郝 斌，王 切，王素玲，王 磊*

(1.河北省滄州市中心醫(yī)院泌尿外科,河北 滄州 061001； 2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，河北 石家莊 050017；3.河北省血液中心檢驗(yàn)科， 河北 石家莊 050071)

·論 著·

EC-SOD在腎缺血再灌注損傷大鼠腦內(nèi)的表達(dá)變化

郝 斌1，王 切2，王素玲3，王 磊2*

(1.河北省滄州市中心醫(yī)院泌尿外科,河北 滄州 061001； 2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，河北 石家莊 050017；3.河北省血液中心檢驗(yàn)科， 河北 石家莊 050071)

目的觀察細(xì)胞外超氧化物歧化酶(extracellular superoxide dismutases，EC-SOD)在腎缺血再灌注損傷(renal ischemia reperfusion injury，RIRI) 大鼠腦內(nèi)的表達(dá)變化,探討EC-SOD在腦抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中的作用。方法選用健康雄性Wistar大鼠12只，隨機(jī)分為對照組和RIRI組各6只，RIRI組切除大鼠右腎后,用無損傷動脈夾夾閉大鼠左腎動脈,45 min后移去動脈夾,恢復(fù)大鼠左腎血液供應(yīng)，建立大鼠腎缺血再灌注損傷模型。待左腎動脈再灌注24 h后麻醉大鼠取材(血、腎、腦)。對照組大鼠只分離左腎動脈并不夾閉。選用苦味酸和酶偶聯(lián)速率法,檢測2組大鼠血清中血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、血清肌酐(serum creatinine,SCr)濃度；蘇木精-伊紅染色光鏡觀察實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織形態(tài)變化；采用硫代巴比妥酸比色法檢測2組大鼠腦內(nèi)丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和western blot法,測定大鼠腦內(nèi)EC-SOD mRNA與蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果RIRI組大鼠血清中BUN和SCr濃度明顯高于對照組,RIRI組大鼠腦內(nèi)MDA含量、H2O2濃度、EC-SOD mRNA水平相對表達(dá)量以及EC-SOD蛋白水平相對表達(dá)量均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RIRI組腦組織MDA、H2O2含量與EC-SOD mRNA水平以及EC-SOD蛋白水平表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論大鼠RIRI后,腦內(nèi)出現(xiàn)過氧化損傷；EC-SOD在RIRI大鼠腦內(nèi)的表達(dá)升高,可能發(fā)揮了抗氧化應(yīng)激的作用。

再灌注損傷;超氧化物歧化酶;丙二醛

缺血再灌注損傷是指器官在缺血缺氧時出現(xiàn)的細(xì)胞損傷，會在器官的血液和氧含量恢復(fù)時加重的現(xiàn)象[1-2]。腎缺血再灌注損傷(renal ischaemia reperfusion injury，RIRI)是腎臟在臨床治療過程中經(jīng)常發(fā)生的病理生理過程，也是影響腎功能恢復(fù)以及發(fā)生腎衰竭的重要原因之一[3-5]。腎在缺血再灌注過程中會有大量活性氧族(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生，使腎處于高度的氧化應(yīng)激狀態(tài)，損傷腎功能[6-7]。已有研究發(fā)現(xiàn)在腎功能損傷時，會影響機(jī)體其他器官如肝、肺等的功能[8]。細(xì)胞外超氧化物歧化酶(extracellular superoxide dismutases，EC-SOD)是在組織的細(xì)胞外基質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)的，被認(rèn)為能有效地阻止細(xì)胞外ROS所引發(fā)的細(xì)胞和組織損傷[9]。腦是對缺血缺氧高度敏感的器官，本研究旨在觀察RIRI發(fā)生時腦組織是否會受到RIRI的影響？腦內(nèi)EC-SOD的表達(dá)是否發(fā)生改變？現(xiàn)將觀察結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 大鼠RIRI模型的建立及取材 選用健康雄性Wistar大鼠12只(來自河北省實(shí)驗(yàn)動物中心，合格證編號：1510165)，體質(zhì)量190～210 g，隨機(jī)分為對照組和RIRI組各6只。6%水合氯醛(5 mL/kg)腹腔注射麻醉下，將大鼠固定于手術(shù)臺上，常規(guī)備皮、消毒、鋪單。自劍突向下做腹部正中切口4 cm，暴露并結(jié)扎右側(cè)腎蒂后切除右腎。RIRI大鼠分離左腎動脈,用無創(chuàng)動脈夾將其夾閉,觀察左腎顏色，由鮮紅漸變?yōu)榘导t，顯示夾閉成功。45 min后松開動脈夾,恢復(fù)血液供應(yīng),可見左腎動脈充盈,顏色迅速轉(zhuǎn)為鮮紅色,顯示再灌注成功。對照組大鼠只分離左腎動脈并不夾閉。術(shù)后單籠飼養(yǎng)、自由進(jìn)食飲水。

