車洪智 馬 飛 付玉榮 劉柯君 姜淑芳*

探討模式液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(TCT)技術(shù)和高危型HPV-DNA檢測與宮頸病變的相關(guān)性

車洪智①馬 飛②付玉榮①劉柯君①姜淑芳①*

目的：探討模式液基薄層細(xì)胞檢測(TCT)技術(shù)和高危型人乳頭瘤病毒(HPV)-DNA檢測與宮頸病變的相關(guān)性。方法：回顧性分析224例TCT異?；颊哔Y料，依據(jù)HPV-DNA檢測結(jié)果將其分為A組(182例)與B組(42例)。A組患者HPV(HC2)檢測陽性；B組患者HPV-DNA(HC2)檢測陰性，兩組以陰道鏡下取活檢病理結(jié)果為宮頸病變診斷的金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。結(jié)果：A組患者篩查出宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)、鱗癌及腺癌121例(占66.48%)；B組患者篩查出CIN、鱗癌及腺癌17例(占40.48%)，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.758，P＜0.05)。結(jié)論：采用TCT技術(shù)聯(lián)合HPVDNA(HC2)檢測方法能夠有效提高子宮頸病變的陽性檢查率；隨著宮頸病變級別的升高，HPVDNA的感染率也隨之升高，兩者聯(lián)合對于宮頸病變的預(yù)防和早期診治有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

液基薄層細(xì)胞檢測；高危型；人乳頭瘤病毒-DNA；宮頸病變

車洪智,女,(1983- ),本科學(xué)歷，主管檢驗(yàn)師。解放軍總醫(yī)院婦產(chǎn)科，從事婦科疾病的常規(guī)檢測工作。

宮頸癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中有很高的發(fā)病率，僅次于乳腺癌。近年來，隨著人們生活方式的改變，發(fā)病人群有逐年上升和年輕化的趨勢，而且發(fā)病率也在不斷的提高[1-2]。由于宮頸癌是一種可防可治的疾病，癌前病變是個(gè)時(shí)間相對較長的過程，因此宮頸病變可以通過早期篩查和早期干預(yù)來實(shí)現(xiàn)[3-4]。早期宮頸癌患者的5年治愈率可高達(dá)90%，因此早期進(jìn)行宮頸病變的篩查，對于宮頸病變的預(yù)防和治療有著重要的意義[5]。基于此，本研究探討模式液基薄層細(xì)胞檢測(thinprep cytologic test，TCT)技術(shù)與高危型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)檢測與宮頸病變的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2016年1-6月解放軍總醫(yī)院就診的224例TCT異?；颊哔Y料，年齡20～67歲，平均年齡(35.2±6.3)歲。依據(jù)HPV-DNA檢測結(jié)果將其分為A組(182例)與B組(42例)。A組患者HPV(HC2)檢測陽性；B組患者HPV-DNA(HC2)檢測陰性，兩組患者均有性生活史，并均行陰道鏡下宮頸組織活檢，且兩組比較無差異，具有可比性。

1.2 資料納入標(biāo)準(zhǔn)

所有患者TCT異常，A組患者HPV-DNA(HC2)結(jié)果為陽性，B組患者為陰性；所有患者均行陰道鏡下宮頸組織活檢。

1.3 儀器與材料

TCT采用Thinprep2000(美國HOLOGIC公司)制片機(jī)制片；ZoomScope光學(xué)陰道鏡(美國華萊士，WALLACH ZOOMSCOPE)；CX31顯微鏡(日本，OLYMPUS)；保存液為新柏氏PreservCyt Solution細(xì)胞保存液(北京豪洛捷有限公司)；HPV采用Hybrid Capture DML2000儀器進(jìn)行檢測，核酸檢測試劑盒(德國QIAGEN公司)。

