文│張仙保 張良斌 （內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市農(nóng)牧業(yè)科學(xué)研究院）

馬國文（包頭尚科動物疾病研究所）

>喬月榮 苗永泉（內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市動物疫病預(yù)防控制中心）

小反芻獸疫和腺病毒混合感染案例分析

文│張仙保 張良斌 （內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市農(nóng)牧業(yè)科學(xué)研究院）

馬國文（包頭尚科動物疾病研究所）

>喬月榮 苗永泉（內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市動物疫病預(yù)防控制中心）

小反芻獸疫（Peste des petits ruminants，PPR）又稱偽牛瘟，也叫羊瘟。是由小反芻獸疫病毒引起小反芻獸的急性或慢性傳染病，主要癥狀為發(fā)熱，口腔黏膜潰爛，進而引起腹瀉和肺炎。與牛瘟病毒有交叉免疫。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）已把小反芻獸疫列為A類疫病，中國將小反芻獸疫定為一類傳染病。綿羊腺病毒（Ovine adenoviruses，OA）的感染是由羊腺病毒引起的傳染病，主要引起羊的肺炎和腹瀉。目前，小反芻獸疫與腺病毒混合感染綿羊還沒有報道。

筆者在2014年3月，對某場疑似得小反芻獸疫的病羊進行了小反芻獸疫病毒抗原和腺病毒抗原ELISA檢測，為了類癥鑒別，還同時進行了魏氏梭菌抗原、偽狂犬病抗原、細小病毒抗原、戊型肝炎抗原、沙門氏桿菌抗原、冠狀病毒抗原、輪狀病毒抗原、腹瀉黏膜病毒抗原等的ELISA檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，被檢測的2只病羊全部被小反芻獸疫病毒和腺病毒感染，而其他疾病則為陰性，現(xiàn)將分析結(jié)果報告如下：

一、材料與方法

1.材料。病料采集自羊場病羊，對自然死亡的病羊采集其血液、各臟器組織。試驗使用的ELISA試劑盒購自貝茵萊生物技術(shù)有限公司（原理為間接法測抗原）。使用主要儀器包括酶標(biāo)儀、微型振蕩器（型號ZW-A）、恒溫水浴鍋、高速離心機等。

2.方法。

（1）抗原檢測。應(yīng)用ELISA方法，主要檢測小反芻獸疫病毒抗原、腺病毒抗原、細小病毒抗原、偽狂犬病毒抗原、戊型肝炎病毒抗原、沙門氏桿菌抗原、腹瀉黏膜病毒抗原、傳染性鼻氣管炎抗原、呼吸道合胞體抗原、布病抗原和傳染性胸膜肺炎抗原，在操作時，嚴格按照試劑盒的說明書進行。

（2）ELISA檢測結(jié)果判定。按試劑盒說明書所示進行結(jié)果判定。

二、結(jié)果與分析

1.流行病學(xué)特點和臨床檢查。2014年2月，某羊場發(fā)生了一種與小反芻獸疫相似但癥狀比較復(fù)雜、病死率偏高的傳染病，成羊、羔羊均可發(fā)生，羔羊死亡率高。病羊有急性經(jīng)過的，也有慢性經(jīng)過的。但發(fā)病后癥狀不盡相同，有的厭食或不食，有的發(fā)熱40℃以上，口腔黏膜出現(xiàn)不同程度的潰瘍，有的呼吸困難，有的天然孔有膿性分泌物，并且大多數(shù)病羊因發(fā)生小葉性肺炎而引起咳嗽和由胃腸炎引起的腹瀉。在流行病學(xué)調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，該羊場曾經(jīng)發(fā)生過類似的傳染病，發(fā)病率、死亡率都很高。

小反芻獸疫病毒和腺病毒混合感染的病羊其臨床癥狀表現(xiàn)不盡相同，早期主要為發(fā)熱，多在40℃以上、鼻孔有膿性分泌物，嘴周圍、眼角都有分泌物或分泌物干燥后結(jié)成的結(jié)痂，有的陰道亦有黏性分泌物流出。病羊咳嗽、喘息，肺部有呼吸啰音等癥狀。后期多為嚴重腹瀉，糞便呈稀糊狀或水樣，多數(shù)混有脫落的腸黏膜，有的則從肛門噴射出帶脫落黏膜的稀糞，糞便污染了整個尾巴和后肢，尤其肛門周圍更加嚴重，因持續(xù)腹瀉，呈現(xiàn)不同程度的脫水。

