魏春燕　韋金菊　張保青　宋修鵬　李德偉　覃振強(qiáng)　李楊瑞

摘要：甘蔗白葉病（Sugarcane white leaf disease，SCWL）是一種由植原體寄居甘蔗韌皮部篩管引起并對(duì)甘蔗生產(chǎn)造成毀滅性破壞的檢疫性病害。文章綜述了SCWL的病癥、致病植原體、傳播途徑和發(fā)病規(guī)律等；闡述了幾種病原檢測(cè)方法的應(yīng)用前景，指出DNA生物傳感器將發(fā)展成最簡(jiǎn)便高效且能實(shí)現(xiàn)大田實(shí)時(shí)評(píng)價(jià)的診斷方法；重點(diǎn)介紹了SCWL幾種防控措施的應(yīng)用情況和防控效果，指出利用傳播蟲媒體內(nèi)共生微生物進(jìn)行基因改造的共生控制方法將成為未來(lái)阻斷SCWL病源傳播研究的新方向。提出加強(qiáng)蔗區(qū)間引種、調(diào)種時(shí)對(duì)SCWL的檢疫監(jiān)測(cè)工作，并應(yīng)根據(jù)各地氣候環(huán)境條件采取有效的綜合防控措施等建議，以避免SCWL植原體在蔗區(qū)間擴(kuò)散蔓延，確保蔗糖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)穩(wěn)定健康發(fā)展。

關(guān)鍵詞：甘蔗白葉?。辉\斷方法；防控措施

中圖分類號(hào)：S432.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2017）11-2016-07

0引言

甘蔗白葉?。⊿ugarcanewhiteleafdisease，SCWL）是一種由植原體（Phytoplasma）寄居甘蔗韌皮部篩管引起并對(duì)甘蔗生產(chǎn)造成毀滅性破壞的檢疫性病害。該病害于1954年首次在泰國(guó)北部南邦府被發(fā)現(xiàn)（Marcone，2002），1958年我國(guó)臺(tái)灣也報(bào)道了該病的發(fā)生（Ling，1962）。目前在印度、孟加拉國(guó)、斯里蘭卡、巴基斯坦、蘇丹、老撾、越南和中國(guó)等國(guó)家均有SCWL發(fā)生的報(bào)道（Theineta1.，2012；Lieta1.，2013；Wangeta1.，2015）。泰國(guó)甘蔗產(chǎn)業(yè)每年因白葉病引起的經(jīng)濟(jì)損失超過(guò)0.3億美元（Wongkaew，2012，2013），在我國(guó)臺(tái)灣、孟加拉國(guó)、緬甸和斯里蘭卡等國(guó)家和地區(qū)也有SCWL造成甘蔗產(chǎn)業(yè)巨大經(jīng)濟(jì)損失的報(bào)道（Leu，1983；KumarasingheandJones，2001；WinandJung，2012；Wongkaew，2012）。近年來(lái)，我國(guó)從泰國(guó)、菲律賓和緬甸等東南亞國(guó)家引進(jìn)的甘蔗品種/材料檢疫檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)有較高的SCWL檢出率，且在云南省多個(gè)縣的不同蔗區(qū)均檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SCWL（盧文潔等，2012；李文鳳等，2014）。SCWL在國(guó)外引進(jìn)甘蔗材料的高檢出率及我國(guó)云南蔗KSCWL的迅速擴(kuò)展蔓延，說(shuō)明SCWL對(duì)我國(guó)甘蔗產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展存在災(zāi)害威脅，應(yīng)對(duì)該病害的嚴(yán)格防控予以重視。本文根據(jù)國(guó)內(nèi)外的研究概況，就SCWL的病癥、傳播途徑和發(fā)病規(guī)律、病原檢測(cè)及防控措施等進(jìn)行綜述，以期為我國(guó)科學(xué)防控甘蔗檢疫性病害SCWL提供參考。

