李白 李軍 沈亞強(qiáng)

（浙江省嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院（所），嘉興 314016）

三株土壤解磷細(xì)菌的分離及其解磷效果分析

李白 李軍 沈亞強(qiáng)

（浙江省嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院（所），嘉興 314016）

旨為解決農(nóng)業(yè)面源污染問(wèn)題，分離鑒定土壤解磷微生物并開(kāi)發(fā)復(fù)合微生物菌劑。以有機(jī)磷農(nóng)藥及無(wú)機(jī)難溶磷作為篩選磷源，對(duì)土壤中具有解磷能力的微生物進(jìn)行分離、鑒定并對(duì)其解磷效果進(jìn)行分析。從土壤中分離得到3株解磷細(xì)菌，分別命名為菌株W、Y、B；3個(gè)菌株均是革蘭氏陰性菌；W菌株對(duì)敵百蟲(chóng)的降解能力最強(qiáng)，達(dá)到17.39%，B菌株對(duì)毒死蜱的降解率最強(qiáng)，為23.06%；3個(gè)菌株對(duì)固態(tài)難溶磷的解磷效果顯著，其中B菌株解磷量最高，為96.31 mg/L；復(fù)合菌的解磷效果明顯優(yōu)于單菌，另外復(fù)合菌對(duì)稻田、大棚土壤解磷的促進(jìn)效果顯著，分別增加18.38 mg/L、14.08 mg/L。分離得到3株有效土壤解磷細(xì)菌，有一定的有機(jī)磷農(nóng)藥降解能力，對(duì)無(wú)機(jī)磷溶解效果較強(qiáng)，構(gòu)建的復(fù)合菌劑對(duì)土壤解磷的促進(jìn)效果顯著。

有機(jī)磷農(nóng)藥；無(wú)機(jī)磷；復(fù)合微生物；解磷細(xì)菌

當(dāng)今，農(nóng)業(yè)面源污染已成為重要的環(huán)境問(wèn)題。農(nóng)業(yè)源總氮（TN）、總磷（TP）分別占全國(guó)排放總量的57.2%和67.4%，已超過(guò)工業(yè)污染［1］。肥料和農(nóng)藥是農(nóng)業(yè)面源污染重要來(lái)源，一方面直接污染水源，另一方面通過(guò)促進(jìn)藻類過(guò)度增殖而污染水源。藻類的過(guò)度繁殖會(huì)使水體產(chǎn)生顯著的臭氣物，且“藻毒素”含量超標(biāo)。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，飲水中的微囊藻毒素（MC-LR）與肝癌的地區(qū)高發(fā)性及原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病人數(shù)有關(guān)［2］。殘留的農(nóng)藥進(jìn)入水體后，會(huì)通過(guò)食物鏈在水產(chǎn)品中富集，引發(fā)質(zhì)量安全問(wèn)題。2006年浙江省嘉興市由于晚稻田害蟲(chóng)防治，使用大量農(nóng)藥，污染了環(huán)境，引發(fā)家蠶大面積中毒事件［3］。

針對(duì)農(nóng)業(yè)面源污染，楊林章等［4］提出了“4R”防治理論，即：源頭減量，過(guò)程截?cái)啵┒诵迯?fù)，循環(huán)利用。而環(huán)境微生物技術(shù)在“4R”階段中的應(yīng)用，將進(jìn)一步提升防治效果［5］。研究表明，微生物對(duì)受污染的土壤、水體具有良好的修復(fù)效果［6-10］。此外，一些微生物進(jìn)入環(huán)境中，對(duì)作物的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，段秀梅等［11］研究發(fā)現(xiàn)，用兩株解磷菌，黏質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）和產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes）處理玉米，結(jié)果株高、根干重、植株干重分別比未處理組高29.9%、16.7%、24.2%，類似的微生物肥料在耕地質(zhì)量提升中具有重要作用［12］。這類微生物菌肥可以增加土壤中養(yǎng)分的綜合利用，減少化肥的施用和流失，在源頭階段減少污染量。