1.4 檢測方法

(1)TCT診斷標(biāo)準(zhǔn)。按照貝塞斯達(dá)宮頸脫落細(xì)胞分類系統(tǒng)(the Bethesda system，TBS)分為：①未見上皮內(nèi)細(xì)胞病變或惡性腫瘤(negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM)；②無明確診斷意義的非典型鱗狀細(xì)胞(atypical squamous cells of undetermined signification，Asc-us)；③非典型腺細(xì)胞(atypical glandular cells，AGC)；④不能排除高級別鱗狀上皮內(nèi)病變的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(atypical squamous cells cannot exclude HSIL，Asc-H)；⑤低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)；⑥高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)；⑦鱗狀細(xì)胞癌；⑧腺癌。涂片質(zhì)量控制符合TBS-NCI標(biāo)準(zhǔn)，且患者在檢查前7 d禁止性生活及陰道用藥，處于非經(jīng)期。ASC-US及以上為TCT異常。

(2)HPV-DNA檢測。采用專用的HPV采集毛刷采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，用基因雜交捕獲二代技術(shù)(HC2)檢測13種HPV-DNA高危亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)，通過堿變性、基因雜交、捕獲、化學(xué)發(fā)光以及信號(hào)放大等技術(shù)在分子水平定性定量檢測病毒DNA，檢測值＞1 pg／ml即判斷為陽性，其原理如圖1所示。

圖1 HPV-DNA檢測原理示意圖

(3)宮頸活檢及病理檢測。采用窺器將宮頸全部暴露，進(jìn)行醋酸和碘試驗(yàn)，最后在碘不著色的可疑區(qū)域多點(diǎn)取材送病理，病理結(jié)果根據(jù)病變程度分為炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)、鱗癌及腺癌四型。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 典型TCT圖片

OLYMPUS顯微鏡鏡下閱片所示：HSIL圖片背景存在壞死物或癌性背景，細(xì)胞核異型性明顯，如細(xì)胞核梭形深染，呈茄樣變；鱗癌圖片背景伴炎性細(xì)胞、壞死物及細(xì)胞碎片等癌性背景明顯，細(xì)胞核增大，不規(guī)則染色質(zhì)增多，粗顆粒分布不均勻，出現(xiàn)塊狀碳核。兩種典型TCT結(jié)果如2圖所示。

圖2 HSIL和鱗癌典型圖例(×400)

2.2 兩組病理結(jié)果比較

A組182例患者進(jìn)行陰道鏡檢查，其病理結(jié)果顯示：炎癥61例，CIN、鱗癌及腺癌121例；B組42例患者進(jìn)行陰道鏡檢查，其病理結(jié)果顯示：炎癥25例，CIN、鱗癌及腺癌17例，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.758，P＜0.05)，見表1。

表1 兩組病理結(jié)果比較[例(%)]

2.3 HPV-DNA感染與宮頸病變的關(guān)系

三項(xiàng)不同病理結(jié)果HPV陽性感染率：宮頸炎癥患者86例，HPV-DNA陽性61例，陽性率為70.93%；宮頸CIN患者128例，HPV-DNA陽性111例，陽性率為86.72%；宮頸鱗癌及腺癌患者10例，HPV-DNA陽性9例，陽性率為90.00%。隨著宮頸病變級別的升高，HPV-DNA的陽性率也升高，見表2。

表2 HPV-DNA檢測不同宮頸病變陽性率

3 討論

近年來，宮頸病變的篩查方法層出不窮，到目前為止，TCT和HPV-DNA(HC2)檢測是兩項(xiàng)比較先進(jìn)成熟的篩查技術(shù)。超薄細(xì)胞學(xué)檢測采用特制的宮頸刷在宮頸管內(nèi)順時(shí)針轉(zhuǎn)5圈，采集宮頸鱗柱狀交界處脫落上皮細(xì)胞，將收集到標(biāo)本的毛刷放入盛有ThinPrep保存液的小瓶內(nèi)漂洗，收集細(xì)胞，使用ThinPrep 2000全自動(dòng)制片機(jī)制片。該項(xiàng)檢測技術(shù)改變了常規(guī)涂片的操作方法，避免了常規(guī)涂片過程中所引起的細(xì)胞過度干燥造成的假象，也克服了細(xì)胞聚集重疊和干擾成分的缺陷，其操作簡單，細(xì)胞分布均勻，圖像清晰，提高了標(biāo)本的滿意度及宮頸異常細(xì)胞的檢出率[6]。