1病癥及其發(fā)生因素

SCWL的典型癥狀表現(xiàn)為甘蔗成束葉片變白且分蘗叢芽也為全葉白色。該病的病癥從種莖發(fā)芽開始到最后的成熟期均可根據(jù)不同癥狀表現(xiàn)進(jìn)行判斷。在不同生長(zhǎng)時(shí)期和生長(zhǎng)條件下甘蔗病株的癥狀會(huì)頻繁地發(fā)生變化，即葉片失綠程度不同導(dǎo)致葉片病癥表現(xiàn)淡綠色、淡黃色、黃白色和純白色等不同顏色。Wu等（1969）對(duì)葉片綠色成分的病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，白葉病病癥表現(xiàn)與葉片葉綠素的生物合成有關(guān)。SCWL植原體數(shù)量與葉綠素缺失的關(guān)系研究表明，甘蔗體內(nèi)植原體數(shù)量與白葉病病癥表現(xiàn)程度有關(guān)（Nakashimaeta1.，1994）。染病植株的葉片在表現(xiàn)出像花斑一樣的雜色后會(huì)因某種環(huán)境條件的影響而恢復(fù)綠色。染病嚴(yán)重的幼嫩植株會(huì)出現(xiàn)從根部產(chǎn)生大量分蘗的現(xiàn)象，且分蘗幼株中出現(xiàn)全株變白的植株數(shù)量也會(huì)逐漸增加，這些植株會(huì)因?yàn)閲?yán)重缺綠而在未成莖前便干枯死亡（Wongkaew，2012）。Leu（1983）關(guān)于不同季節(jié)溫度對(duì)白葉病影響的研究結(jié)果顯示，白葉病病癥在冬天不表現(xiàn)，但到了溫暖的春夏季節(jié)會(huì)迅速表現(xiàn)出嚴(yán)重的白葉癥狀。不同地區(qū)白葉病發(fā)病率的觀察及不同品種對(duì)白葉病抗性的初步研究結(jié)果表明，白葉病癥狀的不同表現(xiàn)程度主要與土壤肥力及甘蔗品種有關(guān)（Ouvanicheta1.，1990）。因此，SCWL的發(fā)病嚴(yán)重程度主要受甘蔗品種、種莖質(zhì)量、溫度、土壤類型、土壤肥力情況及植原體在甘蔗體內(nèi)的數(shù)量等綜合因素的影響。

2傳播途徑

SCWL系由植原體侵染引起，由于植原體定殖在甘蔗韌皮部篩管，因此病害很容易通過(guò)甘蔗種莖的無(wú)性繁殖方式進(jìn)行傳播蔓延。甘蔗生產(chǎn)上染病種莖的使用被認(rèn)為是白葉病疫情暴發(fā)的最主要原因，大部分蔗農(nóng)忽視對(duì)甘蔗種莖質(zhì)量的控制使得白葉病疫情迅速發(fā)展到無(wú)法控制的地步。染病的甘蔗種莖在種植后的分蘗初期便會(huì)表現(xiàn)出明顯的白葉癥狀。

白葉病的另一條主要傳播途徑是通過(guò)傳病載體葉蟬進(jìn)行傳播。目前，研究報(bào)道能傳播白葉病病原植原體的葉蟬有兩種：Matsumuratettixhiriglyphi-cusMatsumura和YamatotettixflavovitatusMatsumura（Hanboonsongeta1.，2006；RattanabuntaandHan-boonsong，2015）。此外，甘蔗植株和長(zhǎng)春花（Cathar-anthusroseusL.）的嫁接試驗(yàn)表明，SCWL植原體也可通過(guò)嫁接進(jìn)行傳播（WongkaewandFletcher，2004），而通過(guò)機(jī)械損傷和菟絲子（Cuscutaspp.）喂養(yǎng)的方法不能傳播該植原體（SarinduandClark，1993）。在我國(guó)臺(tái)灣和泰國(guó)，白葉病自然傳播很可能是通過(guò)最有效的傳播載體M.hiriglyphicus根據(jù)其取食嗜好性進(jìn)行傳播，傳播率達(dá)55%～100%，且其群體數(shù)量動(dòng)態(tài)變化與每個(gè)月的甘蔗白葉病發(fā)病率密切相關(guān)（Pisitkuleta1.，1989；Hanboonsongeta1.，2006；Wongkaew，2012）。研究表明，SCWL植原體可經(jīng)M.hiriglyphicus的卵巢傳遞，因此葉蟬被認(rèn)為是植原體的儲(chǔ)存庫(kù)（Hanboonsongeta1.，2002）。最新研究發(fā)現(xiàn)，白葉病傳播載體葉蟬的繁殖數(shù)量與環(huán)境溫度高度相關(guān)，當(dāng)環(huán)境溫度為20℃時(shí)，葉蟬的產(chǎn)卵周期需要12d，而環(huán)境溫度達(dá)25℃時(shí)，葉蟬產(chǎn)卵周期縮短一半，只需6d，且葉蟬數(shù)量會(huì)成倍增長(zhǎng)（RattanabuntaandHanboonsong，2015）。這也是泰國(guó)作為一個(gè)常年溫度變化不大的熱帶氣候國(guó)家其甘蔗白葉病長(zhǎng)期無(wú)法得到有效控制的一個(gè)主要原因。此外，盡管其他的葉蟬種類，如Balclutasp.、Bhatiaolivacea、Exi-tianusindicus、Hecalusprasinus和Reciliasp.也能通過(guò)巢式PCR結(jié)合16s-23SrDNA基因序列測(cè)序檢測(cè)到其體內(nèi)存在植原體。目前尚無(wú)研究報(bào)道它們具有傳播力。Y.flavovitatus已被證實(shí)能夠傳播SCWL植原體，只是傳播效率較低（Wongkaew，2012）。