本研究結(jié)合了農(nóng)業(yè)面源污染與作物促生問(wèn)題，以雙功能菌種的分離作為切入點(diǎn)，從環(huán)境中獲得能降解有機(jī)磷農(nóng)藥，并能溶解無(wú)機(jī)磷的菌種，并建立以該類菌株為核心的復(fù)合微生物菌劑，探索該菌劑應(yīng)用于分解有機(jī)磷農(nóng)藥、溶解無(wú)機(jī)難溶磷的綜合方法和效果，為其在農(nóng)業(yè)面源污染及作物促生中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑和培養(yǎng)基 敵百蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/mL u=3%）購(gòu)自阿拉丁公司，毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%）購(gòu)自上海將來(lái)實(shí)業(yè)有限公司，海博細(xì)菌生化鑒定試劑盒購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司，其他試劑為分析純。

改良蒙金娜液體培養(yǎng)基：葡萄糖 10 g、（NH4）2SO40.5 g、MgSO4·7H2O 0.3 g、NaCl 0.3 g、KCl 0.3 g、FeSO4·7H2O 0.03 g、MnSO4·H2O 0.03 g、CaCO35 g、酵母提取物1 g，純水定容至1 000 mL，pH 7.0。

改良蒙金娜無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基：1 000 mL蒙金娜液體培養(yǎng)基中加入5 g Ca3（PO4）2。

改良蒙金娜固體培養(yǎng)基：1 000 mL蒙金娜液體培養(yǎng)基中加入20 g瓊脂。

1.1.2 菌種 有效微生物（Effective microorganisms，EM）液體，購(gòu)自山西天意生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 菌種的分離 取樣：土樣取自浙江省嘉興市農(nóng)科院露天菜地土壤。接種：土樣用無(wú)菌水1∶100（W/V）稀釋后，以2%體積比接種于蒙金娜液體培養(yǎng)基（同時(shí)含0.02%有機(jī)磷農(nóng)藥、0.01%毒死蜱、0.01%敵百蟲(chóng)）。培養(yǎng)：30℃、150 r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)5 d后取培養(yǎng)后菌液以2%體積比接種，重復(fù)培養(yǎng)2次。涂布：取培養(yǎng)后的菌液，按10-3-10-7梯度稀釋，取200 mL涂布于蒙金娜無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)5 d。劃線：篩選具有明顯解磷圈的菌落劃線分離純化3次，斜面培養(yǎng)基4℃保存，液體培養(yǎng)基-80℃保存。

1.2.2 有機(jī)磷農(nóng)藥降解測(cè)定 將分離菌株W、Y、B稀釋至OD600=1.0，以2% 體積比分別接種到含0.01%毒死蜱的蒙金娜液體培養(yǎng)基和含0.01%敵百蟲(chóng)的蒙金娜液體培養(yǎng)基，30℃、150 r /min的搖床上振蕩培養(yǎng)72 h，用分光光度法快速測(cè)定敵百蟲(chóng)［13］、毒死蜱［14］含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，分別計(jì)算敵百蟲(chóng)、毒死蜱降解率，農(nóng)藥降解率（%）=（培養(yǎng)前濃度-培養(yǎng)后濃度）/培養(yǎng)前濃度×100%。

1.2.3 固態(tài)難溶磷溶解測(cè)定 分離菌株W、Y、B分別以2%體積比接種到蒙金娜無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基，30℃、150 r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)72 h，用鉬銻抗比色法測(cè)定可溶無(wú)機(jī)磷含量，試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算解磷量，解磷量=培養(yǎng)后濃度-培養(yǎng)前濃度，磷凈增加量為前后磷濃度差。

1.2.4 分離菌的生化特征 分離菌株W、Y、B的主要生化特征用海博細(xì)菌生化鑒定試劑盒檢測(cè)21個(gè)典型生化指標(biāo)。

1.2.5 分子鑒定 用分離菌株W、Y、B 培養(yǎng)液對(duì)16S rDNA序列PCR擴(kuò)增。培養(yǎng)的菌液用無(wú)菌水洗滌、重懸，懸液用沸水浴處理5 min，再冰浴冷卻1 min，經(jīng)10 000 r/min 離心后取上清為模板。菌液PCR引物：27F：5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'和1 492R：5'-GHTACCTTGTTACGACTT-3'。PCR反應(yīng)體系（50 mL）為：2×PCR mix 25 mL，無(wú)菌水22 mL，引物27F（10 mmol/L）和1492R（10 mmol/L）各1 mL，模板1 mL。PCR擴(kuò)增條件為：94℃預(yù)變性4 min；94℃變性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1.5 min，30個(gè)循環(huán)；72℃最后延伸5 min。反應(yīng)產(chǎn)物用1% 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，測(cè)序由上海賽默飛世爾科技有限公司完成。

