夏文焱，蘇翠紅，吳英杰

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154007）

EMT的發(fā)病機(jī)制未明，故本研究用免疫組化的實(shí)驗(yàn)方法研究MMP-2 和E-CAD在 EMT中的表達(dá)，為探索EMT提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年9月～2017年5月佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)術(shù)后病理診斷為EMT 的患者32例作為研究組。取其異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜，EMT異位內(nèi)膜統(tǒng)一選取為卵巢巧克力囊腫壁，EMT在位內(nèi)膜為同時(shí)切除子宮所得的內(nèi)膜或術(shù)前診斷性刮宮取得的內(nèi)膜。同期選擇因子宮肌瘤行開腹手術(shù)的正常子宮內(nèi)膜20例。所有病例均排除子宮腺肌病，所有患者無長(zhǎng)期用藥史，術(shù)前6個(gè)月未經(jīng)任何內(nèi)分泌藥物治療以及無妊娠及哺乳史，無盆腔炎癥，無惡性腫瘤史，無其他內(nèi)外科疾病。所有患者年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有診斷均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備 將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本10%甲醛固定經(jīng)過處理后包埋制成石蠟切片數(shù)張。

1.2.2 免疫檢測(cè) 采用SP法檢測(cè)。MMP-2、E-CAD均為單克隆抗體。SP試劑盒由北京中杉金橋試劑公司提供。操作嚴(yán)格按照說明進(jìn)行，以 PBS 代替一抗為陰性對(duì)照。

1.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn)：MMP-2、E-CAD主要表達(dá)于腺體細(xì)胞胞漿中，相應(yīng)部位出現(xiàn)黃色顆粒就是陽性表達(dá)。顯色情況評(píng)分:無色 (0 分 )，淡黃 (1 分 )，棕黃 (2分)，褐黃 (3分)。按陽性細(xì)胞率評(píng)分:陽性細(xì)胞數(shù) ≤25%為 1分，25%～50%為 2分，51% ～ 75%為 3分，＞75%為 4分。二者得分相乘得到的分?jǐn)?shù)平均值作為該病例的最終評(píng)分。染色結(jié)果分為四級(jí)：0分為陰性（-）；1-4為弱陽性（+）；5-8分為陽性（++）；9-12分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS 9.1進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用卡方檢驗(yàn)，多個(gè)獨(dú)立樣本等級(jí)資料的分析采用Kruskal-Wallis Test，進(jìn)一步兩兩比較采用Dwass Steel Critchlow-Fligner （DSCF多重比較）。以P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

MMP-2在在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜陽性表達(dá)率分別為75%、84%、45%。將三組的陽性率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明MMP-2在這三組之間整體表達(dá)有差異性，將MMP-2在三組間的分布做Kruskal-Wallis Test，得出H=17.1014，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明MMP-2在三組間的分布不全相同。再進(jìn)一步兩兩比較采用DSCF多重比較，可得出異位內(nèi)膜中的表達(dá)略高于在位內(nèi)膜，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中的表達(dá)均顯著高于正常內(nèi)膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同理可以得出E-CAD在在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜陽性表達(dá)率分別為59.4%、37.5%、95%。E-CAD在這三組之間整體表達(dá)有差異性，E-CAD異位內(nèi)膜中的表達(dá)略低于在位內(nèi)膜，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)；在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中的表達(dá)顯著低于正常內(nèi)膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 MMP-2與 E-CAD在各內(nèi)膜中的表達(dá)

3 討 論

EMT具有細(xì)胞侵襲能力，能局部或遠(yuǎn)程轉(zhuǎn)移。一般認(rèn)為這種侵入和轉(zhuǎn)移的發(fā)生，與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM )的降解密切相關(guān)[1]。MMP-2具有降解ECM及血管基底膜的作用。MMP-2被認(rèn)為是在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中最直接和最重要的MMPs，與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，是近年來研究的熱點(diǎn)[2]。

細(xì)胞與ECM粘附作用的膜表面糖蛋白稱為黏附因子，其中鈣粘素是一類鈣離子依賴的黏附分子家族，是參加細(xì)胞間粘附作用的重要粘附分子之一，其中最重要的是E-CAD。E-CAD是在上皮細(xì)胞 - 細(xì)胞粘附和維持組織結(jié)構(gòu)中起關(guān)鍵作用。鈣粘蛋白的異常表達(dá)在許多人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[3]。

在EMT中，異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的粘附，增殖和血管生成過程可能是形成子宮內(nèi)膜異位病灶所必需的，因此子宮內(nèi)膜異位細(xì)胞侵襲力的增加被認(rèn)為是EMT進(jìn)展的一個(gè)可能原因[4]。

各種體內(nèi)和體外研究也提示MMP-2的過度表達(dá)和E-CAD的缺失與EMT的發(fā)展和侵襲性有關(guān)。在本研究中，在EMT中無論是異位內(nèi)膜還是在位內(nèi)膜MMP-2的表達(dá)顯著高于正常內(nèi)膜，E-CAD在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中的表達(dá)均低于正常內(nèi)膜。說明E-CAD減少使得細(xì)胞間黏附力降低，為內(nèi)膜異位提供了最初的條件，而MMP-2的表達(dá)增強(qiáng)，誘導(dǎo)血管生成能力和分解細(xì)胞外基質(zhì)能力增加，異位內(nèi)膜侵襲性和轉(zhuǎn)移能力均增強(qiáng)，二者都使得異位內(nèi)膜的侵襲性和轉(zhuǎn)移能力增加，在EMT中起重要作用。

參考文獻(xiàn)

[1] Akoum A, Alakoum M, Lemay A, et al. Imbalance in the peritoneal levels of interleukin 1 and its decoy inhibitory receptor type II in endometriosis women with infertility and pelvic pain.[J]. Fertility& Sterility, 2008, 9(6):1618-1624.

[2] Loukopoulos P, ungall B A, traw R C,et al.Matrix metalloproteinase-2 and -9 involvement in canine tumors.[J].Veterinary Pathology, 2003, 40(4):382-394.

[3] Shiozaki H, Tahara H, Oka H, et al. Expression of immunoreactive E-cadherin adhesion molecules in human cancers. Am J Pathol 1991;139:17–23.

[4] Gaetje R, Kotzian S, Herrmann G, Baumann R, Starzinski-Powitz A: Invasiveness of endometriotic cells in vitro. Lancet 1995;346:1463–1464.