薛雪 汪金燕 楊得坡

摘要[目的]研究五谷蟲(chóng)油脂抗菌活性。[方法]用8種不同類(lèi)型配比的飼料養(yǎng)殖得到不同五谷蟲(chóng)并烘干得到其干體，然后用索氏提取法分別提取得到不同種類(lèi)五谷蟲(chóng)油脂，并用紙片擴(kuò)散法對(duì)這8種油進(jìn)行抗菌活性研究。[結(jié)果]用餐廚熟食飼養(yǎng)蠅蛆不僅成本低，且最終得到的油脂具有較好的抗菌作用，其對(duì)大腸桿菌有抑菌效果；而其余的油對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌及金黃色葡萄球菌均無(wú)明顯抑菌效果。[結(jié)論]用餐廚熟食飼養(yǎng)的五谷蟲(chóng)提取得到的油脂對(duì)大腸桿菌具有抑菌效果，從而為五谷蟲(chóng)的研究利用展示了新的方向。

關(guān)鍵詞五谷蟲(chóng)；大頭金蠅；養(yǎng)殖；抗菌活性

中圖分類(lèi)號(hào)R282.74文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）35-0119-03

Abstract[Objective] The research aimed to study the antibacterial activity of traditional Chinese medicine Wuguchong grease.[Method]Different kinds of Wuguchong were obtained and dried by 8 different kinds of different kinds of feed，different kinds of grease were extracted by soxhlet extraction， and the antibacterial activity of the eight kinds of grease was studied by disk diffusion method.[Result]The feeding of the cooked food was not only low cost， but also the final grease had good antibacterial effect， it had bacteriostatic effect on Escherichia coli， and the other grease had no obvious antibacterial effect to Escherichia coli， Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus.[Conclusion]The grease which extracted from Wuguchong fed with kitchen waste had inhibitory effect on Escherichia coli.Thus， the research and utilization of Wuguchong showed a new direction.

Key wordsWuguchong；Chrysomya megacephala；Cultivation；Antibacterial activity

在中藥行業(yè)，藥用昆蟲(chóng)范疇內(nèi)，昆蟲(chóng)雙翅目大頭金蠅（Chrysomya megacephala，又名大頭麗蠅、東方廁蠅）及其近緣昆蟲(chóng)（如家蠅Musca domestica）的干燥幼蟲(chóng)（蠅蛆）是一味傳統(tǒng)中藥，名曰“五谷蟲(chóng)”，又名水仙子、羅仙子，俗名“蛆”[1]。大頭金蠅屬全變態(tài)昆蟲(chóng)，包括卵、幼蟲(chóng)、蛹和成蟲(chóng)4個(gè)發(fā)育階段[2]，各個(gè)時(shí)期的形態(tài)各不相同[3]?！侗静菥V目》和《本草求源》表明，其具有清熱解毒、消積滯的功能，干燥后研磨，可供搽敷外用，能治療臁瘡、唇疔病癥[4]。蠅蛆的養(yǎng)殖成本低，飼養(yǎng)操作方便，飼養(yǎng)場(chǎng)地要求相對(duì)較低，當(dāng)溫度及相對(duì)濕度在適宜的條件下，其幼蟲(chóng)的繁殖可以持續(xù)1年[5]，它的生存適應(yīng)能力強(qiáng)，不受季節(jié)影響，從而被國(guó)際上列為新型蛋白質(zhì)源昆蟲(chóng)之首[6]。大頭金蠅因其巨大的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值和商用價(jià)值，在國(guó)內(nèi)外都具有廣闊的市場(chǎng)[7]。

早在20世紀(jì)90年代，西方曾有學(xué)者報(bào)道過(guò)五谷蟲(chóng)具有防止創(chuàng)口傷面感染和清創(chuàng)的作用[8]，運(yùn)用五谷蟲(chóng)活體對(duì)感染的創(chuàng)口傷面進(jìn)行治療，也起到了很好的效果[9]。趙澤旭[10]研究五谷蟲(chóng)干粉對(duì)大鼠創(chuàng)面愈合及血管生成的影響表明，五谷蟲(chóng)干粉可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合，提高皮膚創(chuàng)面愈合率及質(zhì)量。牛長(zhǎng)纓等[11]用氣相色譜法對(duì)不同蟲(chóng)態(tài)的家蠅（包括蛹、幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)）中的脂肪酸成分和含量進(jìn)行了分析，共鑒定出10種脂肪酸。五谷蟲(chóng)油脂具有抗炎及燙傷治療作用[12]，防止疤痕的形成等功效[13]。有研究表明，五谷蟲(chóng)體內(nèi)提取出的抗菌肽具有較好的抗菌效果，五谷蟲(chóng)油中所含成分對(duì)皮膚炎癥及微生物感染也都有一定療效[14]。筆者采用索氏提取法提取了不同飼料養(yǎng)殖的蠅蛆的油脂，對(duì)其進(jìn)行性狀評(píng)價(jià)和油脂提取率測(cè)定，并主要研究了五谷蟲(chóng)油脂的抗菌作用，以期為五谷蟲(chóng)的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1

