閆寶琪張世棟?董書偉王東升那立冬桑夢琪楊洪早嚴作廷?

（1.中國農業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅省新獸藥工程重點實驗室，蘭州730050；2.甘肅農業(yè)大學動物醫(yī)學院，蘭州730070）

百里香酚對山羊子宮內膜上皮細胞的體外毒活性研究

閆寶琪1，張世棟1?，董書偉1，王東升1，那立冬1，2，桑夢琪1，楊洪早1，2，嚴作廷1?

（1.中國農業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所，甘肅省新獸藥工程重點實驗室，蘭州730050；2.甘肅農業(yè)大學動物醫(yī)學院，蘭州730070）

為了探究百里香酚對山羊子宮內膜上皮細胞（goat endometrial epithelial cells，gEECs）的毒性作用，采用不同濃度的百里香酚作用于gEECs后，觀測其對細胞生長曲線，細胞形態(tài)學變化，以及細胞膜結構完整性的影響。結果表明，百里香酚對EECs的毒性作用與其濃度呈劑量依賴效應（y＝－0.008x＋1.2202，R2＝0.9767），即隨著藥物濃度的增加細胞的增殖抑制率增大，藥物對細胞的半數增殖抑制率（IC50）為100μg/mL。當50、100μg/mL的百里香酚作用于EECs時，gEECs的細胞核、細胞漿的形態(tài)均未產生明顯變化，但當150μg/mL的百里香酚作用于gEECs時，細胞膜破裂，細胞死亡；而且藥物濃度≥100μg/mL時細胞LDH的釋放量顯著高于正常細胞組，gEECs細胞膜的完整性受到破壞。百里香酚作用于山羊子宮內膜上皮細胞后呈現一定的毒性作用，且毒性作用和藥物的濃度有關。百里香酚作用于gEECs的安全范圍在0～100μg/m L，研究結果為百里香酚治療奶牛等經濟動物的炎癥性疾病的臨床用藥濃度提供理論依據。

百里香酚；子宮內膜上皮細胞；細胞毒性；膜通透性

子宮內膜炎（Endometritis）是奶牛的常見病之一，多發(fā)生于產后，是病原菌感染子宮內膜引起的炎癥，常導致奶牛屢配不孕［1－2］。該病可造成奶牛生理功能紊亂、產奶量下降，甚至終生不孕而被淘汰，給養(yǎng)殖戶造成嚴重危害，經濟損失巨大。據中國奶牛協會統(tǒng)計，奶牛的繁殖障礙發(fā)生率高于其他牛，而且在不孕的病因中以子宮內膜炎引起的不孕牛所占比例最高［3，4］。臨床上，大量抗生素和激素應用于治療子宮內膜炎，導致耐藥菌株的不斷產生，抗生素殘留，治療效率明顯降低。中草藥具有明顯的抗菌消炎，毒副作用小，增強免疫力，改善血液循環(huán)和增加子宮收縮的作用，所以近十幾年來關于應用中草藥治療子宮內膜炎的研究成為熱點［5－6］。

百里香酚是一種單萜酚類物質，最初從百里草中分離而得名，即5－甲基－2－異丙基苯酚（5－methyl－2－iso－propylpheno1）［7］。研究發(fā)現百里香酚具有廣譜抗菌活性，對多種革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌等均具有抑制作用［8］。Ara?ntxa Aznar等［9］研究發(fā)現將百里香酚、香芹酚和甲基混合后在25℃下能夠有效抑制酵母菌繁殖生長，抑制時間長達21 d。Omran等的研究也發(fā)現，百里香精油對外陰道念珠菌有較強的抗真菌活性，其效果優(yōu)于氟康唑，與1μg/mL的兩性霉素B的抗真菌效果相當［10］。體外實驗表明，百里香酚可以顯著抑制低密度氧化脂蛋白誘導的人THP－1單核細胞促炎性細胞因子TNF－α、 IL－1β、IL－6并促進IL－10的基因和蛋白表達水平，對一些炎癥類疾病如皮炎、胸膜炎、腹膜炎和風濕性關節(jié)炎等均具有抗炎促愈合功能［11－12］。