2.剖檢變化。對2只病羊進行剖檢發(fā)現(xiàn)，病變主要集中在消化道、呼吸道和免疫系統(tǒng)。上消化道，口腔、咽喉、食道、黏膜等處均發(fā)生不同程度的糜爛、潰瘍，潰瘍大小不一，形如火山口；在下消化道，瘤胃、網(wǎng)胃、瓣胃和皺胃的黏膜糜爛，極易脫落，尤其黏膜面較多的皺胃更為嚴重。而十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、盲腸及直腸的黏膜面以出血、充血和水腫為主，同時可見黏膜脫落，腸腔內(nèi)容物有惡臭氣味。在呼吸系統(tǒng)，鼻腔內(nèi)黏膜有與口腔相類似的糜爛和潰瘍，氣管和支氣管黏膜有出血點，肺臟表面及切面散布著多個暗紅色、質(zhì)地稍堅實的病灶；在免疫系統(tǒng)，脾和淋巴結(jié)受侵蝕嚴重，脾臟顏色變淺，質(zhì)地變硬。有壞死灶，腸系膜淋巴結(jié)、頜下淋巴結(jié)、肩前淋巴結(jié)、肺門淋巴結(jié)均腫大變硬，表面還有小出血點。

3.臨床病理變化特點。小反芻獸疫病毒是麻疹病毒屬的成員，故它的致病性與麻疹病毒屬相似，病毒主要攻擊淋巴組織和上皮細胞，病毒在上皮細胞內(nèi)復(fù)制并破壞上皮細胞，導(dǎo)致上皮細胞和淋巴細胞變性壞死，致使免疫系統(tǒng)和上皮組織受到嚴重損傷；腺病毒的靶細胞主要是上皮細胞，腺病毒作用于支氣管上皮細胞、細支氣管上皮細胞、呼吸性細支氣管和肺泡上皮細胞，引起變性、壞死、單核細胞浸潤及肺泡內(nèi)透明膜的形成，進而形成肺炎；腺病毒還作用于消化道的黏膜上皮細胞，并造成黏膜上皮細胞的變質(zhì)性炎、壞死性炎，進而形成腸炎。由于小反芻獸疫病毒和腺病毒均同時作用于呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)，因此，呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)所造成的損傷遠較單一病原作用時嚴重。

在呼吸系統(tǒng)，可見呼吸道上皮黏膜變性、壞死、脫落，多核巨細胞形成，上述細胞胞漿可見嗜伊紅性包涵體，胞核內(nèi)也可見包涵體；肺臟主要呈現(xiàn)小葉性肺炎的變化，病灶內(nèi)細支氣管壁增厚、水腫和白細胞浸潤，細支氣管內(nèi)可見漿液性滲出物，其內(nèi)還有脫落的上皮細胞、嗜中性粒細胞和淋巴細胞。肺泡壁毛細血管充血，肺泡內(nèi)可見漿液性滲出物、脫落的上皮細胞、嗜中性粒細胞和淋巴細胞。小葉性肺炎病灶周圍有組織代償性的氣腫。

◎圖2 病羊尾巴和后肢被稀糞污染

在消化系統(tǒng)，可見消化道各個腸段上皮黏膜不同程度的變性、壞死、脫落，多核巨細胞形成，上述細胞胞漿可見嗜伊紅性包涵體，也可在胞核內(nèi)見到核內(nèi)包涵體。

在淋巴系統(tǒng)，脾臟、扁桃體和各處的淋巴結(jié)可見細胞的壞死，表現(xiàn)為核固縮、核破裂或核消失，淋巴小結(jié)及脾小體及脾索細胞稀疏，淋巴細胞數(shù)量減少。早期竇壁細胞水泡變性，核內(nèi)和胞漿內(nèi)都可見包涵體，竇腔內(nèi)可見多核巨細胞，后期竇壁細胞壞死脫落。

