郭偉娜 紀(jì)霞，朱曉雨 王婧 朱月健 程磊

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800) (安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031)(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)(安徽普康中藥資源有限公司，安徽 亳州 236800)(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

紫菀地下不同部位重量與其藥用成分含量相關(guān)性研究

郭偉娜 紀(jì)霞，朱曉雨 王婧 朱月健 程磊

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800) (安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031)(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)(安徽普康中藥資源有限公司，安徽 亳州 236800)(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

采用稱重法分別稱量單株紫菀(Astertataricus)根、根莖和母根的重量，并采用高效液相色譜法分別測(cè)定單株藥用部位的紫菀酮、槲皮素和山萘酚的含量，探討紫菀地下不同部位重量與入藥部位的主要藥用成分含量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明：根、根莖、母根的重量變異系數(shù)分別為46.7%、53.29%、38.6%，藥用成分紫菀酮、槲皮素、山萘酚含量變異系數(shù)分別為27.53%、48.42%、38.57%，紫菀酮的含量與根和根莖的重量比顯著相關(guān)；山萘酚含量與根重顯著相關(guān)。由此顯示：根與根莖的重量比可作為衡量紫菀藥材品質(zhì)的重要依據(jù)。

紫菀(Astertataricus)；根；根莖；紫菀酮；山萘酚

紫菀(AstertataricusL.f.)為我國(guó)常用中藥材，來源于菊科紫菀的干燥根和根莖[1]，具有潤(rùn)肺化痰、止咳痰的功效。研究表明，紫菀止咳化痰的的主要成分為紫菀酮，此外，還含有山萘酚、槲皮素等抗氧化生物活性功能成分，在抑制溶血、脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)方面均有顯著作用[2]。現(xiàn)有研究顯示：紫菀各器官變異較大，其中根莖重變異系數(shù)高達(dá)70.5%，且根莖性狀與其他部位性狀存在顯著的相關(guān)關(guān)系[3,4]，但性狀變異是否影響藥材質(zhì)量未見報(bào)道。為此，本研究采用稱重法和高效液相色譜法系統(tǒng)分別測(cè)定紫菀地下不同部位重量和入藥部位的主要藥用成分含量，并采用SPSS軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，以為藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

試驗(yàn)材料于2015年3月中旬栽培于亳州中醫(yī)藥研究所藥用植物園內(nèi)，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為紫菀(AstertataricusL.f.)，采挖時(shí)間為2015年12月中旬。

所用主要設(shè)備包括高效液相色譜儀Agilent1260、SPD-10Avp檢測(cè)器、Class-VP工作站，DL-180超聲波破碎儀(浙江海天電子儀器廠)，MA200電子天平等。

試劑紫菀酮、槲皮素、山萘酚(購自中國(guó)食品藥品檢定研究院)，乙腈(天津科密歐產(chǎn)品)均為色譜純，水為純凈水。

1.2 方法1.2.1 根、根莖、母根的稱重

2015年12月采取亳州中醫(yī)藥研究所藥用植物園中紫菀藥材原植物10株，標(biāo)記為1～10號(hào)，除去泥土，清洗干凈，將根、根莖、母根分離，置于40℃烘箱中，烘干后稱取各部位重量。

1.2.2 主要藥用成分含量測(cè)定

采用高效液相色譜法進(jìn)行。

1)色譜條件 色譜柱ZORBAX SB-C18(5μm, 250mm×4.6mm)；流速：1.0mL/min；紫菀酮的檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL，流動(dòng)相選擇100%乙腈。槲皮素和山萘酚的檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10μL，流動(dòng)相選擇乙腈(A)和0.1%磷酸水(B)梯度洗脫，0～10min，25%～40%A；10～15min，40%～45%A；15～20min，45%～100%A；20～30min，100%A。

2)對(duì)照溶液配制 ①紫菀酮：精確稱取紫菀酮10mg，置于10mL容量瓶中，乙腈定容，再吸取1mL稀釋至濃度為0.1mg/mL的對(duì)照溶液。②槲皮素與山萘酚：精確稱取槲皮素和山萘酚各10mg，分別用甲醇定容于10mL量瓶，各自稀釋10倍，再吸取槲皮素1mL，山萘酚1.5mL，混合定容于50mL量瓶，配制成槲皮素濃度為0.002mg/mL、山萘酚濃度為0.003mg/mL的混合對(duì)照溶液。

3)樣品溶液配制 分別將1～10號(hào)樣品的藥用部位粉碎過3號(hào)篩。①紫菀酮樣品：精確稱取干燥后粉末各1g，加氯仿20mL，稱重，溫浸1h，超聲20min，冷卻，用氯仿補(bǔ)足重量。②槲皮素和山萘酚樣品：精確稱取干燥后粉末各1g，加80%甲醇20mL，搖勻，稱量，超聲提取20min，取出，放冷，用80%甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻。