綜上所述，百里香酚有較好的抑菌抗炎效果，對于一些炎癥性疾病具有較好的應用前景，但應用百里香酚治療奶牛等經濟動物的子宮內膜炎的研究還未見報道。近年來，利用子宮內膜細胞的體外培養(yǎng)檢測子宮生理功能的研究不斷呈現新的進展，同時利用LPS刺激子宮內膜上皮細胞建立的炎癥模型檢測炎癥信號通路以及中草藥抗炎機制的報道也在不斷增加［13－14］。實驗中，篩選出中草藥作用于細胞無毒性作用的濃度是在分子細胞水平上檢測中草藥抗炎作用的前提條件。因此，試驗采用山羊子宮內膜上皮細胞（gEECS）作為材料，研究百里香酚對其的毒性作用，以期為百里香酚治療奶牛子宮內膜炎的臨床用藥研究提供理論依據。

1 材 料

1.1.1 細胞 山羊子宮內膜上皮細胞系（EECs），由西北農林科技大學動物醫(yī)學院靳亞平教授惠贈。

1.1.2 主要儀器及設備 Memmert CO2培養(yǎng)箱；HeaL ForceB2型生物安全柜；SW－CJ－1CU型超凈工作臺；倒置顯微鏡，Leica DMI6000B；MDC M2e型多功能酶標儀；細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板為美國eppendorf產品。

1.1.3 藥品及試劑 百里香酚（Thymol，B21153，100 mg），上海源葉生物科技有限公司（HPLC≥98%），用含0.05%的DMSO將其稀釋到所需要的濃度；DMEM/F12培養(yǎng)基為Gibco公司產品；胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）為杭州四季青公司產品；0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2～7.4）；MTT為Sigma公司產品以0.01 mol/L PBS溶解至5 mg/mL；瑞氏、姬姆薩染料為Solarbio公司產品；LDH檢測試劑盒（貨號A020－2）為南京建成生物工程研究所有限公司產品。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 從液氮中取出永生化山羊子宮內膜上皮細胞（EECs），37℃快速復蘇，低速離心后添加含10%FBS、100 U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。

1.2.2 細胞分組與處理 取100μL濃度為5× 104個/mL的細胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板，24 h后棄去舊培養(yǎng)基，加入含不同濃度的百里香酚的完全培養(yǎng)液100μL，百里香酚的終濃度分別為：0、10、20、40、60、80、100、120、150μg/m L，每個濃度設置8個復孔。

1.2.3 MTT檢測百里香酚對細胞的增殖作用 繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，觀察細胞增殖情況。棄去舊培養(yǎng)基，加入5 mg/mL的MTT 20μL，孵育4 h。棄去多余的MTT，每孔加入200μL二甲基亞砜，低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解后在酶標儀上以570 nm檢測各孔OD值，并以不含細胞的孔調零，記錄各孔OD值，計算細胞的半數增殖抑制率（IC50）［15－16］。以藥物濃度為橫坐標，細胞相對存活率為縱坐標，繪制曲線。

A0：藥物處理前OD值；A1：對照組OD值；A2：藥物處理48 h后OD值。

1.2.4 百里香酚對EECS的形態(tài)的影響 取1 mL濃度為5×104個/mL的細胞懸液接種于12孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后棄去舊培養(yǎng)基，加入含百里香酚終濃度為0、100、150μg/mL的完全培養(yǎng)液1 m L，每個濃度設置4個復孔。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細胞（1200 r/min，5 min），加入500μL的無菌PBS重懸細胞，涂片，晾干，放入預冷的甲醇溶液中固定15～30 min。接著滴加2～3滴瑞氏染液，染色2～3 min后滴加等量的吉姆薩染液，染色10 min。每張涂片計數100個細胞，于顯微鏡下觀察細胞形態(tài)［17－19］。

1.2.5 EECs細胞膜完整性的檢測 取0.5 mL濃度約為5×104個/mL的細胞懸液接種于24孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后，棄去舊培養(yǎng)基。分別加入含百里香酚終濃度為0、10、20、40、60、80、100、120、150μg/mL的完全培養(yǎng)液0.5 mL，每組設三個重復孔。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細胞上清液，6600 r/min，離心10 min，嚴格按照LDH檢測試劑盒說明書操作，檢測各組上清液中LDH的含量。