試材。大頭金蠅蠅種（廣東中山火炬開(kāi)發(fā)區(qū)收集）；奶粉、紅糖、蛋清及各飼料（市售）；枯草桿菌ATCC9372（廣東省微生物檢測(cè)中心）；金黃色葡萄球菌ATCC25923（廣東省微生物檢測(cè)中心）；大腸桿菌ATCC8739（廣東省微生物檢測(cè)中心）。

1.1.2

試劑。正己烷（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠(chǎng)）；氯化鈉（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；蛋白胨（北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；牛肉浸膏（廣州環(huán)凱微生物科技有限公司）；營(yíng)養(yǎng)瓊脂（廣州環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.1.3

儀器。集熱式恒溫加熱磁力攪拌器DF-101S（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；循環(huán)水式多用真空泵SH2-DCII（上海愛(ài)朗儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀N91100（上海愛(ài)朗儀器有限公司）；水浴鍋 SB-1100（上海愛(ài)朗儀器有限公司）；冷卻水循環(huán)裝置 CA-1111（上海愛(ài)朗儀器有限公司）；電子分析天平BL-2200H（瑞士Mettler Toledo公司）；MlX-805恒溫培養(yǎng)箱（上海比朗儀器有限公司）；LDZM-60KCS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠(chǎng)）；HZS-HA水浴振蕩器（中國(guó)哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.2方法

1.2.1

種蠅的培養(yǎng)及蠅卵的收集。將種蠅培養(yǎng)在紗籠中，養(yǎng)殖密度為2.8 cm3/只。每天給予紅糖∶奶粉∶蛋清（2∶2∶1）作為食物，自來(lái)水為飲用水。養(yǎng)殖溫度保持在25 ℃，自然光照12∶12（L∶D）培養(yǎng)。用布袋包裹引誘劑作為集卵器，收集蠅卵，稱(chēng)重，接種到不同配比培養(yǎng)基。

1.2.2

組合培養(yǎng)基的制備。原料組成以及用料百分含量見(jiàn)表1飼料配比，組合培養(yǎng)基的制備其原料組成以及用料百分含量分別為麥麩40%～80%、玉米粉2%～20%、豆粕粉2%～20%、全株青玉米2%～20%。將飼料按比例混合均勻，加水?dāng)嚢瑁瑵穸瓤刂圃?5%，pH控制在6。

1.2.3

蠅蛆的接種與培養(yǎng)。每1 000 g“1.2.2”組合培養(yǎng)基中接種0.5 g蠅卵，將蠅卵在25 ℃下培養(yǎng)，待蠅卵孵化后應(yīng)適當(dāng)攪拌培養(yǎng)基使蠅蛆分布均勻，并給予充分的空氣（每6 h通風(fēng)1次）。蠅蛆培養(yǎng)5 d后，將培養(yǎng)基與蠅蛆一同放入烘箱中60 ℃干燥，得到干燥蠅蛆。

1.2.4主要營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定。新鮮幼蟲(chóng)放入沸水即時(shí)死亡，在60 ℃烤箱干24 h后評(píng)估含水量；凱氏定氮法測(cè)定蛋白含量；在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50 ℃真空條件下，正己烷索氏提取，提取油脂8 h；酸堿消化法測(cè)量纖維和總灰分的含量。

1.2.5

五谷蟲(chóng)油脂提取。將所有批次五谷蟲(chóng)干體分別用粉碎機(jī)粉碎，精確稱(chēng)取3.0 g粉末，用濾紙包好烘干，放入索氏提取器中，以100 mL正己烷作為溶劑回流提取3 h，提取液減壓旋蒸后得到五谷蟲(chóng)油脂，稱(chēng)重（g），計(jì)算提取率：

提取率=五谷蟲(chóng)油質(zhì)量五谷粉末質(zhì)量×100%

1.2.6

抗菌活性研究。液體培養(yǎng)基配制：分別稱(chēng)取蛋白胨1.0 g、牛肉浸膏0.3 g、NaCl 0.5 g，加入100 mL蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0后置于高壓蒸汽滅菌，鍋中溫度為121 ℃高壓滅菌0.5 h。固體培養(yǎng)基：稱(chēng)取瓊脂3.32 g，加入100 mL蒸餾水溶解后置于溫度為121 ℃的滅菌鍋中高壓滅菌0.5 h[15]。

