米小芳，姜 霞，鄭繪霞，梁建芳，肖 虹(山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院病理科,太原 0000;山西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理教研室;運城市中心醫(yī)院內分泌科；通訊作者，E-mail：xiaohonghong9999@6.com)

RACK1和VEGF蛋白在非小細胞肺癌中的表達及意義

米小芳1，姜 霞2,3，鄭繪霞1，梁建芳1，肖 虹1*
(1山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院病理科,太原 030001;2山西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理教研室;3運城市中心醫(yī)院內分泌科；*通訊作者，E-mail：xiaohonghong9999@163.com)

目的 研究RACK1和VEGF蛋白在人非小細胞肺癌中的表達及意義。 方法 應用免疫組織化學EnVision法檢測127例非小細胞肺癌組織(包括癌旁組織45例及非小細胞肺癌組織82例)中RACK1和VEGF的表達情況。 結果 RACK1和VEGF在肺腺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織(P<0.05);RACK1在肺腺癌中的表達在不同淋巴結轉移情況及TNM分期間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在不同性別和不同腫瘤分化程度間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);VEGF表達在不同腫瘤分化程度、淋巴結轉移及TNM分期間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在不同性別間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。相關性分析結果表明,在肺腺癌中RACK1蛋白表達與VEGF蛋白表達呈正相關性(P<0.05)。 結論 RACK1和VEGF在非小細胞肺癌中高表達,尤其在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的作用,可能與RACK1和VEGF共同發(fā)揮作用促進細胞的增殖有關。

RACK1； VEGF； 非小細胞肺癌

肺癌具有患病率高、死亡率高的特點,其中非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占到所有肺癌類型的80%,治療方式仍然以手術輔助放化療為主。然而,多數(shù)患者的預后卻不盡如人意,不同組織學類型的患者預后不同[1]。所以,尋求有效的生物學標記來給每位患者建立個人治療計劃很有必要[2]。本實驗通過免疫組織化學法檢測RACK1和VEGF在非小細胞肺癌中的表達情況來探討RACK1、VEGF在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 組織標本

收集山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院2004-02～2016-08原發(fā)性非小細胞肺癌手術切除組織標本及活檢標本共82例(其中包括鱗癌32例,腺癌50例,標本離體后立即投入4%福爾馬林液中固定,另取遠離腫瘤部位組織45例同法固定),年齡在35-73歲。病理類型:鱗癌32例,腺癌50例。肺腺癌患者中男性32例,女性18例;臨床分期:Ⅰ-Ⅱ期15例,Ⅲ-Ⅳ期35例;分化程度:中-高分化35例,低分化15例;淋巴結轉移者25例。選取45例癌旁組織作為對照組,所有患者術前均無放化療史及治療史。

1.2 試劑

兔抗人RACK1單克隆抗體與兔抗人VEGF多克隆抗體均購自Santa Cruz Biotechnology。

1.3 免疫組織化學

所有石蠟標本,切片厚度4 μm。采用EnVision法檢測RACK1及VEGF的表達情況。加入兔抗人RACK1單克隆抗體(濃度1 ∶300),兔抗人VEGF(濃度1 ∶100)。4 ℃冰箱過夜,滴加50 μl的辣根過氧化物酶HRP標記的二抗,DAB顯色。

結果判定:RACK1和VEGF以胞質中出現(xiàn)黃棕色或黃褐色均勻顆粒狀物為陽性。高倍顯微鏡下隨機觀察5個視野,每個視野計數(shù)100個細胞計算百分比,陽性細胞1%-25%為1分,26%-50%為2分,51%-75%為3分,76%-100%為4分。陽性強度:無色為0分,淡黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分。二者相乘>3分為陽性,≤3分為陰性。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行處理,組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 RACK1在肺癌組織中的表達情況

RACK1在非小細胞肺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織(肺癌組織的陽性表達率為51%,癌旁組織為4%),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);RACK1在肺癌組織中的表達與病理分型有關,在肺腺癌中的陽性表達率高于肺鱗癌(見圖1),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),RACK1在肺腺癌中的表達在不同性別、分化程度間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),在不同淋巴結轉移情況及TNM分期間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表1,2)。

