楊雪芳，張洋洋，張瓊姝，王斌，郭海利，張小民

（1.山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

中國(guó)沙棘不同器官蘆丁含量的比較

楊雪芳1，張洋洋1，張瓊姝1，王斌1，郭海利2，張小民1

（1.山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)中蘆丁的含量進(jìn)行了測(cè)定及比較。所用色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.5%磷酸（33∶67），檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。結(jié)果表明，中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)中蘆丁的含量分別為0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g。研究結(jié)果可為沙棘蘆丁的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用提供理論指導(dǎo)。

中國(guó)沙棘；高效液相色譜法；蘆丁含量；不同器官

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）又名醋柳、酸刺、酸溜溜等，為胡頹子科沙棘屬落葉灌木或小喬木。我國(guó)沙棘資源豐富，素有“沙棘王國(guó)”之稱[1-3]。沙棘屬植物在我國(guó)分布有5個(gè)種（柳葉沙棘、江孜沙棘、肋果沙棘、西藏沙棘、沙棘）和屬于沙棘種的4個(gè)亞種（中國(guó)沙棘、云南沙棘、中亞沙棘、蒙古沙棘）[4]。其中，中國(guó)沙棘亞種（H.rhamnoid L.subsp. sinens Rousi）在我國(guó)分布最廣，山西省分布的野生沙棘全部為中國(guó)沙棘[5-6]。

蘆丁是沙棘黃酮中重要的生物活性成分，具有清除自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、舒張血管等作用[7]，是一種天然的抗氧化劑[8]，對(duì)于沙棘的開(kāi)發(fā)和利用意義重大。王軍憲等[9]通過(guò)分光光度計(jì)對(duì)中國(guó)沙棘不同部位總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定；李春英等[10]通過(guò)分光光度計(jì)對(duì)沙棘不同部位總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定及比較；謝久祥等[11]通過(guò)分光光度計(jì)對(duì)青海沙棘不同部位總黃酮含量進(jìn)行了比較研究。通過(guò)前人研究發(fā)現(xiàn)，沙棘的果實(shí)、種子、葉、莖等各部器官中都含有豐富的營(yíng)養(yǎng)及多種生物活性成分，并發(fā)現(xiàn)它有多方面經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)價(jià)值，廣泛引起了人們的關(guān)注。

由于分光光度計(jì)不能準(zhǔn)確測(cè)定黃酮含量，故本試驗(yàn)首次選用高效液相色譜法測(cè)定中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)這4個(gè)沙棘器官中蘆丁的含量，旨在為沙棘的有效開(kāi)發(fā)和利用提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料為2015年10月從山西省晉中市祁縣來(lái)遠(yuǎn)鎮(zhèn)唐河底村灘地采集的中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)，經(jīng)烘干后備用。

1.2 儀器

島津SPD-15C高效液相色譜儀（日本，島津公司）；N-3000色譜工作站（浙江大學(xué)）；BG-01超聲波清洗機(jī)（廣州邦潔超聲波設(shè)備有限公司）；FA1604N電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；HealForce SMART-N超純水機(jī)（上?？道追治鰞x器有限公司）。

1.3 試劑

蘆丁對(duì)照品購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)；甲醇為色譜純，水為超純水；其他試劑均為分析純。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件色譜柱為DiamonsilC18柱（150mm× 4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫是30℃。進(jìn)樣量20 μL，進(jìn)樣前經(jīng)0.22 μm的針頭過(guò)濾器過(guò)濾。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品31.25 mg，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度線，待標(biāo)準(zhǔn)品溶解后，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。1.4.2.2供試樣品的配制分別稱取沙棘根、莖、葉、果實(shí)粉末各5 g，置50 mL具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入甲醇50 mL，稱質(zhì)量，超聲波輔助提取40 min（功率80 W，頻率40 kHz），待其冷卻至室溫，再稱其質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液；再經(jīng)0.22 μm有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾，取濾液，即得供試樣品。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁對(duì)照品的HPLC分析

在1.4.1色譜條件下得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖，如圖1所示。

2.2 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液1，5，10，15，20 μL。在1.4.1色譜條件下，分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。以蘆丁的進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，得到回歸方程為：Y＝1.0× 106X，R2＝0.996 2（n＝5）。結(jié)果表明，蘆丁對(duì)照品進(jìn)樣量在0.25～5.00 μg時(shí)，蘆丁進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取1.25 μg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，進(jìn)樣，重復(fù)5次。結(jié)果表明，蘆丁峰面積的RSD為1.37%（n＝5），精密度較好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取中國(guó)沙棘葉供試樣品，分別于0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣，在1.4.1色譜條件下測(cè)定，結(jié)果表明，蘆丁峰面積的RSD為1.12%（n＝6），表明中國(guó)沙棘供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取中國(guó)沙棘葉供試樣品5份，每份約5 g，精密稱量，按1.4.2.2方法制備樣品溶液，在1.4.1色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，RSD為1.28%，表明重現(xiàn)性良好。