4)線性關(guān)系考察 精確吸取紫菀酮對(duì)照溶液1、5、10、15、20、25μL，進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，求其直線回歸方程。精確吸取槲皮素和山萘酚混合對(duì)照溶液1、2、5、10、15、20μL，進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)槲皮素和山萘酚分別求其直線回歸方程。

5)精密度試驗(yàn) 取紫菀1號(hào)樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，每次20μL，測(cè)定峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD)。

6)重現(xiàn)性試驗(yàn) 取紫菀1號(hào)樣品5份，按照紫菀酮樣品溶液的配制方法制成供試溶液，每份進(jìn)樣20μL，測(cè)定峰面積RSD。

7)穩(wěn)定性試驗(yàn) 制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12、24h吸取供試品溶液20μL，進(jìn)樣分析并測(cè)定紫菀酮、槲皮素和山萘酚的峰面積RSD。

8)回收率試驗(yàn) 精確稱取紫菀2號(hào)樣品粉末5份各1.0g，加入1mg/mL的紫菀酮對(duì)照溶液2.5mL，另外稱取6號(hào)樣品粉末5份各1.0g，各加入1mg/mL的槲皮素對(duì)照溶液1.5mL和1mg/mL的山萘酚對(duì)照溶液1.5mL，按前述配制方法分別配制溶液，計(jì)算平均回收率。

1.3 相關(guān)性分析

采用SPSS V20統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)紫菀地下部位的生物量，包括根重、根莖重、母根重、入藥部位重量、根與根莖重量比以及入藥部位紫菀酮、槲皮素和山萘酚含量進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫菀入藥部位主要藥用成分測(cè)定的方法學(xué)考察

1)線性關(guān)系 分別以紫菀酮對(duì)照溶液、槲皮素和山萘酚混合對(duì)照溶液進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)紫菀酮得直線回歸方程為Y=114.72X+3.6977，R=0.9999，表明紫菀酮在0.1～2.5μg含量范圍線性關(guān)系良好；對(duì)槲皮素得直線回歸方程為Y=70.573X-6.1275，R=0.9999，表明槲皮素在0.002～0.040μg含量范圍線性關(guān)系良好；對(duì)山萘酚得直線回歸方程為Y=131.14X-11.107，R=0.9999，表明山萘酚在0.003～0.060μg含量范圍線性關(guān)系良好。

2)精密度 試驗(yàn)測(cè)得紫菀酮、槲皮素、山萘酚的峰面積RSD分別為0.17%、0.08%、0.07%。

3)重現(xiàn)性 試驗(yàn)測(cè)得紫菀酮的峰面積RSD為0.04%，表明重現(xiàn)性良好。

4)穩(wěn)定性 試驗(yàn)測(cè)得紫菀酮、槲皮素和山萘酚的峰面積RSD分別為0.21%、0.12%和0.08%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

5)回收率 試驗(yàn)測(cè)得紫菀酮回收率為101.7%(RSD0.68%)，槲皮素回收率98.10%(RSD0.44%)，山萘酚回收率99.32%(RSD0.96%)。

6)液相色譜圖 紫菀酮、槲皮素和山萘酚的液相色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 紫菀酮(I)成分的HPLC色譜圖

圖2 槲皮素(Ⅰ)和山萘酚(Ⅱ)成分的HPLC色譜圖

2.2 紫菀地下不同部位重量差異

10株紫菀根、根莖和母根的重量稱量結(jié)果見表1。由表1可知，紫菀地下各部位重量變異系數(shù)在38.61%～53.29%之間。根及根莖重量差異較大，根莖部變異系數(shù)達(dá)53.29%；根部變異系數(shù)為46.7%。各部位平均生物量比重相當(dāng)，約各占1/3。

2.3 主要藥用成分含量差異

以單株為單位，將紫菀的入藥部位根和根莖混合，采用高效液相色譜法測(cè)定其中紫菀酮、槲皮素和山萘酚的含量，測(cè)定結(jié)果如表2所示。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，藥用成分紫菀酮、槲皮素、山萘酚含量變異系數(shù)分別為27.53%、48.42%、38.57%。

表2 紫菀藥用部位3種化學(xué)成分含量 mg·g-1

2.4 相關(guān)性分析

利用SPSS V20軟件對(duì)紫菀地下部位的生物量，包括根重(X1)、根莖重(X2)、母根重(X3)、入藥部位根和根莖總重量(X4)、根與根莖重量比(X5)以及入藥部位紫菀酮含量(X6)、槲皮素含量(X7)，山萘酚含量(X8)共8個(gè)變量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見表3。