3致病植原體

電鏡觀察定殖在甘蔗韌皮部篩管中的植原體超微結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)其具有典型的柔膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但缺乏細(xì)胞壁，僅由軟細(xì)胞膜包被。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)植原體在甘蔗篩管細(xì)胞中存在多種形狀，直徑為80-900mm。盡管至今為止植原體未能實(shí)現(xiàn)體外培養(yǎng)，但分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展提供了一個(gè)可分析鑒定與基因型有關(guān)的類似遺傳信息的機(jī)會(huì)。SCWL植原體隸屬于原核生物軟壁菌門柔膜菌綱，其16S-23SrDNA基因序列與泰國(guó)甘蔗草苗病及印度甘蔗草苗病植原體的基因序列相似度達(dá)96%-98%。不同地區(qū)和不同來(lái)源的SCWL植原體16S-23SrDNA的序列多樣性分析結(jié)果表明其相似度在89%-98%（Raoeta1.，2007，2008），這些基因序列的多樣性主要與栽培品種、種植環(huán)境及地理位置的差異有關(guān)。

4檢測(cè)技術(shù)

4.1基于顯微鏡觀察技術(shù)的檢測(cè)技術(shù)

顯微鏡觀察技術(shù)已應(yīng)用于檢測(cè)感病甘蔗的植原體，包括光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡和電鏡。光學(xué)顯微鏡下，用迪納氏染色法處理后可觀察到染病甘蔗篩管細(xì)胞中有深藍(lán)色細(xì)胞，健康甘蔗的篩管細(xì)胞中則觀察不到顏色（Deeleyeta1.，1979）。熒光顯微鏡結(jié)合DNA特異的熒光染料4，6-二氨基-2-苯茚二酮可快速精確地檢測(cè)到染病甘蔗組織切片中的植原體在篩管細(xì)胞中的定位情況，基于熒光顯微技術(shù)，染病甘蔗的篩管細(xì)胞中可觀察到比薄壁細(xì)胞核更亮的彌散熒光，健康甘蔗則觀察不到。電鏡下可觀察到植原體細(xì)胞出現(xiàn)在染病甘蔗的篩管細(xì)胞及其相鄰的細(xì)胞中，植原體的超微結(jié)構(gòu)特征及由植原體引起宿主細(xì)胞的變形情況均可在電鏡下觀察到（Nakashimaeta1.，1999；WongkaewandFletcher，2004）。根據(jù)電鏡觀察結(jié)果，發(fā)現(xiàn)植原體因缺乏細(xì)胞壁，其形狀多變化且不規(guī)則，其直徑為80-900mm。盡管上述顯微技術(shù)只能觀察植原體不易辨別的形態(tài)學(xué)特性，但對(duì)SC-WL的初步診斷及宿主細(xì)胞和寄主問(wèn)的細(xì)胞學(xué)觀察研究具有重要價(jià)值。

4.2基于血清學(xué)的檢測(cè)技術(shù)