1.2.6 溫度、初始pH值對(duì)分離菌株增殖的影響 將-80℃保存的分離菌株W、Y、B分別接種于LB液體培養(yǎng)基中，30℃、150 r/min 復(fù)蘇培養(yǎng)24 h，至OD600=1.5，再以1%體積比接種于新鮮LB液體培養(yǎng)基中，分別在20、25、30、35、40和45℃下150 r/min 培養(yǎng)48 h，試驗(yàn)重復(fù)3次，測(cè)定菌液OD600值。

將復(fù)蘇的菌液以1%體積比接種于新鮮LB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的初始pH值分別為3、4、5、6、7、8、9、10、11和30℃、150 r/min 培養(yǎng)48 h，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，測(cè)定菌液OD600值。

1.2.7 復(fù)合菌的解磷效果 將W、Y、B 3個(gè)分離菌株稀釋至OD600=1.0，EM菌（液體）稀釋至OD680=1.0。將W、Y、B單一菌株、EM菌及復(fù)合菌劑（表1）分別以2%體積比接種到蒙金娜無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基，30℃、150 r/min 的搖床上振蕩培養(yǎng)24 h，用鉬銻抗比色法測(cè)定無(wú)機(jī)P含量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，分析解磷量。

表1 復(fù)合菌中各分離菌株比例

1.2.8 復(fù)合菌對(duì)土壤解磷的促進(jìn) 采集浙江省嘉興市農(nóng)科院內(nèi)稻田、露天菜地、大棚耕層土樣，參照陳貴等［15］的方法測(cè)定土樣全氮、堿解氮、速效磷、速效鉀、有機(jī)質(zhì)及pH值，樣品理化性狀見(jiàn)表2。土樣用無(wú)菌水按1∶100（W/V）稀釋，土壤懸液以2%體積比接種于蒙金娜無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基。試驗(yàn)組將復(fù)合菌H2以1%體積比添加到土壤懸液中，30℃、150 r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)72 h，用鉬銻抗比色法測(cè)定無(wú)機(jī)P含量。對(duì)照各組土壤懸液中未添加復(fù)合菌H2，培養(yǎng)、測(cè)定條件與實(shí)驗(yàn)組相同。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，解磷增量=H2組培養(yǎng)后濃度-相應(yīng)對(duì)照組培養(yǎng)后濃度。

表2 不同耕層土壤理化性狀

2 結(jié)果

2.1 解磷菌株的分離

菜地土壤經(jīng)有機(jī)磷農(nóng)藥、無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基雙重篩選后，分離純化得到白色、黃色及藍(lán)色3個(gè)菌株，分別命名為W、Y、B。培養(yǎng)5 d后，10-5稀釋的3個(gè)菌株均能在蒙金娜無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基上形成清晰解磷圈（圖1）。

圖1 W、Y、B分離菌株的形態(tài)特征及解磷圈

2.2 分離菌株對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解

進(jìn)一步測(cè)定了3個(gè)分離菌株對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解能力。敵百蟲(chóng)和毒死蜱降解測(cè)定結(jié)果（圖2）表明，3個(gè)菌株對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥都有一定的降解能力。其中W菌株對(duì)敵百蟲(chóng)的降解能力最強(qiáng)，經(jīng)過(guò)72 h培養(yǎng)，敵百蟲(chóng)濃度由102.05 mg/L降到84.30 mg/L，降解率為17.39%。B菌株對(duì)毒死蜱的降解率最強(qiáng)，經(jīng)過(guò)72 h培養(yǎng)，毒死蜱濃度由103.42 mg/L降到79.58mg/L，降解率為23.06%。

圖2 分離菌株W、Y、B對(duì)敵百蟲(chóng)和毒死蜱的降解

2.3 分離菌株對(duì)固態(tài)難溶磷的溶解

解磷測(cè)定結(jié)果（圖3）表明，3個(gè)分離菌株解磷能力穩(wěn)定，效果顯著?？扇軣o(wú)機(jī)磷初始濃度由3.05 mg/L先下降，再逐步上升。培養(yǎng)24 h與培養(yǎng)4 h相比，W菌株解磷凈增加量較低，為5.28 mg/L，B菌株為6.06 mg/L，Y菌株解磷量較高，為6.75 mg/L。培養(yǎng)72 h與培養(yǎng)24 h相比，W、Y菌株解磷凈增加量為87.51 mg/L、86.92 mg/L，B菌株較高，為92.89 mg/L，與初始相比，提高了96.31 mg/L。

