r/min離心5min后上清液轉(zhuǎn)移到另外50.0mL的離心管中，加入5g～7g無水硫酸鈉，蓋上蓋子，劇烈震蕩1min，4000r/ min離心5min，使水相和有機(jī)相分層[3]。分取20.0mL，使用Auto EVA-60全自動平行濃縮儀將樣品濃縮至3.0mL，將所有的濃縮液轉(zhuǎn)移至全自動固相萃取儀樣品管中，上樣分析。

表1 樣品信息表（mg/kg）

3.2 固相萃取凈化條件

3.0mL樣品提取液經(jīng)過全自動固相萃取儀，用乙腈+甲苯（3+1）活化固相萃取柱[4]，攔截雜質(zhì)，洗脫收集目標(biāo)組分，收集上樣流出液和淋洗液用氮氣濃縮，氮氣吹干溫度控制在50℃，濃縮至大約0.5mL后用丙酮定容到1.0mL供GC-FPD檢測。具體固相萃取凈化條件見表2。

固相萃取柱：石墨化碳 氨基復(fù)合柱NH2carb (CNW,500mg/6mL)

表2 固相萃取儀程序

3.3 氣相色譜法測定儀器條件

（1）Rtx-1701石英毛細(xì)管柱30m×250μm×0.25μm或者相當(dāng)者；

（2）色譜柱程序升溫：70℃（1min）→100℃/ (30℃/min)→220℃（30℃/min，5min）→260℃（15℃/min，2min）；

（3）檢測條件：進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；GC2010Plus氫氣流量62.5ml/min，空氣流量90ml/min；進(jìn)樣模式：不分流；柱流量1.5ml/min。

4 試驗結(jié)果與討論

4.1 樣品前處理的優(yōu)化

采用傳統(tǒng)的前處理方法，樣品直接用有機(jī)試劑溶解然后進(jìn)樣分析的方法，樣品雜質(zhì)峰比較多，檢出限達(dá)不到檢驗要求。本方法采用全自動固相萃取的方法，根據(jù)目標(biāo)組分的吸附特性，選擇合適的固相萃取小柱。通過多次試驗驗證，發(fā)現(xiàn)氨基復(fù)合柱NH2carb能有效的滿足實驗要求。試驗過程中，采用全自動固相萃取，減少了有機(jī)試劑甲苯、丙酮等對人體的傷害，并且有效提高了工作效率。

4.2 色譜條件的優(yōu)化

針對常做的五種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，通過優(yōu)化色譜條件，探索出合適的升溫程序，在保證目標(biāo)組分有效分離的情況下，縮短了出峰時間，也可以有效提高試驗速度。

4.3 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

敵敵畏、甲拌磷、毒死蜱、馬拉硫磷、三唑磷五種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，添加到相應(yīng)的樣品基底中，樣品經(jīng)過制樣后通過氣相色譜檢驗，保留時間定性，外標(biāo)法計算定量，以質(zhì)量濃度（mg/kg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，線性范圍、線性回歸方程（x為質(zhì)量濃度；y為峰面積）相關(guān)系數(shù)及最低檢出限如表3所示，五種農(nóng)藥殘留在0.01mg/kg到1.00mg/kg的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，五種有機(jī)磷色譜圖如圖1。

表3 5種有機(jī)磷的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

圖1 有機(jī)磷混標(biāo)色譜圖

圖1中從左到右出峰順序依次為敵敵畏、甲拌磷、毒死蜱、馬拉硫磷、三唑磷；采用當(dāng)前設(shè)定的升溫程序，五種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分離度均大于1.5，該色譜條件下多次進(jìn)樣分析，試驗穩(wěn)定，平行線非常好。

4.4 方法精密度及回收率

根據(jù)表1制備三種蔬菜加標(biāo)樣品，相同試驗條件下，加標(biāo)蔬菜樣品進(jìn)行全自動固相萃取處理，經(jīng)過多次分析得出試驗數(shù)據(jù)，五種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留加標(biāo)數(shù)值及實際回收測的數(shù)字如下表4，計算精密度及回收率，可得出測得結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)差在0.65%～3.61%，樣品中目標(biāo)組分的回收率大致在84.7%～92.7%。試驗過程中發(fā)現(xiàn)，在將乙腈甲苯濃縮至近干時，需要把握好濃縮程度，如果濃縮蒸干太久，有機(jī)磷會揮發(fā)，影響目標(biāo)組分的回收率。

表4 回收率試驗及精密度測定結(jié)果

5 小結(jié)

在本實驗室條件下，優(yōu)化了蔬菜中農(nóng)藥殘留檢驗樣品前處理過程，采用全自動固相萃取裝置，克服了手動固相萃取前處理過程中存在的對流速控制不準(zhǔn)確以及有機(jī)試劑對人體傷害等問題，同時結(jié)合筆者所在單位目前比較繁重的檢驗任務(wù)，優(yōu)化了升溫程序，有效縮短了目標(biāo)組分出峰時間，雜質(zhì)干擾小，精密度及準(zhǔn)確度均達(dá)到滿意的結(jié)果，在批量的檢驗工作中具有較高的實踐指導(dǎo)意義。

[1]有機(jī)磷農(nóng)藥的聯(lián)合毒性及其毒理學(xué)機(jī)理研究［D］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2002.20-35.

[2]林錚，黃金祥.全球農(nóng)藥中毒概況［J］.中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2005,12,18（6）：376-379.

[3]GB/T 19679-2006，糧谷中475種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜—質(zhì)譜法[S].

[4]張艷.農(nóng)藥殘留分析中不同提取溶劑的評價［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2006(9):28-29.

Study on Determination of 5 Organophosphorus Pesticide Residues in Vegetables by Automatic SPE

YANG Wei-Xi
(Quality Inspection Institute of Nanping,Nanping 353000,Fujian,China)

A method for the determination of organophosphorus pesticide residues in vegetables by automatic solid-phase extraction (Fotector 02HT) was established in this paper. The vegetables sample was through ultrasonic extraction,separation,the use of Auto EVA-60 to 3mL Fotector 02HT enrichment by automatic solid-phase extraction column puri fication,automated SPE activation,sample collection,leaching,condensed liquid with the nitrogen concentration,solvent conversion and constant volume. The recoveries of the spiked samples were in the range of 84.7%~92.7%,the linear relationship was good,the correlation coef ficient was 0.9998~0.9999,RSD was less than 10%,and the content of the five organophosphorus pesticides could be determined quickly and accurately.

Organic phosphorus; HPGC; Automatic solid-phase extraction

2017-02-08

楊惟喜，男，南平市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，所長，高級質(zhì)量工程師