在十多年前已有研究人員將傳統(tǒng)的多克隆抗體血清學(xué)方法用于檢測(cè)SCWL植原體，且抗體效價(jià)1：100才能滿足間接酶聯(lián)免疫檢測(cè)（SarinduandClark，1993）。該方法可有效區(qū)分在染病的禾本科植物（sCWL和甘蔗草苗病及禾本科雜草的白葉?。┖推渌静‰p子葉植物（豇豆變?nèi)~病和芝麻變?nèi)~?。┑闹苍w。但血清學(xué)方法具有易發(fā)生交叉反應(yīng)信號(hào)及靈敏度低的缺點(diǎn)，因此難以作為理想的診斷方法。最近，單克隆抗體也已經(jīng)開發(fā)應(yīng)用并極大地提高了SCWL植原體的檢測(cè)效率，泰國(guó)國(guó)家基因工程和生物技術(shù)中心合作項(xiàng)目開發(fā)了一種用于大田檢測(cè)SC-WL植原體的試劑盒（專利號(hào)No.9582），但該試劑盒制作過(guò)程復(fù)雜及成本高的特點(diǎn)，導(dǎo)致該技術(shù)目前尚未得到廣泛應(yīng)用。

4.3基ZJZDNA斑點(diǎn)雜交技術(shù)的檢測(cè)技術(shù)

在過(guò)去十幾年，基于互補(bǔ)DNA的斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法已應(yīng)用于SCwL診斷，該方法中使用的DNAN針包括SCWL植原體染色體和染色體外的隨機(jī)克隆片段及核糖體DNA互補(bǔ)序列（KlinkongandSeemfiller，1993；Nakashimaeta1.，1994）。在過(guò)氧化物酶標(biāo)記基因和地高辛比色基因試驗(yàn)中均表現(xiàn)為染色體外的DNA克隆片段發(fā)出的顏色信號(hào)最強(qiáng)，而顏色信號(hào)最弱的是16S-23SrDNA探針。所有探針均可根據(jù)顏色信號(hào)強(qiáng)度將甘蔗莖各部分中植原體的數(shù)量進(jìn)行排序。染色體外克隆的DNA探針還可檢測(cè)SCWL植原體、白葉病傳播載體葉蟬中的植原體和其他感染白葉病的禾本科植物（臂型草、百慕大草和毛茛草）中的植原體，以及感染黃萎病的水稻植株中的植原體。DNA斑點(diǎn)雜交技術(shù)還可成功檢測(cè)新砍甘蔗汁液中的植原體（Wongkaeweta1.，1998）。DNA斑點(diǎn)雜交技術(shù)應(yīng)用于SCWL檢測(cè)診斷已有十多年時(shí)間，由于該技術(shù)與隨后迅速發(fā)展的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)相比，存在有操作復(fù)雜且耗時(shí)的缺陷，因此DNA斑點(diǎn)雜交技術(shù)目前較少使用。

4.4基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的檢測(cè)技術(shù)

SCWL植原體的診斷技術(shù)中，PCR高敏感度和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)比DNA斑點(diǎn)雜交技術(shù)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。PCR操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少，目標(biāo)DNA的單拷貝序列可在1h內(nèi)擴(kuò)增100萬(wàn)倍。近年來(lái)，PCR已廣泛應(yīng)用于SCWL植原體檢測(cè)（Nakashimaeta1.，1999；Ku-marasingheandJones2001；Wangeta1.，2014；王曉燕等，2016）。SCWL植原體的檢測(cè)引物包括根據(jù)16SrDNA基因序列設(shè)計(jì)的植原體通用引物和根據(jù)16S-23SrDNA基因序列設(shè)計(jì)的特異引物。通用引物產(chǎn)生的DNA片段大小約1.4kb，且容易出現(xiàn)非特異條帶。特異引物組在感染白葉病的甘蔗樣品和禾本科植物樣品中檢測(cè)到的植原體基因片段大小約210或810bp，具體視不同的特異引物而定。SCWL的PCR檢測(cè)通常是用通用引物或特異引物結(jié)合目標(biāo)樣品經(jīng)一輪的PCR便得到檢測(cè)結(jié)果，而對(duì)植原體含量低的樣品或帶病昆蟲載體的DNA則用巢式PCR進(jìn)行檢測(cè)，即在第一輪PCR的結(jié)果片段中再設(shè)計(jì)引物，以第一輪PCR產(chǎn)物為模板進(jìn)行第二輪PCR才得到檢測(cè)結(jié)果。盡管PCR是一種非常有效的檢測(cè)技術(shù)，但由于該方法要求操作人員熟練掌握該項(xiàng)技術(shù)，且相對(duì)甘蔗生產(chǎn)的常規(guī)檢測(cè)而言，該技術(shù)的花費(fèi)較高，因此較適用于實(shí)驗(yàn)室對(duì)SCWL的診斷鑒定。