圖3 W、Y、B菌株對(duì)無(wú)機(jī)磷的溶解能力測(cè)定

2.4 菌株生理生化特征分析

利用海博細(xì)菌生化鑒定試劑盒對(duì)W、Y、B三個(gè)分離菌株的21個(gè)典型生化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果（表3）表明，3個(gè)株菌非腸道微生物，偏好氨基酸、有機(jī)酸。

2.5 分離菌株的分子鑒定

經(jīng)菌液PCR擴(kuò)增后，分離菌株W、Y、B 均擴(kuò)增得到1 500 bp左右的條帶（圖4）。測(cè)序后，經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)表明，W為皮氏羅爾斯頓菌（Ralstonia pickettii），相似度99%，Y為棲稻假單胞菌（Pseudomonas oryzihabitans），相似度100%，B為油菜假單胞菌（Pseudomonas brassicacearum），相似度100%。

圖4 分離菌株W、Y、B的16S rRNA PCR擴(kuò)增

表3 分離菌株W、Y、B的生理生化特性

2.6 溫度、初始pH對(duì)菌種增殖的影響

不同溫度下W、Y、B菌體增殖變化情況如圖5。W及Y菌株的最適培養(yǎng)溫度為35℃，培養(yǎng)24 h后，OD600分別達(dá)到1.49及2.24；B菌株的最適培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)24 h后，OD600達(dá)到2.18。

圖5 溫度對(duì)分離菌株W、Y、B生長(zhǎng)的影響

初始pH是影響菌株生長(zhǎng)的化學(xué)因子，不同初始pH下菌株W、Y、B生長(zhǎng)變化如圖6。結(jié)果表明，3個(gè)菌株培養(yǎng)的最適初始pH值均為7-8，培養(yǎng)24 h后，W、Y、B 3個(gè)菌株的OD600分別達(dá)到1.83、2.33及2.50。初始pH低于5或高于10，3個(gè)菌株生長(zhǎng)明顯減弱。

圖6 初始pH值對(duì)菌種增殖的影響

2.7 復(fù)合菌的解磷效果

單一菌株（圖3）與復(fù)合菌株（表1）解磷試驗(yàn)結(jié)果（圖7）表明，24 h解磷效果復(fù)合菌株優(yōu)于單一菌株。培養(yǎng)24 h后，單一菌株中Y菌株解磷量較高，為6.75 mg/L；雙菌株復(fù)合以W、Y菌株混合解磷效果最好，解磷量為5.67 mg/L；單菌與雙菌解磷量差異較小，但W、Y、B 3菌株復(fù)合菌解磷量高于單、雙菌株，達(dá)到17.40 mg/L；W、Y、B3菌株與EM混合后，解磷量達(dá)到119.46 mg/L。復(fù)合菌較單菌株解磷能力強(qiáng)，可能與復(fù)合菌內(nèi)菌種間互利作用有關(guān)。

圖7 復(fù)合菌株解磷實(shí)驗(yàn)

圖8 多菌株不同比例的解磷實(shí)驗(yàn)

多菌株不同比例（表1）解磷實(shí)驗(yàn)（圖8）表明，適當(dāng)增加W、Y、B復(fù)合菌中B菌株的比例，解磷量由3.54 mg/L上升到169.13 mg/L。以適當(dāng)比例加入EM，解磷量由123.18 mg/L上升到322.64 mg/L。 EM、W+Y+B復(fù)合菌、W+Y+B+EM復(fù)合菌之間相比較，解磷量分別能達(dá)到46.91 mg/L、169.13 mg/L、322.64 mg/L，菌種越豐富、解磷量越高。

2.8 復(fù)合菌的土壤解磷效果分析

稻田土、露天菜地、大棚土壤懸液經(jīng)H2處理后，可溶無(wú)機(jī)磷濃度比未添加復(fù)合菌的對(duì)照組均有一定提升（圖9）。培養(yǎng)液初始磷濃度為3.61 mg/L，處理組中露天菜地組解磷量比對(duì)照提升了1.96 mg/L，效果較弱，可能該土壤已具有類似解磷菌系；水稻田、大棚組比對(duì)照解磷量的提升分別為18.38 mg/L、14.08 mg/L，效果顯著，可能受單一施肥及封閉條件影響，水稻田、大棚土壤中解磷類菌系結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，解磷能力弱。