術(shù)后24 h再次麻醉大鼠，自頸總動脈取血約5 mL，將血液3 000 r/min離心10 min，分離血清去除紅細(xì)胞，用于血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(serum creatinine，SCr)濃度測定；取腎并用4%多聚甲醛浸泡固定，組織切片蘇木精-伊紅(hematoxylin eosion,HE)染色光鏡觀察其形態(tài)學(xué)變化；取腦置于液氮中，用于丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和EC-SOD mRNA及蛋白水平測定。

1.2 主要試劑及PCR引物 RT試劑盒購于Promega公司，SCr和BUN測定試劑盒均購于中生北控生物科技有限公司，MDA和H2O2測定試劑盒均購于南京建成科技有限公司。兔抗EC-SOD抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記抗兔IgG抗體均購于Abcam公司。所有引物均采用primer 5.0軟件設(shè)計(jì)。GAPDH(gene bank: NM _017008)：由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)公司合成。上游：5′GCT GAG TAT GTC GTG GAG T 3′;下游：5′TCT TCT GAG TGG CAG TGA T 3′;擴(kuò)增產(chǎn)物長度為286 bp(344～629 bp)。EC-SOD(gene bank:NM_057114)：由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)公司合成。上游：5′CCT GGG TAA AGG TGG CA3′;下游：5′TGG GAG CAA ACT CAA AGA C3′;擴(kuò)增產(chǎn)物長度為573 bp(711～1 283 bp)。

1.3 血清SCr和BUN濃度測定 根據(jù)試劑盒說明書，采用苦味酸法測定血清樣本SCr濃度，酶偶聯(lián)速率法測定BUN濃度。將R1和R2按照1∶1的比例混合成工作液，校準(zhǔn)品開瓶即可使用，用于測定SCr濃度；用R2溶解R1，溶解后即為工作液，校準(zhǔn)品為廠家提供，用于測定BUN濃度。各取3只直徑為1 cm的比色管，分別作為空白管、校準(zhǔn)管和樣本管。在空白管內(nèi)加入1 mL工作液和0.1 mL生理鹽水，在校準(zhǔn)管內(nèi)加入1 mL工作液和0.1 mL校準(zhǔn)品,在樣本管內(nèi)加入1 mL工作液和0.1 mL血清樣本，分別混勻待檢測。測定其在波長505 nm(SCr)和340 nm(BUN)、溫度37 ℃條件下的吸光光度值?；靹蚝?0 s所測吸光光度值為A1，再過20～60 s所測吸光光度值為A2，用2次吸光光度的差值，以空白管調(diào)零，計(jì)算吸光光度的變化值，即△A樣本和△A校準(zhǔn)。根據(jù)公式C樣本=△A樣本×C校準(zhǔn)/△A校準(zhǔn)，計(jì)算每個血清樣本的SCr和BUN濃度。

1.4 腎組織形態(tài)學(xué)觀察 將腎臟組織置于4%多聚甲醛固定液內(nèi)固定，按常規(guī)組織切片制作步驟進(jìn)行操作：脫水、透明、浸蠟、包埋，切片厚約5 μm，HE染色后封片，奧林巴斯光學(xué)顯微鏡觀察腎組織的形態(tài)變化并攝像。