A.腺癌 B.鱗癌圖1 RACK1蛋白在非小細胞肺癌中的表達 (EnVision,×100)Figure 1 Expression of RACK1 in non-small cell lung cancer (EnVision,×100)

表1 RACK1及VEGF在組織中的表達情況

Table 1 The expression of RACK1 and VEGF in NSCLC tissues

組織類型nRACK1+-χ2PVEGF+-χ2P癌旁組織4524328．0760．00134225．2090．001肺癌組織82424031．4900．00142405．9600．015 鱗癌324281121 腺癌5038123119

2.2 VEGF在肺癌組織中的表達情況

VEGF在非小細胞肺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織(肺癌組織的陽性表達率為51%,癌旁組織為7%),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);VEGF在肺癌組織中的表達與病理分型有關,在肺腺癌中的陽性表達率高于肺鱗癌(見圖2),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),VEGF在肺腺癌中的表達在不同性別間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),在不同分化程度、淋巴結轉移情況及TNM分期間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05,見表1,2)。

2.3 RACK1與VEGF在肺腺癌中的相關性

由表3相關性分析顯示,RACK1與VEGF存在正相關性(r=4.358,P=0.037)。

A.腺癌 B.鱗癌圖2 VEGF蛋白在非小細胞肺癌中的表達 (EnVision,×100)Figure 2 Expression of VEGF in non-small cell lung cancer (EnVision,×100)

表2 RACK1及VEGF在腺癌組織中與臨床參數(shù)的關系

Table 2 Relationships between the expression of RACK1 and VEGF and clinicopathologic parameters in adenocarcinoma tissues

臨床病理特征nRACK1+-χ2PVEGF+-χ2P性別0．0150．9011．7190．19 男322572210 女1813599分化程度0．4230．5154 4020 036 中/高352872510 低1510569TNM分期4 3910 0364 4020 036 Ⅰ-Ⅱ期158769 Ⅲ-Ⅳ期353052510淋巴結轉移10 9650 00114 3460 001 有25241223 無251411916

表3 RACK1與VEGF在肺腺癌中的相關性

Table 3 The correlation between RACK1 and VEGF in lung adenocarcinoma

RACK1VEGF+-rP+20184 3580 037-111

3 討論

大多數(shù)非小細胞肺癌患者發(fā)現(xiàn)時多已晚期,傳統(tǒng)的治療方式治療效果不理想,預后較差。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療對于提高非小細胞肺癌患者的生存質量與預后相當重要。研究非小細胞肺癌的有效生物學指標對于早診斷、改善患者預后有重要意義[3-5]。

曹汐汐等[6]通過體內外實驗研究證實RACK1在乳腺癌中高表達,并促進癌細胞增殖,遷移運動,侵襲轉移,同時還收集160例人乳腺癌組織,通過免疫組織化學法研究RACK1與年齡、性別、臨床分期和組織學分級等臨床常用參數(shù)之間的關系,證實了RACK1是與乳腺癌患者預后有關的一個更優(yōu)越的獨立的分子指標。Li等[7]通過CCK8法檢測細胞增殖實驗、Western blot檢驗證實了RACK1在胰腺導管腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用,并且調控癌細胞的凋亡。Peng等[8]證實了RACK1與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展關系密切,且RACK1高表達并通過PI3K/Akt信號通路促進癌細胞的分化和轉移。還有研究表明RACK1是與非小細胞肺癌患者早期診斷有關的一個指標[9]。本研究通過免疫組化的方法研究RACK1 在肺腺癌患者中的表達情況以及與臨床病理參數(shù)之間的關系。結果表明RACK1在非小細胞肺癌中高表達,并且在肺腺癌中表達高于肺鱗癌,在肺腺癌中TNM分期Ⅲ-Ⅳ期中表達陽性率均較高,伴淋巴結轉移的患者RACK1陽性表達達到96%,并且TNM分期越高,有淋巴結轉移的患者RACK1陽性表達越高。隨訪結果顯示伴有淋巴結轉移的患者預后較差,因此，建議無淋巴結轉移的患者中RACK1陽性表達的14位患者定期復查,防止復發(fā)轉移。