4.5DNA生物傳感器在SCWL檢測(cè)中的應(yīng)用

生物傳感器是一種把物理化學(xué)檢測(cè)器和生物成分一體化產(chǎn)生可測(cè)電信號(hào)的分析型系統(tǒng)，通常由3個(gè)組分構(gòu)成：生物敏感元件、轉(zhuǎn)化器或探測(cè)元件和信號(hào)處理器。該系統(tǒng)能夠利用生物分子去特異識(shí)別目標(biāo)物質(zhì)。生物敏感元件可根據(jù)生物材料（酶、抗體、核酸、細(xì)胞器和微生物等）進(jìn)行創(chuàng)造并在分析條件下特異識(shí)別目標(biāo)，產(chǎn)生與濃度相關(guān)的信號(hào)。生物傳感器已廣泛應(yīng)用于各種研究領(lǐng)域和商業(yè)監(jiān)測(cè)（食品、醫(yī)藥、代謝和致病性感染等）。在幾種生物傳感器中，具有簡(jiǎn)單、快速、低成本并能檢測(cè)渾濁樣品DNA且結(jié)合電化學(xué)方法的生物傳感器被認(rèn)為是對(duì)包括病害診斷在內(nèi)的幾種生物分析的最理想工具。目前，電化學(xué)DNA生物傳感器技術(shù)已應(yīng)用于SCWL植原體檢測(cè)。

研究人員使用由Namba等（1993）根據(jù)植原體16SrDNA設(shè)計(jì)的一對(duì)21bp已知序列作為互補(bǔ)DNA探針并用殼寡糖修飾的玻璃碳電極作為傳導(dǎo)平臺(tái)進(jìn)行雜交反應(yīng)，結(jié)果表明，從植原體16SrDNA探針與感染白葉病植株樣品單鏈DNA的雜交反應(yīng)中獲取的當(dāng)前信號(hào)和電容量明顯高于與健康甘蔗植株的單鏈DNA雜交反應(yīng)（WongkaewandPoosittisak，2008）。隨后，一種用SCWL植原體整個(gè)染色體單鏈DNA制作的無(wú)標(biāo)記DNA生物傳感器固定在殼聚糖修飾的玻璃碳電極已被發(fā)展為與亞甲藍(lán)嵌入劑相結(jié)合的白葉病DNA雜交的特定指示系統(tǒng)，SCWL植原體DNA可通過(guò)這些檢測(cè)0.1nm范圍的實(shí)驗(yàn)操作系統(tǒng)進(jìn)行定量測(cè)定。相應(yīng)的DNA雜交檢測(cè)還可通過(guò)原子顯微鏡實(shí)現(xiàn)可視化觀察（WongkaewandPoosittisak，2014）。這些結(jié)果說(shuō)明DNA生物傳感器可用于甘蔗白葉病植原體的檢測(cè)診斷，并有望在今后使用簡(jiǎn)便可靠和低成本的設(shè)備對(duì)大田甘蔗白葉病進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。

5SCWL的防控措施

根據(jù)已有的研究報(bào)道，SCWL的防控措施包括：用熱水和四環(huán)素處理的方法對(duì)甘蔗種莖中的植原體進(jìn)行移除；使用殺蟲劑控制主要傳播載體葉蟬的大量繁殖；使用甘蔗健康種苗；控制蔗地的環(huán)境衛(wèi)生并及時(shí)銷毀病株及其殘留物；進(jìn)行非禾本科作物輪作；嚴(yán)格進(jìn)行SCWL檢疫監(jiān)管及抗病品種培育。