4.ELISA抗原檢測結(jié)果。對2只病羊分別進行了小反芻獸疫病毒抗原檢測、腺病毒抗原檢測、魏氏梭菌抗原檢測、偽狂犬病抗原檢測、細小病毒抗原檢測、戊型肝炎抗原檢測、沙門氏桿菌抗原檢測、冠狀病毒抗原檢測、輪狀病毒抗原檢測、腹瀉黏膜病毒抗原檢測、傳染性鼻氣管炎抗原檢測、呼吸道合胞體抗原檢測、布病抗原檢測和傳染性胸膜肺炎抗原檢測。結(jié)果表明：2只病羊小反芻獸疫病毒抗原和腺病毒抗原全部呈陽性，而其他則全部陰性。

5.防治。

（1）預(yù)防。目前國內(nèi)外已有小反芻獸疫疫苗可預(yù)防該病，但保護率不一。腺病毒目前并無疫苗，只有采取綜合性防制措施。平時要加強飼養(yǎng)和管理，盡快建立并認真落實完善的生物安全體系，以保證畜舍衛(wèi)生和畜體健康衛(wèi)生。

（2）試治。小反芻獸疫屬于我國一類傳染病，如若發(fā)現(xiàn)，必須馬上上報，并在政府相關(guān)部門引導(dǎo)下，按照農(nóng)業(yè)部《小反芻獸疫防治技術(shù)規(guī)范》進行處置，一般采取以隔離、撲殺、封鎖、加強消毒滅源和監(jiān)測排查為主的措施，及時控制疫情。在出現(xiàn)大面積流行時，單靠撲殺和封鎖措施難以奏效，可考慮使用疫苗接種。為防止疫情擴散，原則上不建議治療。對于僅發(fā)生了個別病例并送來檢查的病羊，以研究的態(tài)度進行了試治。

治療原則是：抗病毒、增強抵抗力、消炎、止瀉、調(diào)整水鹽代謝障礙和補充能量。筆者使用干擾素、羊胎盤轉(zhuǎn)移因子、黃芪多糖注射液、雙黃連注射液、清開靈、糖皮質(zhì)激素、腸炎寧、腸道益生菌等藥物并配合廣譜抗生素如青霉素類、鏈霉素或頭孢類等藥物治療來增強動物抵抗力，對腹瀉嚴重以致脫水的病羊及時補充體液如生理鹽水、復(fù)方氯化鈉和補充能量如葡萄糖、ATP、細胞色素C和各種維生素，這樣對于恢復(fù)胃腸道的消化功能有明顯效果。腸黏膜損傷嚴重的要及時灌腸（果膠鉍、思密達、奧美拉唑、迪美佳、柳氮磺吡啶、云南白藥等），以保護腸黏膜不再繼續(xù)受到損害，進而改善動物身體抵抗力，使臨床癥狀減輕。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，混合感染的病羊消化道比單純感染要嚴重，愈后不良，并且容易成為傳染源，沒有治療價值，應(yīng)及時淘汰和撲殺。

三、小結(jié)與討論

1.小結(jié)。通過對病羊進行的流行病學(xué)調(diào)查、臨床病理學(xué)檢查和血清學(xué)檢測，發(fā)現(xiàn)該羊場的病羊發(fā)病具有小反芻獸疫病毒和腺病毒混合感染的特點，表現(xiàn)為，具有傳染性；不典型性發(fā)熱、鼻流漿液性膿性鼻液、眼流漿液性分泌物、口腔黏膜潰瘍、咳嗽、嚴重腹瀉；小葉性肺炎、胃腸炎、口腔炎、膿性鼻炎、結(jié)膜炎；病羊的小反芻獸疫病毒及腺病毒的抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）均為陽性，進一步分析說明小反芻獸疫病毒可以與腺病毒混合感染羊。