表3 紫菀地下不同部位重量與入藥部位的主要藥用成分含量相關(guān)性分析

注：**表示 在 0.01 水平(雙側(cè))上顯著相關(guān)，*表示在 0.05 水平(雙側(cè))上顯著相關(guān)。

結(jié)果顯示：紫菀入藥部位重量與根莖重在0.01 水平上顯著相關(guān)，與根重在0.05 水平上顯著相關(guān)；紫菀酮的含量與根和根莖的重量比在0.01水平上顯著相關(guān)，與母根重在0.05水平上顯著負(fù)相關(guān)；山萘酚的含量與根重在0.01水平上顯著相關(guān)，與母根重在0.05水平上呈顯著負(fù)相關(guān)，與紫菀酮和槲皮素的含量在0.05 水平上顯著相關(guān)。

3 討論

藥用植物的化學(xué)成分是其防病治病的物質(zhì)基礎(chǔ)[5]。紫菀所含的三萜類紫菀酮[1]、黃酮類槲皮素、山萘酚是迄今研究較多的活性成分[6,7]，其中紫菀酮為目前紫菀藥材質(zhì)量控制的特征性成分[1]。就單株紫菀入藥部位而言，3種成分的含量呈現(xiàn)較大變異，變異系數(shù)分別為48.42%、38.57%和27.53%。紫菀的地下器官由根、根莖和母根3部分組成，本研究顯示各部位比例相當(dāng)，但單株間各部位重量變異較大，變異系數(shù)分別為46.7%、53.29%和38.61%。相關(guān)性分析顯示：?jiǎn)沃觊g紫菀不同部位重量與藥用成分含量直接相關(guān)，其中入藥部位紫菀酮含量與根和根莖重量比呈顯著正相關(guān)，與母根重量呈負(fù)相關(guān)；山萘酚的含量與根重顯著正相關(guān)，因此根的比重可作為衡量紫菀藥材品質(zhì)的重要依據(jù)。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為紫菀“根長(zhǎng)，色紫紅，柔韌者為佳”[8]，說明根為衡量藥材品質(zhì)的決定因素，與本研究結(jié)果相一致。此外，筆者市場(chǎng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，紫菀藥材在加工過程中常把根下部剪掉，僅保留上部約5～6cm，而傳統(tǒng)加工方法將紫菀的根辮成辮狀，本研究結(jié)果顯示：根的比重與主要藥用成分含量均呈現(xiàn)正相關(guān)，因此建議在紫菀的加工過程中保留下部的細(xì)根。

研究結(jié)果中值得注意的是入藥部位重量與根莖重顯著相關(guān)，即：根莖為紫菀藥材產(chǎn)量的主要決定因素。而根莖重與紫菀酮和山萘酚的含量呈負(fù)相關(guān)，說明根中的主要藥用成分含量高于根莖，植物根和根莖的藥用成分含量往往不同，如虎杖根狀莖與根中的虎杖苷、 白藜蘆醇等5 種活性成分含量不同[9,10]，野生甘草和栽培甘草地下不同部分甘草酸含量也呈現(xiàn)較大差異[11]。目前紫菀栽培為無性繁殖，對(duì)繁殖材料缺乏提純復(fù)壯及良種優(yōu)選等管理措施，因此目前的栽培紫菀根短、數(shù)量少，根和根莖的重量比與主要藥用成分含量差異大，從而導(dǎo)致臨床使用療效不穩(wěn)定。紫菀單株間豐富的變異雖然影響了目前藥材的品質(zhì)，但也為優(yōu)選種質(zhì)提供了豐富的資源。因此，在紫菀栽培主產(chǎn)區(qū)收集種質(zhì)資源，利用數(shù)據(jù)分析軟件及現(xiàn)代化學(xué)儀器對(duì)外部特征和質(zhì)量之間進(jìn)行深入研究，對(duì)選育優(yōu)質(zhì)種源和確保臨床療效具有重要意義。

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[編輯] 余文斌

2017-02-20

安徽省高校自然科學(xué)重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2017A774)；安徽省高等學(xué)校省級(jí)質(zhì)量工程項(xiàng)目(2016sjjd055)；安徽省科技重大專項(xiàng)(16030801113)；安徽省亳州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(BK2015009)。

郭偉娜(1983-)，女，碩士，講師，主要從事藥用中藥化學(xué)研究，guoweina0201@163.com。

Q949.783.5；R914

A

1673-1409(2017)10-0038-05

[引著格式]郭偉娜,紀(jì)霞，朱曉雨,等.郭偉娜紫菀地下不同部位重量與其藥用成分含量相關(guān)性研究[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)，2017，14(10)：38～42.