楊小芳+顧秀蘭

【摘要】 目的：通過(guò)檢測(cè)先兆流產(chǎn)患者體內(nèi)的血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（progesterone-induced blocking factor，PIBF）在治療前后的表達(dá)水平變化，研究妊娠早期PIBF與先兆流產(chǎn)的可能的關(guān)聯(lián)，從而為臨床治療先兆性流產(chǎn)提供新的支持。方法：選擇2013年6月-2016年6月在本院婦產(chǎn)科門(mén)診治療的確診為早孕先兆流產(chǎn)患者40例作為試驗(yàn)組，在孕期過(guò)程中給予相應(yīng)的治療，另外選擇正常健康的早孕婦女40例作為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫吸附方法（ELISA）檢測(cè)兩組孕婦治療前后血清孕酮及PIBF水平，探討兩者可能的關(guān)系。結(jié)果：治療過(guò)程中兩組均未出現(xiàn)不全流產(chǎn)和完全流產(chǎn)病例。給藥治療前，試驗(yàn)組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；之后給予黃體酮治療，試驗(yàn)組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長(zhǎng)，而逐漸升高，從第8孕周起，PIBF水平逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平，孕9、10、12周的PIBF水平與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但與試驗(yàn)組治療前水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組的血清孕酮及PIBF具有相關(guān)性，以血清孕酮水平做X軸，以血清PIBF水平為Y軸進(jìn)行相關(guān)性分析，得到相關(guān)曲線為：Y=1.789+1.897X（R2=0.954），該相關(guān)性在試驗(yàn)組患者中不存在。結(jié)論：PIBF對(duì)于預(yù)測(cè)和診斷反復(fù)自然流產(chǎn)具有重要的意義，為臨床治療先兆性流產(chǎn)提供重要的價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 反復(fù)自然流產(chǎn)； 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子； 孕酮

Expression of Progesterone Induced Blocking Factor in Serum of Patients with Recurrent Spontaneous Abortion/YANG Xiao-fang，GU Xiu-lan.//Medical Innovation of China，2017，14（09）：004-007

【Abstract】 Objective：To detect the expression level of serum progesterone induced blocking factor（PIBF） before and after treatment in patients with threatened abortion，to study the possible association between PIBF and threatened abortion in early pregnancy，so as to provide new support for clinical treatment of threatened abortion.Method：40 patients with threatened abortion in our hospital obstetrics and gynecology clinic from June 2013 to June 2016 were selected as the experimental group and were given corresponding treatment during pregnancy，another 40 cases in normal healthy pregnant women were selected as control group.The levels of progesterone and PIBF were detected by using enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） in these two groups and then explore the relationship between them.Result：There were no cases of incomplete abortion and complete abortion in the two groups.Before given treatment，the levels of serum progesterone and PIBF in experimental group were significantly lower than those in control group，the differences were statistically significant（P<0.05）；after treated with progesterone treatment，the progesterone and PIBF levels with the prolongation of gestation in experimental group，and gradually increased from eighth weeks of gestation，PIBF levels increased gradually，until 12 weeks of gestation was close to normal levels，compared to 9，10，12 gestational weeks PIBF levels compared with the control，there were no significant differences（P>0.05），but compared with the experimental group before treatment，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation between serum progesterone and PIBF in control group，the serum progesterone levels in X axis，the level of serum PIBF was correlation analysis of Y axis，get the correlation curve：Y=1.789+1.897X（R2=0.954），the association between patients in the experimental group.Conclusion：PIBF plays an important role in the prediction and diagnosis of recurrent spontaneous abortion，it can provide important value for clinical treatment of threatened abortion.

【Key words】 Recurrent spontaneous abortion； Progesterone induced blocking factor； Progesterone

First-authors address：Chen Xinghai Hospital in Zhongshan City，Zhongshan 528415，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.09.002