1.5 腦組織勻漿的制備和MDA、H2O2含量測定 將從-70 ℃冰箱中取出的腦組織，按照20 mg/100 μL加入預(yù)冷的勻漿緩沖液(50 mmol/L磷酸鉀緩沖液，pH7.4，1 mmol/L鹽酸苯甲脒，1 mmol/L PMSF，0.1%Tween-20，0.5 mol/L NaCl,1 mmol/L EDTANa3，5 mmol/Lβ-巰基乙醇)，冰浴中勻漿，勻漿液4 000 r/min(約3 500 g)，4 ℃離心20 min，收集150 μL上清液，于上清液內(nèi)加入150 μL勻漿緩沖液即制成10%腦勻漿，用于MDA及H2O2含量測定。根據(jù)試劑盒操作說明，MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法測定，以每克樣本蛋白所含MDA的量表示(mmol/g pro)；H2O2含量采用鉬酸比色法測定，以每克樣本蛋白所含的過氧化氫的量(mmol/g pro)表示。

1.6 腦組織EC-SOD mRNA水平與蛋白水平相對表達(dá)量的測定 采用Trizol(Invitrogen公司)法，提取腦組織總RNA。用3 μgRNA 反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，GAPDH作為內(nèi)參照，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。用EC-SOD與內(nèi)參的擴(kuò)增產(chǎn)物灰度值之比，表示EC-SOD mRNA相對表達(dá)量。采用免疫印跡分析法測定大鼠腦組織內(nèi)EC-SOD蛋白的相對表達(dá)量。將腦組織制成勻漿后，離心取上清。采用改良Lowry法測定腦組織蛋白總量。電泳時上樣量為62 μg。經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，在聚偏氟乙稀(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上滴加一抗，室溫(18～24 ℃)過夜，漂洗后加HRP標(biāo)記的二抗。按照發(fā)光試劑的操作說明進(jìn)行顯影、定影、晾干。影像掃描后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析(以條帶吸光光度值與內(nèi)參之比表示相對表達(dá)量)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用成組設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變 光學(xué)顯微鏡下，對照組大鼠腎小囊、腎血管球、近曲小管、遠(yuǎn)曲小管以及集合管的形態(tài)結(jié)構(gòu)均清晰規(guī)整。RIRI大鼠腎血管球萎縮，體積減小，腎小囊腔出現(xiàn)擴(kuò)張，腎小管管腔也擴(kuò)張明顯，偶爾可見近曲小管上皮細(xì)胞呈現(xiàn)水腫、胞漿疏松化改變；腎小管間隙擴(kuò)大，腎間質(zhì)水腫，集合管也呈現(xiàn)管腔擴(kuò)張、上皮水腫等改變(圖1,2)。

圖1 正常組腎小球、腎小管形態(tài)結(jié)構(gòu)(HE ×400)
Figure 1 Morphology of glomeruli and tubules in control group(HE ×400)

圖2 RIRI腎小球、腎小管形態(tài)改變(HE ×400)
Figurea 2 Morphological changes of glomeruli and tubules in RIRI group(HE ×400)

2.2 2組SCr和BUN水平比較 RIRI組SCr和BUN水平均較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組血清中SCr和BUN水平比較Table 1 Comparison of SCr and BUN level between two groups

2.3 腦組織勻漿內(nèi)MDA、H2O2、EC-SOD mRNA和EC-SOD蛋白的表達(dá) RIRI組腦組織勻漿內(nèi)MDA、H2O2、EC-SOD mRNA和EC-SOD蛋白的表達(dá)均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2,圖3,4。

表2 2組MDA、H2O2和EC-SOD mRNA、蛋白水平表達(dá)比較表2 Comparison of MDA、H2O2、EC-SOD mRNA and protein expression level between two groups

圖3 腦組織EC-SOD mRNA的相對表達(dá)量
Figurea 3 The mRNA expression of EC-SOD in brain

圖4 腦組織EC-SOD蛋白的相對表達(dá)量
Figure 4 The protein expression of EC-SOD in brain

2.4 相關(guān)性分析 RIRI組腦組織MDA含量與EC-SOD mRNA表達(dá)水平和EC-SOD 蛋白表達(dá)水平、腦組織H2O2含量與EC-SOD mRNA表達(dá)水平和EC-SOD 蛋白表達(dá)水平，均呈正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 RIRI組腦組織MDA、H2O2含量與EC-SODmRNA和EC-SOD蛋白的相關(guān)性Table 3 Correlation between the content of MDA,H2O2, the mRNA and protein expression of EC-SOD in brain tissue of RIRI group