5.1熱水和四環(huán)素處理

但有研究報(bào)道，甘蔗種莖用熱水處理已不能有效清除甘蔗種莖中的白葉病植原體。Liu等（1963）、單紅麗等（2013）研究結(jié)果表明，50℃熱水處理甘蔗種莖2-4h或53℃熱水處理1h均不能有效殺死種莖中的植原體，而52℃熱水處理8h或54℃熱水處理40min可達(dá)到一定的防治效果，但大部分甘蔗種莖經(jīng)過(guò)高溫處理后不能正常發(fā)芽。四環(huán)素處理對(duì)甘蔗種莖中植原體的移除效果比熱水處理好。Shigata等（1969）的研究結(jié)果表明，用四環(huán)素處理染病甘蔗種莖72h可有效減少白葉病植原體在甘蔗中的繁殖，且種莖發(fā)芽后3個(gè)月內(nèi)未發(fā)現(xiàn)白葉病癥狀。該研究結(jié)果也得到Mongkolsuk和Sutabutra（1976）的進(jìn)一步證實(shí)，他們的研究發(fā)現(xiàn)甘蔗種莖在200～500ppm（200-500mg/L）四環(huán)素溶液中處理24h后種植，對(duì)植原體的防治效果在2周內(nèi)可體現(xiàn)出來(lái)，甘蔗葉片在種植后第4周完全變綠且維持了8周。四環(huán)素處理對(duì)SCWL植原體的移除效果在甘蔗組培苗繁殖過(guò)程中也得到證實(shí)。經(jīng)過(guò)200-500ppm（200-500mg/L）四環(huán)素溶液處理的帶病甘蔗種莖發(fā)芽后用于組織培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)連續(xù)5-8次繼代培養(yǎng)或至少8個(gè)月的連續(xù)繼代培養(yǎng)得到的組培苗有70%-100%～十片呈現(xiàn)綠色（Wongkaewand Fletcher，2004）。

5.2殺蟲劑的使用

通過(guò)噴施殺蟲劑殺死SCWL的主要傳播載體葉蟬的方法來(lái)控制白葉病發(fā)生曾被認(rèn)為無(wú)效（Wongkaew，2012）。早在1974年，研究人員通過(guò)噴施有機(jī)磷殺蟲劑馬拉松來(lái)殺死葉蟬以降低白葉病的發(fā)生率，但效果不理想（Leu，1974）。在泰國(guó)，研究人員還通過(guò)使用殺蟲劑丁硫克百威噴施超過(guò)3.2ha的甘蔗種植區(qū)，在白葉病傳播載體達(dá)到數(shù)量高峰期（每年的7-8月）前的4-6月，每2周噴施一次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SCWL發(fā)生率及傳播載體葉蟬的數(shù)量均未得到有效控制（Wongkaew，1999）。然而，最新的研究發(fā)現(xiàn)殺蟲劑呋蟲胺可有效殺死SCWL主要傳播載體Mhi-roglyphicus，且此殺蟲劑對(duì)甘蔗鉆心蟲天敵赤眼蜂的殺傷力很?。↘oboriandHanboonsong，2017）。

5.3健康種苗的繁育

通過(guò)組織培養(yǎng)繁育無(wú)病甘蔗苗被認(rèn)為是控制SCWL植原體在植株上系統(tǒng)定殖的最有效方法。在我國(guó)臺(tái)灣，通過(guò)傳統(tǒng)選擇和組織培養(yǎng)技術(shù)的集約式生產(chǎn)方式可成功阻止白葉病的暴發(fā)已被證實(shí)（Leu，1978）。在泰國(guó)，同樣也通過(guò)莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)無(wú)病苗的方式大量繁育甘蔗健康種苗，1996-1999年大量推廣使用甘蔗無(wú)病組培苗及其產(chǎn)生的種莖來(lái)控制SCWL的發(fā)生傳播，并獲得很好的成效（WongkaewandFletcher，2004），當(dāng)?shù)卣徂r(nóng)也被極力勸說(shuō)使用無(wú)病組培苗種莖。