在超凈工作臺(tái)上，分別吸取金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌菌種30 μL于液體培養(yǎng)基錐形瓶，放至振蕩培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，吸取菌液100 μL涂布于固體培養(yǎng)基上，用無(wú)菌鑷子將滅菌后的濾紙片放入五谷蟲(chóng)油中浸泡后取出，將含樣品的紙片貼于平板上，輕輕按壓，使藥片與培養(yǎng)基密切接觸。完成后將培養(yǎng)皿放在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h。觀(guān)察含藥紙片周?chē)袩o(wú)抑菌圈[16]。

2結(jié)果與分析

2.1五谷蟲(chóng)油脂營(yíng)養(yǎng)成分分析

各批次蛆蟲(chóng)所含營(yíng)養(yǎng)成分沒(méi)有顯著性差異，在此選取其中一個(gè)批次蛆蟲(chóng)研究主要營(yíng)養(yǎng)成分，具體結(jié)果如表2所示。由表2可知，在蠅蛆營(yíng)養(yǎng)成分中，水分占71.40%，是所占比重最大部分，而其中纖維與總灰分的比重最小，該研究后續(xù)試驗(yàn)中所用到的油脂僅占420%。

2.2五谷蟲(chóng)油脂基本性狀分析

根據(jù)“1.2.5”方法提取得到所有批次五谷蟲(chóng)油脂的基本性狀及提取率如表3所示。從表1和表3可以看出，用飼料中含有餐廚熟食最終得到的油脂顏色較深，為紅棕色，而其余為金黃色，且2015年9月25日的批次即用麥麩100 g+餐廚熟食1 kg飼養(yǎng)出來(lái)的五谷蟲(chóng)油脂提取率最高，這可能與飼料配比中含有較多餐廚熟食有關(guān)，餐廚熟食所含油脂較多導(dǎo)致蠅蛆養(yǎng)殖過(guò)程中蟲(chóng)體對(duì)其吸收較高所致。

2.3抗菌活性

采用紙片擴(kuò)散法考察8種不同批次五谷蟲(chóng)油對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌3種常見(jiàn)致病菌的抑制作用，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這8種批次的五谷蟲(chóng)油脂浸漬的圓紙片在金黃色葡萄球菌、枯草桿菌菌種培養(yǎng)基沒(méi)有形成明顯抑菌圈；而1、2、3號(hào)批次的油脂在大腸桿菌菌種培養(yǎng)基形成了較明顯抑菌圈。表明這8種五谷蟲(chóng)油脂對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌無(wú)明顯抑制作用，而飼料配比為麥麩∶餐廚熟食（1∶10）、麥麩∶餐廚熟食（3∶7）及小米糠∶餐廚熟食（3∶7）飼養(yǎng)的五谷蟲(chóng)提取出來(lái)的油脂對(duì)大腸桿菌有抑制效果，根據(jù)此推測(cè)這種效果可能與飼料中加入了餐廚熟食有關(guān)，同時(shí)也可能與飼料中成分轉(zhuǎn)化有關(guān)。

目前研究從五谷蟲(chóng)體內(nèi)提取出多種抗菌肽成分，試驗(yàn)證明其具有較好的抗菌殺菌效果。同時(shí)有研究表明，家蠅蠅蛆油對(duì)常見(jiàn)致病菌具有抑制活性，而且對(duì)動(dòng)物燙傷有顯著療效，對(duì)動(dòng)物皮膚也無(wú)刺激性和過(guò)敏性[14]。從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以推斷，不同飼料配比所得油脂抑菌活性不同，可能由于某一比例配比時(shí)利于蠅蛆體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化所導(dǎo)致。

3結(jié)論

該研究用8種不同類(lèi)型配比的飼料養(yǎng)殖得到不同五谷蟲(chóng)并烘干得到其干體，然后用索氏提取法分別提取得到不同種類(lèi)五谷蟲(chóng)油脂，其中飼料含有餐廚熟食得到的五谷蟲(chóng)干體及其提取出的油的顏色較其他批次飼料的深。用紙片擴(kuò)散法對(duì)這8種油進(jìn)行抗菌活性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用餐廚熟食飼養(yǎng)蠅蛆不僅成本低，且最終得到的油脂具有較好的抗菌作用，其對(duì)大腸桿菌有抑菌效果，而其余的油對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌及金黃色葡萄球菌均無(wú)明顯抑菌效果。

該研究采用新鮮蛆蟲(chóng)作為原料，從源頭養(yǎng)殖到成分提取，再到后期的抗菌活性測(cè)試，一方面保證了原料的品質(zhì)，另一方面實(shí)現(xiàn)了餐廚垃圾的廢物利用，使得蠅蛆養(yǎng)殖利用更加合理規(guī)范，蠅蛆作為新的藥用能源具有很高的可行性與適用性，為昆蟲(chóng)資源的開(kāi)發(fā)利用展示了新的方向。

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