1.2.6 統(tǒng)計學方法 應用SAS 9.30軟件分析數據，Excel繪圖軟件進行繪圖。結果以平均值±標準差表示，實驗結果采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學分析。

2 結果與分析

2.1 百里香酚對EECs增殖的影響 結果發(fā)現，當百里香酚的濃度處在10～150μg/mL時，對EECs有增殖抑制作用。隨著藥物濃度的升高對細胞的抑制作用越明顯，且細胞的增殖抑殖率與藥物的濃度呈一定的線性關系（y＝－0.008x＋1.2202，R2＝0.9767，如圖1）。由此可計算，當細胞的增殖抑制率為0.5時（IC50），百里香酚的作用濃度為100μg/mL。

2.2 百里香酚對EECs的細胞形態(tài)影響 正常的山羊子宮內膜上皮細胞多數為梭形，少數呈三角形，核圓居中，培養(yǎng)24 h后，細胞交織成網狀。細胞貼壁良好，體積較大、折光性好，形態(tài)大小均勻一致（如圖3A，大圖為100×，小圖為400×）；經100μg/mL百里香酚處理48 h后，EECs的密度增大，且在倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)良好（如圖3B，大圖為100×，小圖為400×）；由圖C可以看出當百里香酚濃度達到150μg/mL時，作用相同的時間細胞出現死亡現象，細胞結構遭到破壞，細胞膜破裂，細胞核暴露，視野內有大量的細胞碎片存在（如圖3C，大圖為100×，小圖為400×）。

2.3 百里香酚對EECs的細胞核形態(tài)影響

瑞氏－姬姆薩染色使細胞核呈深淺不同的紫紅色，胞漿呈淺藍色。染色結果顯示正常組和經100μg/m L的百里香酚作用48 h的細胞的胞質和胞核界限清晰，胞核完整，胞漿均勻，細胞邊緣完整，視野內未出現死亡細胞以及形態(tài)異常的細胞。（如圖4a，4b，大圖為100×，小圖為400×）。當百里香酚的濃度達到150μg/m L時，染色結果顯示大部分細胞的細胞膜完整性遭到破壞。與正常細胞組相比，視野內少數細胞其細胞膜著色變淺，且細胞核多位于細胞膜邊緣；大多數細胞的細胞膜完全消失，視野內只有紫紅色的細胞核存在，但大多數細胞核結構完整，只有少量的細胞核發(fā)生破碎裂解。

圖1 0～150μg/m L對EECs的促增殖作用

2.4 百里香酚對EECs細胞膜完整性的影響

測定結果顯示：隨著百里香酚濃度的升高，細胞培養(yǎng)液中LDH的含量有升高的趨勢，但不存在規(guī)律性增長。且與對照組相比，當百里香酚的濃度大于100μg/mL時細胞培養(yǎng)液中LDH的含量顯著升高（P＜0.01）；與對照組相比10、20、40、60、80、100μg/mL的百里香酚作用細胞后培養(yǎng)液中LDH的含量雖然升高，但不存在顯著性差異（P＞0.05），如圖4所示。

3 討 論

研究報道，通過陰道給藥治療婦科炎癥具有可避免口服給藥的首關效應和血藥濃度的谷峰現象，避免藥物對于胃腸道的刺激，避免注射給藥的疼痛與心理恐懼，通過“First uterine－pass effect”能夠將藥物靶向傳遞到子宮內膜組織，因此，生物利用度高、藥效顯著［20］。百里香酚具有抗炎、調節(jié)免疫力、抗氧化、抗癌等多種生物活性，在臨床治療中具有較好的應用前景，在將來的研究中百里香酚可以被開發(fā)成一種新型的子宮灌注劑，采用陰道給藥治療奶牛等經濟動物的子宮內膜炎。那么，探明百里香酚對子宮內膜上皮細胞的刺激作用以及毒性作用是闡明其臨床用藥安全性的必要前提條件。所以試驗開展百里香酚對子宮內膜上皮細胞體外的毒活性研究，為百里香酚治療奶牛等經濟動物子宮內膜炎的臨床應用提供理論依據。