3 討 論

腎臟通過對水、離子、葡萄糖、營養(yǎng)物質(zhì)等的重吸收，以及去除代謝產(chǎn)物，在維持血流動力學(xué)、電解質(zhì)、水平衡和機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡穩(wěn)定中具有重要作用。RIRI是很多臨床治療過程中不可避免的事件，如腎臟移植、腎擠壓傷以及部分腎切除等。由于能導(dǎo)致急性腎損傷、腎移植后功能恢復(fù)延遲、急性腎衰竭的發(fā)生，而且具有較高的發(fā)病率和病死率，關(guān)于RIRI的發(fā)病機(jī)制和防治方法研究，已引起高度重視[10-12]。研究表明，到達(dá)腎臟的血液供應(yīng)被突然暫時性阻斷，隨后再重新恢復(fù)其血液供應(yīng)，再灌注階段，被重新充血充氧的腎組織中會有大量ROS產(chǎn)生，使腎臟處于高度氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而啟動有害的細(xì)胞級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡和急性腎衰竭[13]。本研究目的是觀察在腎臟缺血再灌注損傷發(fā)生且處于高度氧化應(yīng)激狀態(tài)時，腦組織是否也處于氧化應(yīng)激狀態(tài)并遭受過氧化損傷？抗氧化酶EC-SOD的表達(dá)如何改變？在此過程中是否發(fā)揮抗氧化作用？首先，本研究采用無損傷血管夾夾閉大鼠左腎動脈，45 min后再重新灌注，建立大鼠RIRI模型。RIRI可導(dǎo)致血中氮代謝產(chǎn)物的積累，如BUN和SCr[1]。本研究結(jié)果與此一致。此外，與對照組相比，RIRI組大鼠的腎小球和腎小管形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變。表明RIRI大鼠腎臟的結(jié)構(gòu)和功能均已受損，RIRI模型是成功的。

在RIRI發(fā)生時，腦組織是否也處于高度氧化應(yīng)激狀態(tài)并遭受過氧化損傷？ROS包括超氧陰離子(O2-)、羥自由基(OH-)和過氧化氫(H2O2)等;其中，H2O2是ROS成員中含量最豐富最穩(wěn)定的形式之一[14-15]。參與炎癥、細(xì)胞功能障礙和細(xì)胞凋亡的發(fā)生，最終導(dǎo)致組織和器官損傷。本研究結(jié)果顯示，RIRI組大鼠腦組織中的H2O2高于對照組，表明在RIRI發(fā)生時，腦組織也出現(xiàn)大量ROS，處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。MDA是脂類物質(zhì)與ROS發(fā)生過氧化反應(yīng)所形成的一種終末代謝產(chǎn)物,其含量的高低能反映脂類物質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的速度和強(qiáng)度,因此MDA常被作為評價過氧化損傷程度的客觀指標(biāo)[16]。腦組織含有豐富的脂類物質(zhì)，故更容易遭受ROS襲擊發(fā)生過氧化損傷。本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，RIRI組大鼠腦組織的MDA含量明顯升高。結(jié)合H2O2檢測結(jié)果表明，在RIRI發(fā)生時，腦組織不僅處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，并且已遭受過氧化損傷。

