李 峰，沈業(yè)壽，陳秀明

(1.皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽 六安 237005；2.安徽省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230039)

大別山區(qū)金櫻子多糖的抗衰老作用研究

李 峰1，沈業(yè)壽2，陳秀明1

(1.皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽 六安 237005；2.安徽省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230039)

通過建立D-半乳糖致衰老的小鼠，對大別山區(qū)金櫻子多糖是否有抗衰老作用進(jìn)行初探，方法是測定胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和小鼠血清、肝和腦組織中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)，實(shí)驗(yàn)表明，大別山區(qū)金櫻子多糖可以使衰老模型實(shí)驗(yàn)小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著增加，顯著降低MDA、NO含量并顯著提高衰老小鼠SOD、GSH-Px活力，并表現(xiàn)良好劑量依賴關(guān)系。結(jié)果表明了大別山區(qū)金櫻子多糖可以提高機(jī)體抗氧化能力及直接清除自由基等來發(fā)揮其延緩衰老作用。

金櫻子；多糖；抗衰老；D-半乳糖

金櫻子(Rosa laevigata Michx)是薔薇科薔薇屬的植物金櫻子的果實(shí)，始載于《蜀本草》，俗稱山石榴、刺梨子、糖罐子等，在我國分布廣泛，安徽省的大別山區(qū)也有生產(chǎn)。其味酸、甘、澀，性平、無毒。主要用于遺精滑精，遺尿尿頻，崩漏帶下，久瀉久痢?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，金櫻子具有調(diào)節(jié)免疫、降糖降脂、抗炎抗菌等藥理作用[1](P2096-2097)，其有效成分主要為黃酮、三萜、多糖等[2-3]。本研究初探大別山區(qū)金櫻子多糖是否具有抗衰老作用和可能作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料和試劑

大別山區(qū)金櫻子多糖(實(shí)驗(yàn)室提取)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)試劑盒，南京建成生物工程研究所。D-半乳糖(用時(shí)配制溶液)，上海試劑二廠。其他試劑(實(shí)驗(yàn)中使用的)為分析純。

昆明種健康小鼠，安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買，雌雄各半，7～8周齡，小鼠的質(zhì)量是18～22 g，飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)化房，動(dòng)物合格證號(hào)是皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)第01號(hào)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與給藥[4]

在喂養(yǎng)50只昆明實(shí)驗(yàn)小鼠3 d后，隨機(jī)進(jìn)行分成5組，每組有10只小鼠，正常對照組、模型組、大別山區(qū)金櫻子多糖低、中、高劑量組。在實(shí)驗(yàn)中室溫維持在20～25 ℃。每個(gè)組(正常對照組除外)實(shí)驗(yàn)小鼠按120 mg/kg/天，進(jìn)行頸部皮下注射D-半乳糖，正常對照組實(shí)驗(yàn)小鼠皮下注射生理鹽水。連續(xù)進(jìn)行皮下注射 D-半乳糖60 d，正常對照組和模型組的實(shí)驗(yàn)小鼠分別灌胃生理鹽水，大別山區(qū)金櫻子多糖組高、中、低劑量組，則按每天溶液灌胃分別為400 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg。

1.2.2 指標(biāo)測定和胸腺(脾臟)指數(shù)測定

進(jìn)行稱實(shí)驗(yàn)小鼠體重，從實(shí)驗(yàn)小鼠的眼眶里取血，分離取血清，快速取小鼠的肝臟、腦，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干，然后取肝、腦的質(zhì)量后，進(jìn)行粉碎，加定量生理鹽水制成5%肝臟、腦組織勻漿。同時(shí)摘除小鼠胸腺、脾臟，用生理鹽水洗凈，來計(jì)算臟器指數(shù)，胸腺(脾臟)指數(shù)=胸腺(脾臟) / 小鼠。SOD、MDA、NO、GSH-Px的測定操作，按照說明書來做，測定蛋白質(zhì)含量用考馬斯亮藍(lán)方法。

1.3 處理數(shù)據(jù)

2 結(jié)果

2.1 金櫻子多糖對體重和胸腺、脾臟指數(shù)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組與正常組小鼠相比較胸腺、脾臟指數(shù)下降顯著，與模型組比，金櫻子多糖中、高劑量組對小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的影響差異顯著(P<0.05)。與正常組相比較，模型組體重的減輕差異極顯著(P<0.01)，與模型組小鼠相比較，金櫻子多糖中、高劑量組差異顯著(P<0.05)，低劑量組差異不顯著。

表1 金櫻子多糖對小鼠體重和胸腺、脾臟指數(shù)影響±s，n=10)

注：**P<0.01，*P<0.05，與正常組相比較；▲▲P<0.01，▲P<0.05，與模型組相比。

2.2 金櫻子多糖對血清、肝組織中SOD和MDA的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比較，模型組SOD活力、MDA含量差異極顯著(P<0.01)。與模型組相比，金櫻子多糖高劑量組小鼠血清、肝臟中的SOD活力差異極顯著(P<0.01)。金櫻子多糖中、高劑量組MDA的含量都差異極顯著(P<0.01)，這表明金櫻子多糖可以抑制SOD活力下降和MDA含量上升。