3 討論

本研究從土壤中分離到3個(gè)有機(jī)磷降解菌株，鑒定結(jié)果表明，它們分別為皮氏羅爾斯頓菌、棲稻假單胞菌、油菜假單胞菌。3個(gè)菌株都是葡萄糖非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌，條件致病，人的感染較少見(jiàn)［16］。皮氏羅爾斯頓菌屬于羅爾斯頓菌屬，耐貧營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，能修復(fù)受污染的環(huán)境。冷守琴等［17］發(fā)現(xiàn)1株降解氯苯的皮氏羅爾斯頓菌，在適宜條件下，3 d內(nèi)對(duì)220 mg/L的氯苯去除率可達(dá)99%。Ryan等［18］綜述了該菌對(duì)多種工業(yè)污染物如甲苯和三氯乙烯等的修復(fù)能力。棲稻假單胞菌屬于惡臭假單胞菌屬，道能增強(qiáng)纖維素水解酶的活性［19］。油菜假單胞菌屬于假單胞菌屬，是植物防病和促生菌，它被報(bào)道能拮抗棉花黃萎病菌、惡疫霉菌、番茄細(xì)菌性潰瘍病菌亞種、果膠桿菌等植物病菌［20-22］。3個(gè)菌種對(duì)環(huán)境修復(fù)和植物促生都有各自獨(dú)特的功能，以此為核心構(gòu)建的復(fù)合微生物將繼承這些優(yōu)勢(shì)。

圖9 復(fù)合菌對(duì)稻田、露天菜地、大棚土壤解磷效果

有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱、敵百蟲(chóng)的降解實(shí)驗(yàn)表明，本研究獲得的3個(gè)菌株都有耐受性，并具有一定的有機(jī)磷農(nóng)藥降解能力。其中，W菌株對(duì)敵百蟲(chóng)的降解能力最強(qiáng)，B菌株對(duì)毒死蜱的降解率最強(qiáng)，降解能力在20%左右，比報(bào)道的專一降解有機(jī)磷農(nóng)藥的菌種較低。一方面降解有機(jī)磷農(nóng)藥可能需要多種菌種參與，而菌株的純化過(guò)程破壞了菌種之間的互作關(guān)系；另一方面本研究分離的菌種兼具修復(fù)污染和植物促生兩方面功能，單一降解能力較其他菌種弱。這種不足可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方式定向改良。張揚(yáng)等［9］發(fā)現(xiàn)皮氏羅爾斯頓菌能降解三氯吡啶醇（毒死蜱降解的中間產(chǎn)物），但不能有效地降解毒死蜱，他通過(guò)轉(zhuǎn)基因構(gòu)建了能完全礦化毒死蜱的工程菌。有機(jī)磷農(nóng)藥的降解需要一系列降解酶的參與，這些酶在自然環(huán)境下可能分布在不同的微生物體內(nèi)，可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)把這系列基因聚合在一起，令菌株具有完全的礦化多種農(nóng)藥的能力，提高環(huán)境微生物技術(shù)的適用性與穩(wěn)定性

純化后的菌株W、Y、B解磷實(shí)驗(yàn)表明，3個(gè)菌株可以單獨(dú)溶解固態(tài)難溶磷，而且解磷效果穩(wěn)定，其中4 h可溶無(wú)機(jī)磷濃度較初始值降低，解磷量＜0，可能培養(yǎng)初期菌種的增殖消耗了培養(yǎng)液中少量可溶磷。溶解Ca3（PO4）2實(shí)驗(yàn)中，W、Y、B處理組的可溶無(wú)機(jī)磷濃度上升后，其培養(yǎng)液pH值為3-4（初始pH7），推測(cè)其分泌的有機(jī)酸起到了溶解固態(tài)無(wú)效磷的作用。但在中性LB中培養(yǎng)后，其pH仍為中性，推測(cè)產(chǎn)酸酶為誘導(dǎo)酶，低濃度磷是其誘導(dǎo)因子。多個(gè)研究顯示解磷菌溶磷能力與pH之間相關(guān)性仍存在爭(zhēng)議［23-27］，本研究發(fā)現(xiàn)兩者之間存在一定相關(guān)性。自然環(huán)境中解磷細(xì)菌可能存在多種溶磷機(jī)制，可以通過(guò)產(chǎn)酸溶解固態(tài)磷，也可能通過(guò)其他途徑。