2.6 加樣回收試驗(yàn)

精密稱量已知含量的供試品5份，每份約5 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，分別精密加入1 mL質(zhì)量濃度為1.25 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液，按照1.4.2.2供試品溶液的制備方案制備成5份供試品溶液，在1.4.1色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表1所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)中測(cè)定的蘆丁含量的加樣回收率符合要求。

表1 沙棘葉蘆丁回收率測(cè)定結(jié)果

2.7 樣品含量測(cè)定

取中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)在1.4.2.2的方法下制備好供試樣品，在1.4.1色譜條件下，分別進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，計(jì)算樣品中蘆丁的含量。

由表2可知，中國(guó)沙棘根、莖、葉和果實(shí)中所含的蘆丁含量不同，依次為0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g?？梢缘贸?，沙棘葉中蘆丁含量最高，明顯高于根、莖、葉中的蘆丁含量；果實(shí)中的蘆丁含量最低；沙棘根中的蘆丁含量略高于沙棘果實(shí)中的蘆丁含量；沙棘莖中的蘆丁含量略高于根中的蘆丁含量。

表2 中國(guó)沙棘不同部位蘆丁含量mg/g

3 討論

本試驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)不同器官中蘆丁的含量。用50%甲醇在超聲波輔助提取下提取，濾液經(jīng)0.22 μm有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾后，利用反向高效液相色譜法測(cè)定沙棘不同器官蘆丁的含量。結(jié)果表明，蘆丁進(jìn)樣量在0.25～5.00 μg，與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

中國(guó)沙棘根、莖、葉、果實(shí)中蘆丁含量分別為0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g，野生中國(guó)沙棘蘆丁含量大小依次為葉＞莖＞根＞果實(shí)。趙文娟等[12]研究結(jié)果表明，吳起野生沙棘中總黃酮含量沙棘果實(shí)＞沙棘葉＞沙棘枝桿，與本研究結(jié)果有差異，可能是因?yàn)樗脺y(cè)定方法以及沙棘植物所處的地理位置、氣候環(huán)境等因素存在差異。而謝久祥等[11]研究表明，葉中總黃酮含量遠(yuǎn)高于根和莖，與本研究結(jié)果相符。沙棘葉所含蘆丁含量最高，因此，可以大力對(duì)沙棘葉進(jìn)行開(kāi)發(fā)和產(chǎn)品加工，擴(kuò)大沙棘葉資源的有效利用。

山西省的野生沙棘種植面積約占全國(guó)的1/2，位居首位[13]，中國(guó)沙棘資源豐富，大力開(kāi)發(fā)野生沙棘可以帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益。目前，對(duì)沙棘的開(kāi)發(fā)和利用主要是針對(duì)沙棘果，其產(chǎn)品有沙棘汁、沙棘果油、沙棘果醋、沙棘化妝品等，而對(duì)沙棘葉開(kāi)發(fā)和利用的報(bào)道較少，其產(chǎn)品只有沙棘葉茶[14-15]。根據(jù)前人的研究來(lái)看，沙棘葉除蘆丁含量較高外，還含有科羅索酸等多種生物活性物質(zhì)[16-18]，有較為廣闊的開(kāi)發(fā)空間，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)等產(chǎn)品加工中。

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Comparison of Rutin Contents in Different Organs of Chinese Seabuckthorn

YANGXuefang1，ZHANGYangyang1，ZHANGQiongshu1，WANGBin1，GUOHaili2，ZHANGXiaomin1
（1.College ofLife Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China；2.Shanxi Jinkehai Biological TechnologyCo.，Ltd.，Taiyuan 030006，China）

The contents of rutin in the roots,stems,leaves and fruits of Chinese seabuckthorn were determined by HPLC.The chromatographic column was Diamonsil C18column（150 mm×4.6 mm,5 μm）.The mobile phase consisted of methanol-0.5% phosphoric acid（33∶67）,and the detection wavelength was 254 nm.The results showed that the contents ofrutin in roots,stems,leaves and fruits were 0.132 1,0.216 3,0.930 2,0.127 0 mg/g,respectively.It will provide theoretical guidance for the further development and utilization ofrutin ofseabuckthorn.

Chinese seabuckthorn;HPLC；rutin content;different organs

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.12

S793.6

：A

：1002-2481（2017）05-0722-03

2016-11-29

楊雪芳（1992-），女，山西大同人，在讀碩士，研究方向：植物化學(xué)與藥理。張小民為通信作者。