機(jī)體內(nèi)氧化還原反應(yīng)失衡，可引起ROS在細(xì)胞水平的升高，導(dǎo)致疾病的發(fā)生[17]。EC-SOD是超氧化物歧化酶的家族成員之一。在組織間質(zhì)和細(xì)胞外液(血漿、淋巴、流體和滑膜液)中，EC-SOD能催化超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫和氧氣。它消除了來自細(xì)胞環(huán)境的超氧自由基，防止ROS和它們的衍生物的形成，在維持血管張力、肺功能、一氧化氮代謝，以及在動脈粥樣硬化、糖尿病和關(guān)節(jié)炎等疾病的病理學(xué)中，也起著重要作用[18]。有研究表明，放射線照射后，EC-SOD依靠其抗氧化作用，對于維持認(rèn)知功能和海馬神經(jīng)形成是至關(guān)重要的；EC-SOD在新生兒大腦過度表達(dá)，在對抗高氧誘導(dǎo)的腦損傷中提供了顯著的保護(hù)作用[19]。本研究結(jié)果顯示，在RIRI發(fā)生時，EC-SOD的mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯增強(qiáng)，并且與腦組織MDA、H2O2含量均呈正相關(guān)。從而推測，當(dāng)RIRI發(fā)生后，腦組織內(nèi)產(chǎn)生大量ROS并與脂類物質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致過氧化損傷。為了清除過多的ROS以維持機(jī)體氧化還原平衡，機(jī)體通過上調(diào)抗氧化酶EC-SOD的表達(dá)來清除過多的ROS，保護(hù)腦組織免遭過氧化損傷。

總之，在RIRI發(fā)生時，伴有腦組織處于氧化應(yīng)激狀態(tài)并發(fā)生過氧化損傷，抗氧化酶EC-SOD在清除ROS、防治RIRI誘發(fā)腦組織過氧化損傷中，可能發(fā)揮重要作用，也為防治RIRI所誘發(fā)的腦損傷提供了一條新思路。

[1] Go KL,Lee S,Zendejas I,et al. Mitochondrial Dysfunction and Autophagy in Hepatic Ischemia Reperfusion Injury[J]. Biomed Res Int，2015,2015:1834-1869.

[2] 李愛芝，馬加海.吸入麻醉對大鼠急性腎缺血再灌注損傷的保護(hù)[J].醫(yī)學(xué)動物防制，2009，25(4)：262-263，268.

[3] 霍洪昌,王切,王素玲，等.大鼠腎缺血再灌注損傷模型心肌內(nèi)過氧化酶Ⅲ的表達(dá)變化[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2016,37(10):1165-1169.

[4] Xu YM,Ding GH,Huang J,et al. Tanshinone ⅡA pretreatment attenuates ischemia/reperfusion-induced renal injury[J]. Exp Ther Med,2016,12(4):2741-2746.

[5] Moslemi F,Taheri P,Azimipoor M. Effect of angiotensin Ⅱ type 1 receptor blockade on kidney ischemia reperfusion: a gender related difference[J]. J Renal Inj Prev,2016,5(3):140-143.

[6] Zhao L,Xu L,Tao X,et al. Protective Effect of the Total Flavonoids from Rosa laevigata Michx Fruit on Renal Ischemia Reperfusion Injury through Suppression of Oxidative Stress and Inflammation[J]. Molecules,2016,21(7):1-13.

[7] Abogresha NM,Greish SM,Abdelaziz EZ,et al. Remote effect of kidney ischemia-reperfusion injury on pancreas: role of oxidative stress and mitochondrial apoptosis[J]. Arch Med Sci,2016,12(2):252-262.

[8] Karimi Z,Ketabchi F,Alebrahimdehkordi N. Renal ischemia reperfusion against nephrectomy for induction of acute lung injury in rats[J]. Ren Fail,2016,38(9):1503-1515.

[9] Ota F,Kizuka Y,Kitazume S,et al. N-Glycosylation is essential for the secretion of extracellular superoxide dismutase[J]. FEBS Lett,2016,590(19):3357-3367.

[10] Fu Y,Lin Q,Gong T,et al. Renal targeting triptolide glucosamine conjugate exhibits lower toxicity and superior efficacy in attenuation of ischemia reperfusion renal injury in rats[J]. Acta Pharmacol Sin，2016,37(11):1467-1480.

[11] Jiang BT,Chen QZ,Guo ZH,et al. Ischemic post-conditioning attenuates renal ischemic reperfusion injury via down-regulation of toll-like receptor 4 in diabetic rats[J]. Ren Fail,2016,38(9):1425-1431.