活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍紫色結晶物甲臜，并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。甲臜被溶解后所測得的光密度值越小，說明細胞存活率越低［21－22］。本研究中MTT的結果表明，百里香酚對EECs的增殖抑制作用與其濃度成一定的關系，當濃度為100μg/mL時達到EECs的半數增值抑制率，因此可選用0～100μg/mL的百里香酚作用于EECs進行抗炎效果的研究。而在梁德潔［23］用百里香酚對LPS誘發(fā)的乳腺炎小鼠的保護作用及作用機制研究中選取百里香酚對小鼠乳腺上皮細胞無毒性影響的最大濃度為40μg/mL。這可能與百里香酚作用的細胞種類不同，細胞接種數量不同，實驗操作不同等因素有關。

乳酸脫氫酶（LDH）是活細胞胞質內廣泛存在的酶之一，正常情況下LDH不能透過細胞膜，但當細胞膜受損或細胞死亡導致細胞膜通透性改變時，則會釋放到培養(yǎng)液中，釋放的LDH與細胞膜的損傷程度或細胞死亡數成正比［24］。檢測培養(yǎng)液中LDH的含量可判斷細胞膜的受損程度。本研究結果顯示，當百里香酚的濃度≥100μg/mL時細胞釋放的LDH含量顯著升高，說明該濃度的百里香酚可顯著引起細胞膜通透性增大。此外，細胞生長狀態(tài)和瑞氏－姬姆薩染色結果顯示，150μg/mL的百里香酚對EECs的細胞膜能造成嚴重損傷，細胞膜破裂，細胞死亡。這一實驗結果和之前的研究報道類似，Nostro等［25］研究也報道百里香酚可以抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的生物膜形成。百里香酚可以通過影響細菌胞內pH穩(wěn)態(tài)和無機離子平衡，從而破壞生物膜完整性對白色念珠菌產生抑制作用。進一步的研究表明，百里香酚可以增加小鼠平滑肌細胞胞膜去極化，導致肌質網Ca2＋離子釋放，影響細胞膜的通透性［26－28］。由此可見，百里香酚能夠破壞細胞膜的完整性，而且這可能與藥物被細胞膜的轉運吸收有關。

圖2 不同濃度百里香酚作用48 h后對EECs生長狀態(tài)的影響（大圖為100×；小圖為400×）

圖3 不同濃度百里香酚作用48 h后對EECs形態(tài)的影響（大圖為100×；小圖為400×）

圖4 不同濃度的百里香酚對EECs乳酸脫氫酶釋放的影響

Zu等［26］人研究證實，由于百里香精油對人類癌癥細胞具有較強的細胞毒性，因此百里香精油也具有一定的抗癌作用。其對PC－3、A549和MCF－7腫瘤細胞株50%抑制濃度（IC50）分別為0.010%（V/V）、0.011%（V/V）和0.030%（V/V）。此外香芹酚和百里香酚作為目前應用最為廣泛的重要香料之一，被廣泛應用于飼料添加以及一些口腔衛(wèi)生品和洗滌物品［27］。

4 結 論

百里香酚對山羊子宮內膜上皮細胞的安全劑量為≤100μg/mL，該劑量范圍內藥物對細胞活力和形態(tài)結構無顯著影響；大于該劑量的百里香酚可顯著增大子宮內膜上皮細胞的膜通透性，產生細胞毒性作用。綜上所述，百里香酚對細胞的毒性作用的研究為其治療奶牛等經濟動物的炎癥性疾病，癌細胞的抑制作用，以及作為食品添加劑的安全使用劑量提供一定的理論依據和參考價值。

［1］Madoz L V，GiuliodoriMJ，Jaureguiberry M，etal.The relation?ship between endometrial cytology during estrous cycle and cutoff points for the diagnosis of subclinical endometritis in grazing dairy cows［J］.JDairy Sci，2013，96（7）：4333－4339.

［2］Polat B，Cengiz M，Cannazik O，et al.Endometrial echotexture variables in postpartum cows with subclinical endometritis［J］.AnimReprod Sci，2015，155：50－55.

［3］辛任升，劉宇，郝寶成，等.苦豆子及其復方藥物對奶牛子宮內膜炎5種致病菌的體外抑菌活性研究［J］.中國獸醫(yī)學報，2015，35（04）：636－639.