2.討論。小反芻獸疫病毒具有趨淋巴和趨上皮性，進入機體內(nèi)主要侵害上皮細胞和淋巴組織（口腔到直腸的消化道上皮細胞，從鼻腔到肺泡的呼吸道上皮細胞，淋巴結(jié)內(nèi)的淋巴竇上皮細胞和脾竇的上皮細胞和淋巴細胞）。病毒通過呼吸道和消化道入侵機體，病毒通過呼吸道進入機體后，先在咽喉、下頜淋巴結(jié)以及扁桃體復(fù)制，2～3天形成病毒血癥，隨后的2～3天首次出現(xiàn)臨床癥狀。小反芻獸疫病毒在引起淋巴細胞和上皮細胞壞死的同時，還能在上皮細胞和多核巨細胞中形成具有特征性的嗜伊紅性包涵體，具有診斷價值。由于該病毒會侵害免疫系統(tǒng)，造成全身淋巴結(jié)及脾臟的損傷，所以，一旦羊感染了小反芻獸疫病毒，容易造成后天免疫抑制，易繼發(fā)其他病原的感染，這也是該羊場的病羊先感染了小反芻獸疫病毒，而后又繼發(fā)感染了腺病毒的原因。

◎圖3 小葉性肺炎

腺病毒主要侵害肺臟的支氣管和肺泡、小腸的上皮細胞和常在淋巴細胞。在動物健康時，腺病毒就在動物腸道中作為腸道常在條件致病微生物而存在，當(dāng)機體免疫力降低時，特別是羊患了某些引起胃腸道炎癥的病原時，腺病毒會乘虛而入，成為致病源，協(xié)同原發(fā)病原對胃腸道上皮細胞發(fā)揮損傷作用。由此推斷，兩頭病羊應(yīng)是先得小反芻獸疫后，免疫力下降，又繼發(fā)腺病毒感染，由于兩病都會損傷腸道上皮細胞，使胃腸道損傷尤為嚴重。

根據(jù)本次對發(fā)病羊的研究，發(fā)現(xiàn)其臨床癥狀、病理變化與經(jīng)典的小反芻獸疫有很大區(qū)別，一方面是由于小反芻獸疫和腺病毒混感，另一方面是隨著環(huán)境的變化，小反芻獸疫病毒也在發(fā)生改變。應(yīng)積極加強對小反芻獸疫病毒基因組變異特性的研究。同時加強對該病的流行病學(xué)調(diào)查，進一步明晰致病機理，建立高效、快速的病原檢測新方法以及加強防治等方面的研究。

本次發(fā)病的主要是綿羊，成羊、羔羊均可發(fā)生，但羔羊死亡率高。病羊多數(shù)以急性為主，癥狀比較復(fù)雜，病羊有急性經(jīng)過的，也有慢性經(jīng)過的。對這個羊場的2只被檢羊應(yīng)用ELISA方法進行多種抗原抗原診斷時，發(fā)現(xiàn)這2只病羊全部被小反芻獸疫病毒和腺病毒感染，而其他病原則全部為陰性。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，如果一只羊發(fā)病后，可以通過直接或間接接觸傳染給同群未感染該病的健康羊，由此證實該病傳染源主要為病羊或帶毒羊，由于病羊或帶毒羊的呼吸道、消化道黏膜上皮特別是口腔和腸道都含有大量病毒，故病毒可以通過打噴嚏、唾液和糞便污染周圍環(huán)境，多數(shù)病毒通過飛沫或糞便間接傳染給未免疫的健康羊。

小反芻獸疫和腺病毒混合感染的病例其臨床表現(xiàn)為發(fā)病急，多數(shù)病羊體溫升高，高達41℃以上，持續(xù) 3～5天，為稽留熱表現(xiàn)；病羊精神沉郁，頭低耳耷，食欲減退，鼻鏡干燥?？?、眼周、鼻腔分泌物由稀薄的水樣黏液逐步變成膿性黏液，如果病羊并不死亡，這種癥狀可持續(xù)十多天。病羊發(fā)熱開始4天內(nèi)，或快或慢會出現(xiàn)如下病變：齒齦充血，吃粗飼料極易出血，口腔黏膜彌漫性潰瘍，久之可轉(zhuǎn)化為壞死，同時伴有口角處大量流涎。在該病后期，常見嚴重的水樣腹瀉，并糞便中混有血液。在出現(xiàn)上述癥狀的同時，出現(xiàn)咳嗽、氣喘癥狀。聽診時，肺部有啰音，后期可見腹式呼吸。有的羊有跛行癥狀、有的出現(xiàn)急性心力衰竭的癥狀。