[12] Kaur A,Kaur T,Singh B,et al. Curcumin alleviates ischemia reperfusion induced acute kidney injury through NMDA receptor antagonism in rats[J]. Ren Fail,2016,38(9):1462-1467.

[13] Najafi H,Changizi Ashtiyani S,Sayedzadeh SA,et al. Therapeutic effects of curcumin on the functional disturbances and oxidative stress induced by renalischemia/reperfusion in rats[J]. Avicenna J Phytomed,2015,5(6):576-586.

[14] Kim KS,Lee D,Song CG,et al. Reactive oxygen species activated nanomaterials as theranostic agents[J]. Nanomedicine(Lond)，2015，10(17):2709-2723.

[15] Lina M,Hongfei M,Yunxin X,et al. The mechanism of ROS regulation of antibiotic resistance and antimicrobial lethality[J]. Yi Chuan,2016,38(10):902-909.

[16] Gagua AK,Strelnikov AI,Valkov KS. The value of volatile fatty acids,citrulline and malondialdehyde for diagnosis of suppurative cholangitis in obstructive jaundice and choosing of optimal surgical approach(with commentary)[J]. Khirurgiia(Mosk),2016,(10):41-47.

[17] Lee JH,Jung HK,Han YS,et al. Antioxidant effects of Cirsium setidens extract on oxidative stress in human mesenchymal stem cells[J]. Mol Med Rep,2016,14(4):3777-3784.

[18] Iversen MB,Gottfredsen RH,Larsen UG,et al. Extracellular superoxide dismutase is present in secretory vesicles of human neutrophils and released upon stimulation[J]. Free Radic Biol Med,2016,97:478-488.

[19] Baba A,Kawakami Y,Saito K. Effects of Edaravone on Hippocampal Antioxidants in EL Mice[J]. J Nippon Med Sch,2016,83(3):100-106.

(本文編輯：許卓文)

Expression changes of EC-SOD in the brain of the renal ischemia reperfusion injury in rats

HAO Bing1, WANG Qie2, WANG Su-ling3, WANG Lei2*

(1.DepartmentofUrology,CangzhouCentralHospital,HebeiProvince,Cangzhou061001,China; 2.DepartmentofAnatomy,theSchoolofBasicMedicalSciences,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China； 3.DepartmentofLaboratory,HebeiBloodCenter,Shijiazhuang050071,China)

Objective To observe the expression of extracellular superoxide dismutases(EC-SOD) in renal ischemia reperfusion injury(RIRI) rats and to investigate the role of EC-SOD in the brain oxidative stress response. Methods The male Wistar rat were divided randomly into RIRI group and control group ，6 rats in each group. After the right kidney was removed in RIRI rats, the left renal artery was clamped with a non injured artery clamp. After 45 min, the rats were removed and the blood supply was restored. After 24 hours of reperfusion, the blood, kidney and brain were taken. The left renal artery were only separated, but not cliped in the control group rats. The urea nitrogen(BUN) and serum creatinine(SCr) in the serum blood of two groups were detected by picric acid method and enzyme coupling rate method. The malondialdehyde(MDA)content in the brain tissue of two groups was determined by thiobarbituric acid colorimetric method. the renal morphological change was observed by HE staining. The EC-SOD mRNA and protein expression in brain were evaluated by reverse transcription polymerase chain reaction and western blot. Results Compared with the control group, the BUN and SCr in serum of RIRI group were significantly increased. The content of MDA, H2O2, the relative expression level of EC-SOD and the relative expression level of EC-SOD protein in RIRI group were higher than those in control group. The difference was statistically significant(P<0.05). The content of MDA and H2O2was positively correlated with the expression of EC-SOD mRNA and protein in the brain tissue of RIRI group. Conclusion After the RIRI, oxidative damage in the brain was occured. The increase of EC-SOD expression in the brain of RIRI rats may play an important role in anti oxidative stress.

reperfusion injury; superoxide dismutase; malondialdehyde

2016-11-11；

2016-12-20

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20160088)

郝斌(1981-)，男，河北滄州人,河北省滄州市中心醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事泌尿外科疾病診治研究。

R619.9

A

1007-3205(2017)05-0552-05

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.05.013