流行病學(xué)和生物學(xué)資料已證明，HPV感染是宮頸病變的主要原因，有研究顯示，95%的宮頸癌標(biāo)本中均可發(fā)現(xiàn)HPV[7]。因此，在宮頸癌的篩查中HPV-DNA檢測是非常有意義的指標(biāo)，而HPV持續(xù)感染使患宮頸癌的相對危險(xiǎn)性增加250倍[8]。大多數(shù)HPV感染為一過性，多數(shù)在8～10個(gè)月可自行清除[9]。但是，HPV持續(xù)感染和宮頸病變密切相關(guān)，所以通過檢測HPV-DNA進(jìn)行宮頸病變篩查具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值[10-13]。

基因雜交捕獲方法檢測HPV-DNA重復(fù)性好，特異度高，且準(zhǔn)確，結(jié)果比較穩(wěn)定，在國內(nèi)外開展的越來越多。本研究中回顧性分析了224例患者，其中TCT異常、HPV-DNA(HC2)陰性，陰道鏡下組織活檢的宮頸病變的檢出率為40.48%，而TCT異常、HPV-DNA(HC2)陽性，陰道鏡下宮頸組織活檢的宮頸病變的檢出率為66.48%，提高了26%。有研究報(bào)道顯示，TCT異常和陰道鏡檢查，宮頸病變檢出率為39.13%，TCT異常、HPV-DNA陽性和陰道鏡檢查，宮頸病變檢出率為57.69%，明顯可以看出，通過HPV-DNA檢測聯(lián)合TCT技術(shù)篩查可以提高宮頸病變的檢出率，與本研究結(jié)論一致。

TCT聯(lián)合HPV-DNA檢查，對于女性宮頸病變的早期篩查，可以提高患者的早期診斷以及治療，減少漏診情況的發(fā)生[14]。此種方法不僅高效便捷，而且能夠有效提高宮頸病變的陽性檢出率，對于宮頸病變的早期預(yù)防和診治具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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A discussion of the correlation between membrane type TCT in combination with HPV-DNA(HC2) detection and cervical lesions/

CHE Hong-zhi, MA Fei, FU Yu-rong, et al//
China Medical Equipment,2017,14(3):76-79.

Objective: To discuss the correlation between membrane type thinprep cytologic test (TCT) in combination with high risk human papilloma virus (HPV) (HC2) and cervical lesions. Methods: The 224 patients with abnormal TCT were divided into two groups ( A group, 182 cases, HPV (HC2) positive; B group, 42 cases, HPV (HC2) negative ) based on the detection results of HPV-DNA, and their documents were retrospectively analyzed. The pathological diagnosis results were taken as the golden standard to compare the two groups. Results: In A group, 121 cases were diagnosed as CIN, squamous carcinoma and adeno carcinoma (the percent was 66.48%); in B group, 17 cases were diagnosed as CIN, squamous carcinoma and adeno carcinoma (the percent was 40.48%); and there was statistical difference between them (x2=9.758, P＜0.05). Conclusion: The method of TCT in combination with HPV (HC2) can effectively improve the positive detection rate of cervical lesions, and the results reveal the infection rate of HPV increases with the increase of the cervical lesion grade. The combination of them is important in clinical application of the prevention, early diagnosis and treatment for cervical disease.

Thinprep cytology test; High risk; Human papilloma virus-DNA; Cervical lesions

1672-8270(2017)03-0076-04

R446.63

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.03.021

2016-11-15

①解放軍總醫(yī)院婦產(chǎn)科 北京 100853

②滄州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科 河北 滄州 061001

*通訊作者：jsf0912@aliyun.com

[First-author’s address] Department of Gynaecology and Obstetrics, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China.