表2 對血清、肝組織中SOD和MDA的影響

注：**P<0.01，*P<0.05，與正常組相比較；▲▲P<0.01，▲P<0.05，與模型組相比。

2.3 金櫻子多糖對腦組織SOD、GSH-Px、MDA和NO的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比較，模型組小鼠腦組織中的SOD、GSH-Px活力差異極顯著(P<0.01)，MDA、NO含量明顯升高(P<0.01)，與模型組比較，金櫻子多糖高劑量組腦組織SOD差異極顯著(P<0.01)。金櫻子多糖高劑量組GSH-Px活力及MDA、NO的含量有差異顯著(P<0.05)。

表3 對腦組織中SOD、GSH-Px、MDA和NO的影響

注：**P<0.01，*P<0.05，與正常組相比較；▲▲P<0.01，▲P<0.05，與模型組相比。

3 討論

研究表明，自由基與生物體的衰老關(guān)系密切，多余自由基在體內(nèi)滯留是導(dǎo)致生物體衰老的原因。當(dāng)今，增進(jìn)生物體健康,延緩生物體老化是各國人民所希望的，故自由基清除劑研制和開發(fā)受到各國家的重視,隨著年齡的上升，由于生物體內(nèi)抗氧化酶活性的降低，清除自由基劑能力自然下降，這樣造成集聚過多自由基，多余的自由基就會(huì)攻擊體內(nèi)的生物體的細(xì)胞內(nèi)生物大分子，正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)和機(jī)能遭到自由基的破壞，使生物體組織器官容易受損，從而加速生物體衰老[5-6]。

血清和組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量均是反映生物體清除自由基能力的指標(biāo)。SOD和GSH-Px是生物體內(nèi)清除自由基重要的抗氧化酶，SOD的作用在于阻斷自由基的一級(jí)反應(yīng)，而減少活性氧的生成；GSH-Px能夠保護(hù)生物膜免受損害，維持細(xì)胞的正常功能；MDA、NO含量可以反映了生物體細(xì)胞受自由基攻擊的程度[7-9]；研究表明，大別山區(qū)金櫻子多糖可以顯著降低MDA和NO含量，提高衰老小鼠SOD和GSH-Px活力，這表明了大別山區(qū)金櫻子多糖可通過清除生物體內(nèi)自由基，抑制生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化，來增加生物體防御能力。研究也表明，大別山區(qū)金櫻子多糖可以使胸腺、脾臟指數(shù)增加，為大別山區(qū)金櫻子多糖進(jìn)一步加工成抗衰老方面保健品提供了一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]李時(shí)珍.本草綱目(下冊)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1978.

[2]周恩紅，李峰.超聲提取法測定大別山區(qū)金櫻子多糖的含量[J].廣州化工，2016，44(7)：67-69.

[3]王建安，苑光輝，李艷芝，等.超聲法提取金葉女貞果實(shí)中多糖工藝的研究[J].南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2012，35(4)：73-76.

[4]黃賽金，尹愛武，龔燈，等.淡竹葉多糖的抗衰老作用研究[J].現(xiàn)代食品科技，2015，31(11)：51-55.

[5]Ai S，F(xiàn)an X, Fan L, et a1.Extraction and Chemical Characterization of Angelica Sinensis Polysaccharides and its Antioxidant Activity[J].Carbohydr. Polym., 2013, 94(2): 731-736.

[6]YOU Li-jun, GAO Qing, FENG Meng-ying, et a1. Structural Characterisation of Polysaccharides from Tricholoma Matsntake and Their Antioxidant and Antitumour Activities[J].Food Chem., 2013,138(4): 2242-2249.

[7]Liu C, Chang J, Zhang L, et a1. Purification and Antioxidant Activity of a Polysaccharide from Bulbs of Fritillaria Ussuriensis Maxim[J].Int. J. Biol. Macromol., 2012, 50(4): 1075-1080.

[8]鐘靈，王振富，文德鑒，等.黃芪多糖抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2013，29(4)：350-353.

[9]Wu Wen-lin, Zhu Yuan-ting, Zhang Li, et a1. Extraction, Preliminary Structural Characterization, and Antioxidant Activities of Polysaechafides from Salvia Miltiorrhiza Bunge[J].Carbohydrate Polymers,2012,87(4):1348-1353.

Study on Antisenile Effects of Polysaccharides fromRosalaevigataMichx

LI Feng1, SHEN Yeshou2, CHEN Xiuming1

(1.WestAnhuiHealthVocationalcollege,Lu’an237005,China；2.KeyLaboratoryofResearchandDevelopmentofChineseMedicine,Hefei230039,China)

The antisenile effects were studied about polysaccharides from Dabie Mountains Rosa laevigata Michx using a mouse model induced by D-galactose. The thymus index and spleen index of mice were determined. Activities of glutathione peroxidase(GSH-Px)，superoxide dismutase(SOD), contents of malondialdehyde(MDA) and nitrogen monoxide(NO) in the serum, liver tissue， and brain tissue of mice were measured. The results showed Polysaccharides from Dabie MountainRosalaevigataMichxcould increase thymus and spleen index of mice obviously. It could also decrease obviously MDA and NO contents, increase significantly SOD and GSH-Px activities of mice. There were dose-dependently in groups. Polysaccharides from Dabie MountainsRosalaevigataMichxhad certain antioxidant activity, and scavenged oxygen free radicals. The results showed that they had a significant antisenile effect.

RosalaevigataMichx；polysaccharides；antisenile；D-galactose

2016-12-12

安徽省高校自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2015A427)。

李峰(1974-)，男，安徽六安人，副教授，研究方向：生化與分子生物學(xué)。

Q949.751.8

A

1009-9735(2017)02-0006-03