［4］戴浩楠，石慧，鄭明學，等.雁門關地區(qū)奶牛子宮內膜炎病原菌分離鑒定及其致病性［J］.中國獸醫(yī)學報，2016，36（04）：646－649.

［5］鄺曉嬌.丹參水提物對LPS誘導子宮內膜上皮細胞炎癥的抗炎機制研究［D］.中國農業(yè)科學，2014.

［6］何斌，陳潔，金爾光，等.中草藥防治奶牛乳房炎的研究進展［J］.2016，50（5）：60－64.

［7］仇昆倫，毛海舫，歐文華，等.百里香酚的研究進展［J］.香料香精化妝品，2008，4（02）：28－32.

［8］王娣，謝海偉，曹珂珂，等.麝香草酚抑菌活性及其影響因素研究［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（14）：96－98.

［9］Arantxa A P，Fernández S，Paula MP，et al.Antimicrobial activity of nisin，thymol carvacrol and cymene against growth of Candida lusitaniae［J］.Food Science and Technology，2013，29（10）：1177.

［10］Omran SM，Esmaeilzadeh S，Rahmani Z.Laboratory study of an?ticandidal activity of thyme，pennyroyal and lemon essential oils by micro dilution method［J］.Jundishapur JMicrobiol，2010，3（4）：161－167.

［11］Kavoosi G，Telxeira D A，SILVA JA，Saharkhiz MJ.Inhibitory effects of Zatariamultiflora essential oil and itsmain components on nitric oxide and hydrogen peroxide production in lipopolysaccharide－stimulated macrophages［J］.Journal of Phar?macy and Pharmacology，2012，64（10）：1491－1500.

［12］Dhaneshwar S，Patel V，Patil D，et al.Studies on synthesis，stability，release and pharmacodynamic profile of a novel diacerein－thymol prodrug［J］.Bioorganic＆medicinal chemistry letters，2013，23（1）；55－61.

［13］Madoz L V，Giuliodori MJ，Jaureguiberry M，et al.The relationship between endometrial cytology during estrous cycle and cutoff points for the diagnosis of subclinicalendometritis in grazing dairy cows［J］.JDairy Sci，2013，96（7）：4333－4339.

［14］Polat B，Cengiz M，Cannazik O，et al.Endometrial echotexture variables in postpartum cows with subclinical endometritis［J］.AnimReprod Sci，2015，155：50－55.

［15］辛任升，劉宇，郝寶成，等.苦豆子及其復方藥物對奶牛子宮內膜炎5種致病菌的體外抑菌活性研究［J］.中國獸醫(yī)學報，2015，35（04）：636－639.

［16］戴浩楠，石慧，鄭明學，等.雁門關地區(qū)奶牛子宮內膜炎病原菌分離鑒定及其致病性［J］.中國獸醫(yī)學報，2016，36（04）：646－649.

［17］Fischer，C，Drillich，M，Odau，S，et al.Selected pro－inflam?matory factor transcripts in bovine endometrial epithelial cells are regulated during the oestrous cycle and elevated in case of sub?clinical or clinical endometritis［J］.Reprod Fertil Dev，2010，22（5）：818－829.

［18］Swangchan－Uthai，T，Lavender，C R，Cheng，Z，et al.Time course of defensemechanisms in bovine endometrium in response to lipopolysacchaaride［J］.Biol Reprod，2012，87（6）：13.

［19］楊洋，吳國娟，李培峰，等.脂質體瞬時轉染siRNA抑制腎小管上皮細胞去乙?；鞍酌?的表達［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2012，39（08）：4－9.

［20］趙世云，趙新新，蘇華荔，等.豬外周血T淋巴細胞增殖反應MTT檢測方法的建立［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2010，37（12）：35－38.

［21］Ding L，Liu B，Qi L，et al.Anti－proliferation，cell cycle arrest and apoptosis induced by a natural xanthone from Gentianopsis?paludosa Ma，in human promyelocytic leukemia cell line HL－60cells［J］.Toxicology in vitro，2009，23（3）：408－417.

［22］劉新利.NF－κB抑制劑和JNK抑制劑對白血病細胞的協同殺傷作用［D］.上海師范大學，2014.