5.4控制蔗地的環(huán)境衛(wèi)生和進(jìn)行作物輪作

控制蔗地環(huán)境衛(wèi)生主要是為了防止SCWL植原體的再次感染，蔗農(nóng)應(yīng)從地里挖除全部染病植株并把殘留物全部清除。在我國(guó)臺(tái)灣水分充足的地方，蔗農(nóng)會(huì)用更有效的方法取代作物輪作。據(jù)調(diào)查，我國(guó)臺(tái)灣春季SCWL的發(fā)病率較低，因此蔗農(nóng)被建議把種植時(shí)間從往常的秋季改為春季，由于白葉病主要傳播載體M.hiriglyphicus的數(shù)量及白葉病植原體的繁殖均在低溫的冬季受到限制，因此在春季種植的甘蔗其白葉病植原體感染率下降（PanandYang，1970）；在我國(guó)臺(tái)灣缺水的地區(qū)，甘蔗種植被強(qiáng)烈推薦使用綠肥。以上這些措施并結(jié)合無(wú)病甘蔗組培苗種莖的使用，使SCWL的發(fā)生得到有效控制（LeuandKusalwong，2000）。然而，在泰國(guó)這個(gè)常年溫度變化不大的熱帶國(guó)家，采用變換甘蔗種植季節(jié)的措施對(duì)SCWL的控制作用不明顯，最適當(dāng)?shù)姆乐未胧┦潜ＷC蔗地環(huán)境衛(wèi)生并結(jié)合無(wú)病健康種苗的使用及與綠肥經(jīng)濟(jì)作物輪作。1989-1991年，在泰國(guó)東北部，用木豆和刀豆輪作的同時(shí)使用新的甘蔗品種代替抗病性較弱的舊品種成功地控制了SCWL的發(fā)生；但1996-1999年由于蔗農(nóng)逐漸忽視了這種合適的栽培方式，SCWL在該地區(qū)又重新暴發(fā)且發(fā)病率更高（Wongkaew，1999）。盡管通過(guò)上述栽培方式在研究項(xiàng)目進(jìn)行期間可有效減少SCWL造成的經(jīng)濟(jì)損失，但不久后由于蔗農(nóng)忽視這種栽培方式的重要性導(dǎo)致SCWL重新發(fā)生，至今SCWL仍是導(dǎo)致泰國(guó)甘蔗產(chǎn)業(yè)損失的最主要原因。

5.5加強(qiáng)檢疫監(jiān)測(cè)

甘蔗被檢疫機(jī)構(gòu)歸為禁止入境材料時(shí)，引入地的政府檢疫部門需對(duì)SCWL進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)察，防止外來(lái)引進(jìn)蔗種引起當(dāng)?shù)豐CWL的發(fā)生和傳播。這種檢疫監(jiān)測(cè)措施在我國(guó)臺(tái)灣的實(shí)行已成功控制SCWL發(fā)生（Leu，1983）。在泰國(guó)，由于對(duì)甘蔗種莖進(jìn)行常規(guī)檢疫監(jiān)測(cè)的措施未得到廣泛實(shí)行，SCWL發(fā)病率及其帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失仍得不到有效控制。

5.6抗病品種培育

盡管抗病品種的使用是控制病害發(fā)生最理想的措施，但至今尚未發(fā)現(xiàn)抗SCWL品種。Leu（1974）通過(guò)利用蟲傳方法對(duì)至少400個(gè)甘蔗品種包括野生甘蔗品種SaccharumspontaneumL_進(jìn)行檢測(cè)篩選，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)有抗病品種。2004～2007年，泰國(guó)研究人員對(duì)所有甘蔗品種包括它們的雜交后代及野生甘蔗品種又一次進(jìn)行接種試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果仍未發(fā)現(xiàn)有抗或耐SCWL品種（Sa-Ngaunrangsirikuleta1.，2007）。隨后在各甘蔗研究機(jī)構(gòu)（公司及大學(xué)）均有研究人員進(jìn)行各種抗病品種評(píng)價(jià)試驗(yàn)，但目前尚未報(bào)道發(fā)現(xiàn)有抗白葉病的甘蔗品種。