有研究表明卵巢癌是一種死亡率最高的婦科系統(tǒng)癌癥,其中血管內皮生長因子(VEGF)能調節(jié)腫瘤的血管生成、生長、轉移和侵襲,VEGF介導的腫瘤血管再生已經(jīng)運用于多種腫瘤的靶向治療[10,14，15]。Sun等[11]通過PCR和免疫組織化學法證實VEGF在肺腺癌細胞A549中高表達。還有研究表明VEGF在胃癌組織中的表達高于癌旁組織,并且通過調控CRMP4促進了胃癌的發(fā)生與發(fā)展[12]。Goel等[13]認為VEGF是腫瘤干細胞的一種潛在的治療靶點,然而從前列腺腫瘤中分離的腫瘤干細胞對VEGF靶向治療有抵抗作用,結合P-Rex1抑制劑治療可以顯著提高化療的敏感性。本研究通過免疫組化的方法研究VEGF在非小細胞肺癌患者中的表達表明VEGF在非小細胞肺癌中高表達,并且在肺腺癌中表達高于肺鱗癌,在分化程度低的非小細胞肺癌組織中VEGF陽性率高于分化程度中高組中VEGF陽性率。在TNM分期Ⅲ-Ⅳ期中表達陽性率高,伴淋巴結轉移的患者VEGF陽性表達高于不伴淋巴結轉移的患者,并且TNM分期越高,伴有淋巴結轉移的患者VEGF陽性表達越高。

綜上,通過研究RACK1與VEGF蛋白在非小細胞肺癌中的表達及與肺腺癌的臨床病理聯(lián)系,發(fā)現(xiàn)RACK1與VEGF蛋白與肺腺癌的發(fā)展有關,并且可能在腫瘤的轉移與侵襲中發(fā)揮作用。

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Expression of RACK1 and VEGF in human non-small cell lung cancer and its clinical significance

MI Xiaofang1,JIANG Xia2,3,ZHENG Huixia1,LIANG Jianfang1,XIAO Hong1*
(1DepartmentofPathology,FirstClinicalMedicalCollege,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;2DepartmentofPathology,SchoolofBasicMedicine,ShanxiMedicalUniversity;3DepartmentofEndocrinology,YunchengCentralHospital；*Correspondingauthor，E-mail：xiaohonghong9999@163.com)

ObjectiveTo investigate the expression of RACK1 and VEGF in human non-small cell lung cancer and its clinical significance.MethodsExpression of RACK1 and VEGF was detected by immunohistochemistry EnVision assay in 127 specimens of lung tissues,including 45 cases of cancer adjacent tissues and 82 cases of non-small cell lung cancer tissues.ResultsThe positive expression rates of RACK1 and VEGF proteins in lung adenocarcinoma tissues were significantly higher than that in cancer adjacent tissues (P<0.05).The expression of RACK1 in lung adenocarcinoma was significantly different among different lymph node metastasis or TNM stage(P<0.05),but there was no significant difference between different sex or different tumor differentiation(P>0.05).The expression of VEGF was significantly associated with tumor differentiation,lymph node metastasis or TNM stages(P<0.05),but not with sex(P>0.05).The expression of RACK1 was positively correlated with VEGF expression in lung adenocarcinoma (P<0.05).ConclusionThe expression of RACK1 and VEGF proteins is significantly high in non-small cell lung cancer tissues,especially in lung adenocarcinoma.RACK1 and VEGF may promote cell proliferation in the progression of lung cancer.

RACK1； VEGF； non-small cell lung cancer

米小芳,女,1989-01生,學士

2016-12-22

R734.2

A

1007-6611(2017)05-0458-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.05.012