［23］孟凡，靳宏輝.采用析因設計研究瑞氏－吉姆薩染色法的影響因素［J］.醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2015，36（08）：124－126.

［24］Angius F，Floris A.Liposomes and MTT cell viability assay：An incompatible affair［J］.Toxicology in Vitro，2015，29（2）：314－319.

［25］Stockert JC，Blázquez－Castro A，Ca?ete M，etal.MTT assay for cell viability：Intracellular localization of the formazan product is in lipid droplets［J］.ActaHistochemica，2012，114（8）：785－796.

［26］彭仕琪.碘氧鉍納米材料對人類皮膚角質細胞的毒性研究［D］.太原理工大學，2015.

［27］梁德潔.百里香酚對LPS誘發(fā)的乳腺炎小鼠的保護作用及作用機制研究［D］.吉林大學，2014.

［28］李偉澤，付麗娜，趙寧，等.黃藤素柔性納米脂質體的制備及體外透黏膜給藥研究［J］.中國藥學雜志，2015，50（24）：2139－2145.

［29］Nostro A，Roccaro A S，Bisignano G，et al.Effects of oregano，carvacrol and thymol on Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis biofilms［J］.Journal of medical microbiology，2007，56（4）：519－523.

［30］Zu Y G，Yu H M，Liang L，et al.Activities of ten essential oils towards propionibacterium acnes and PC－3，A－549 and MCF－7 cancer cells［J］.Molecules，2010，15：3200－3210.

［31］董茂峰，韓薇，白冰，等.氣相色譜法測定飼料香味劑中香芹酚和百里香酚的含量［J］.上海農業(yè)學報.2015，31（03）：79－81.

（編輯：陳希）

The Cytotoxic Effect of Thymol on Goat Endometrial Epithelial Cells

YAN Bao－qi1，ZHANG Shi－dong1?，DONG Shu－wei1，WANG Dong－sheng1，NA Li－dong1，2，SANG Meng－qi1，YANG Hong－zao1，2，YAN Zuo－ting1?
（1.Lanzhou Institute ofAnimal Husbandry and Pharmaceutical Sciences，Chinese Academy ofAgricultural Sciences，Lanzhou730050，China；2.College of Veterinary Medicine，Gansu Agricultural University，Lanzhou730070，China）

In order to explore the cytotoxicity of thymol on goat endometrial epithelial cells（gEECs），gEECs was treated by different concentrations of thymol.And the cell growth curve，the changes of cellmorphology，the integrity of the cell membrane was detected.The results showed that thymol has a role in promoting proliferation of the gEECs.There was a dose－dependent effect between thymol toxicity to gEECs and concentrations（y＝－0.008x＋1.2202，R2＝0.9767），The inhibitory rate of cell proliferation increased withthe increasing of the drug concentration；And 50%inhibitory rate of proliferation（IC50）of this drug on EECs is 100μg/mL.When the 50 and 100 g/mL of thymol stimulated gEECs，the nuclearmorphology and the cytoplasm of the gEECs cells didn＇t change significantly.Butwhen 150 g/mL thymol treated gEECs，cell membrane rupture and cellwould die；When the concentration wasmore than 100 g/m L，the integrity of cell membrane can be damaged，promoting the release of LDH significantly compared with normal cells group.In summary，there was a certain toxicity of thymol on goat endometrial epithelial cells，and the toxicity related to concentration.The safe concentration of thymol is in the range of 0～100 g/m L.Which provided a theoretical basis not only for the clinical treatment on the inflammatory diseases of cows and other economic animal but also for the relevant experiments of thymol at themolecular level.

thymol；endometrial epithelial cells；cytotoxicity；membrane permeability

2016－10－10

A

1002－1280（2017）04－0035－07

S859.79

“十二五”國家科技支撐計劃重點課題（2012BAD12B03）；中國農業(yè)科學院科技創(chuàng)新工程項目（CAAS－ASTIP－2014－LIHPS－03）；甘肅省自然科學基（1506RJYA146）

閆寶琪，碩士，從事臨床獸醫(yī)方向研究。

嚴作廷，E－mail：yanzuoting＠caas.cn；張世棟，E－mail：zhangshidong＠caas.cn