6展望

SCWL是極易通過(guò)帶病種莖進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播的一種危害性極強(qiáng)的檢疫性病害，其致病植原體主要通過(guò)昆蟲媒介葉蟬進(jìn)行傳播。SCWL的致病植原體目前尚未能進(jìn)行體外培養(yǎng)，因此研究人員主要致力于SCWL檢測(cè)技術(shù)和防控措施的研究。SCWL的早期診斷對(duì)于及早發(fā)現(xiàn)病源并使該病害得到及時(shí)有效控制起著關(guān)鍵性作用。在本研究中提到的幾種SC-WL診斷技術(shù)中，顯微鏡技術(shù)、血清學(xué)技術(shù)及DNA斑點(diǎn)雜交技術(shù)已很少使用，目前使用最廣泛且成熟的檢測(cè)技術(shù)是PCR。雖然PCR對(duì)于實(shí)驗(yàn)室科研人員來(lái)說(shuō)是最普遍常用的一種甘蔗病害檢測(cè)技術(shù)，但對(duì)于甘蔗生產(chǎn)的常規(guī)檢測(cè)，該技術(shù)花費(fèi)較高且要求技術(shù)人員要熟練掌握該技術(shù)的操作。目前SCWL的PCR檢測(cè)大多使用巢式PCR，即需要經(jīng)過(guò)兩輪PCR才能得到最終檢測(cè)結(jié)果（Wanget a1.，2014；王曉燕等，2016）。此外，PCR檢測(cè)容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果，巢式PCR由于需要用第一輪PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行第二輪PCR，因此其假陽(yáng)性檢出率將會(huì)高于常規(guī)PCR檢測(cè)（Borstet a1.，2004）。近年來(lái)，結(jié)合電化學(xué)方法的分子傳感裝置（DNA生物傳感器）的使用成為一種具有高特異性、靈敏度高、快速且成本低的新檢測(cè)技術(shù)（Weiet a1.，2010；Yinet a1.，2012）。研究人員利用電化學(xué)伏安法技術(shù)結(jié)合SCWL-ssDNA探針首次對(duì)甘蔗商業(yè)種植地樣品進(jìn)行了SCWL實(shí)時(shí)診斷（WongkaewandPoosittisak，2014），結(jié)果表明DNA生物傳感器將有望成為一種SCWL實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)診斷非常方便的工具。研究人員可對(duì)該診斷技術(shù)的可行性、檢測(cè)靈敏度的提高和便攜式設(shè)備的生產(chǎn)等進(jìn)行更深入研究，以實(shí)現(xiàn)田問(wèn)SCWL快速有效診斷。

盡管目前已有多種防控SCWL的方法，如利用熱水和抗生素處理種莖和燒毀染病的植株材料及使用健康種苗等，但均未取得理想的防控效果（KaewmaneeandHanboonsong，2011）。若SCWL的主要傳播媒介葉蟬不能被消除，即使在種植完全無(wú)病甘蔗種莖的地塊也很快會(huì)重新感染SCWL。目前已有研究人員找到了比較適合用于控制傳播媒介葉蟬繁殖的殺蟲劑呋蟲胺（KobofiandHanboon-song，2017），但在甘蔗地大范圍噴施殺蟲劑并不現(xiàn)實(shí)，且長(zhǎng)期使用化學(xué)殺蟲劑容易產(chǎn)生殺蟲劑抗性及影響環(huán)境可持續(xù)發(fā)展等問(wèn)題。利用生物防控技術(shù)的一種共生控制新方法將有望防治SCWL傳播媒介葉蟬，且已有研究人員對(duì)該方法用于SCWL的防控進(jìn)行了初步研究（Wangkeereeet a1.，2012）。共生控制是以傳播蟲媒體內(nèi)的共生微生物作為遺傳改造對(duì)象，在宿主體內(nèi)表達(dá)抗病效應(yīng)分子來(lái)抑制病原體發(fā)育以達(dá)到阻斷病源傳播的目的，該方法在控制蟲媒傳播病害方面具有廣闊的應(yīng)用前景?？偠灾壳吧形窗l(fā)現(xiàn)有任何一種方法可以很好地防控SCWL，因此，蔗區(qū)間引種、調(diào)種應(yīng)加強(qiáng)對(duì)SCWL的檢疫監(jiān)測(cè)，同時(shí)根據(jù)當(dāng)?shù)貧夂颦h(huán)境條件采取有效的綜合防控措施，避免SCWL植原體在蔗區(qū)間擴(kuò)散蔓延，確保蔗糖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)穩(wěn)定健康發(fā)展。

（責(zé)任編輯麻小燕）