EM菌是由多種微生物組成的復(fù)合菌劑，包含酵母菌、乳酸菌、光合細(xì)菌、放線菌等，具有修復(fù)土壤、凈化水質(zhì)、促進(jìn)植物生長(zhǎng)等功能［7，28］。本研究發(fā)現(xiàn)，EM也有一定的解磷能力，與W、Y、B菌株復(fù)配后，溶磷效果顯著提升，當(dāng)EM在復(fù)合菌中的比例適宜時(shí)，能進(jìn)一步提升整體解磷效果。侯佳奇等［29］通過(guò)復(fù)配菌株，各個(gè)菌株間通過(guò)相互促進(jìn)，協(xié)同共生效果最佳，顯著提高了解磷量。適當(dāng)提高復(fù)合菌中微生物種類，可促進(jìn)菌間互作，有利于核心菌群發(fā)揮功能。

由W、Y、B、EM組成的復(fù)合菌劑與水稻田、露天菜地、大棚的土壤懸液混合后，對(duì)土壤中磷的溶解促進(jìn)效果不同。菌劑與水稻田、大棚土壤混合后促進(jìn)效果最好，可能這類土壤中缺乏溶磷微生物，添加復(fù)合菌劑后，促進(jìn)效果顯著。而露天菜地中溶磷微生物可能較豐富，添加復(fù)合菌劑后促進(jìn)效果不明顯。這表明復(fù)合菌劑對(duì)不同土壤的溶磷促進(jìn)作用與土壤自帶的微生物有關(guān)。添加的菌肥與環(huán)境土著微生物互作良好，將促進(jìn)土壤肥力；互作較弱甚至拮抗，將無(wú)法提升肥力，甚至降低土壤活性。微生物菌肥的施用，在測(cè)土配方的基礎(chǔ)上，再根據(jù)土壤自身菌群情況下選擇，能獲得更好的預(yù)期效果。

4 結(jié)論

本研究從土壤中分離到3個(gè)有機(jī)磷降解菌株，并證實(shí)其具有一定的有機(jī)磷農(nóng)藥降解能力，對(duì)無(wú)機(jī)磷溶解效果較強(qiáng)，構(gòu)建的復(fù)合菌劑對(duì)土壤解磷的促進(jìn)效果顯著。

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（責(zé)任編輯 狄艷紅）

Isolation and Characterization of Three Bacterial Strains Capable of Phosphate-solubilizing from Soil

LI Bai LI Jun SHEN Ya-qiang
（Jiaxing Academy of Agricultural Sciences，Jiaxing 314016）

This work is to isolate and identify the phosphate-solubilizing microorganisms and develop microbial complex agents targeting for solving the problems of agricultural non-point source pollution. The organic phosphorus pesticide “chlorpyrifos”，“trichlorfon” and insoluble inorganic phosphorus Ca3（PO4）2were used as phosphorus source to screen and identify the phosphate-solubilizing microbe from soil，as well as analyze their phosphate-solubilizing capacity. The result showed that three phosphate-solubilizing bacterial strains（W，Y and B）were isolated from the soil. All three strains were gram-negative strains. The degradation results of organophosphorus pesticides showed that strain W had the strongest degradation rate of trichlorfon with 17.39%，and strain B had the strongest degradation rate of chlorpyrifos with 23.06%. All three strains solubilized significantly solid insoluble phosphate，and the B strain had the highest phosphorus-solubilizing capacity of 96.31 mg/L. The solubilizing phosphate results of single strain and compound strains showed that the effect of compound strains was significantly better than single strain. When W，Y，and B strains mixed with EM，the phosphorus-solubilizing capacity rose to 119.46 mg/L，and the phosphorussolubilizing capacity in paddy fields and greenhouse soil was improved to 18.38 mg/L and 14.08 mg/L，respectively. In conclusion，three strains isolated from soil have the abilities of degrading organic phosphorus pesticide and solubilizing inorganic phosphorus Ca3（PO4）2. The compound strains significantly improved the phosphorus-solubilizing capacity of soil significantly.

organophosphorus pesticides；inorganic phosphorus；compound microbial；phosphate-solubilizing bacteria

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-0915

2016-09-29

嘉興市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014AY21001）

李白，男，農(nóng)藝師，研究方向：生物技術(shù)；E-mail：libaia@yeah.net

李軍，男，副研究員，研究方向：生物技術(shù)；E-mail：lijunjx1@163.com