由于遺傳、環(huán)境及內(nèi)分泌等因素，在孕婦妊娠早期較易發(fā)生先兆流產(chǎn)，臨床表現(xiàn)主要為：妊娠12周前出現(xiàn)少量陰道流血、腰背痛及陣發(fā)性下腹痛等，但無(wú)妊娠物排出[1]。孕酮是妊娠過(guò)程的重要激素，其水平低于正常時(shí)，易誘發(fā)胎兒流產(chǎn)與畸形，即使給予相應(yīng)的臨床治療使用保胎藥物，但依然有潛在的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（progesterone-induced blocking factor，PIBF）的表達(dá)水平，可以直接反映出孕酮的水平[4-5]，本研究通過(guò)檢測(cè)PIBF的表達(dá)水平，來(lái)間接探討血清孕酮水平與先兆性流產(chǎn)的關(guān)系，從而為臨床治療先兆性流產(chǎn)提供新的支持，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6月-2016年6月在本院婦產(chǎn)科門(mén)診治療確診為早孕先兆流產(chǎn)患者40例作為試驗(yàn)組，年齡（30.0±1.8）歲，平均孕次（1.5±0.3）次，停經(jīng)（7.8±1.2）周。另外選擇正常健康的早孕婦女40例作為對(duì)照組，年齡（31.0±1.3）歲，平均孕次（1.2±0.5）次，停經(jīng)（6.9±1.5）周。兩組的年齡、孕次及停經(jīng)等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.5），具有可比性。醫(yī)生詳細(xì)詢(xún)問(wèn)每例患者病史并做詳細(xì)記錄，排除遺傳、解剖、自身免疫、內(nèi)分泌異常及感染性疾病。保證患者無(wú)自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，另外本次妊娠目前未出現(xiàn)陰道流血等先兆流產(chǎn)癥狀和體征，經(jīng)其他手段進(jìn)行診斷，例如B超等證實(shí)胚胎發(fā)育正常。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意，研究對(duì)象均已被告知相關(guān)的信息，簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)組 患者同意試驗(yàn)后，并在接受其他的藥物治療前，懷孕7周左右時(shí)，取空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，并置于-20 ℃保存。之后給予黃體酮治療，分別收集患者懷孕8、9、10和12周空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，同樣-20 ℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測(cè)定血清中孕酮及PIBF的含量[6]。檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物試劑有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和測(cè)定。

1.2.2 對(duì)照組 收集與試驗(yàn)組患者的同期的正常健康早孕婦女孕周分別在7、8、9、10和12周取空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，同樣-20 ℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測(cè)定血清中孕酮及PIBF的含量。檢測(cè)方法及操作同上述試驗(yàn)組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后血清中孕酮與PIBF水平變化比較 治療過(guò)程中兩組均未出現(xiàn)不全流產(chǎn)和完全流產(chǎn)病例。給藥治療前即孕7周，試驗(yàn)組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；之后給予黃體酮治療，試驗(yàn)組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長(zhǎng)，而逐漸升高，從第8孕周起，PIBF水平逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平，孕9、10、12周的PIBF水平與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但與試驗(yàn)組治療前水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 血清中孕酮及PIBF相關(guān)性分析 對(duì)照組血清孕酮與PIBF呈正相關(guān)關(guān)系，以血清孕酮水平做X軸，以血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（PIBF）水平為Y軸進(jìn)行相關(guān)性分析，得到相關(guān)曲線為：Y=1.789+1.897X（R2=0.954）；但試驗(yàn)組中血清孕酮與PIBF水平不具備顯著相關(guān)關(guān)系。見(jiàn)圖1、2。

3 討論

最早是Szekeres-Bartho在早期提出PIBF是一種調(diào)節(jié)妊娠免疫應(yīng)答的有效因子，它在妊娠保護(hù)作用機(jī)制中起重要作用[7-8]。另有學(xué)者認(rèn)為PIBF可能是一種孕激素調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)母胎界面的免疫微環(huán)境，達(dá)到保護(hù)胚胎正常免疫系統(tǒng)的形成，從而保護(hù)正常的妊娠[9]。有學(xué)者研究已經(jīng)表明：流產(chǎn)婦女血清中PIBF表達(dá)水平低于正常妊娠婦女，并發(fā)現(xiàn)此類(lèi)患者尿液中的PIBF濃度也顯著低于正常妊娠婦女[10]。這些現(xiàn)有的研究都表明PIBF水平的異常與妊娠流產(chǎn)之間存在密切聯(lián)系。國(guó)內(nèi)也有較多研究已經(jīng)證明：先兆流產(chǎn)的原因主要表現(xiàn)為妊娠早期血清PIBF水平降低，黃體酮可以通過(guò)上調(diào)血清PIBF表達(dá)水平，保護(hù)胚胎降低先兆性流產(chǎn)的發(fā)生[11-13]?？傊?，PIBF的生物學(xué)效應(yīng)為維持正常妊娠，保護(hù)妊娠。妊娠婦女PIBF表達(dá)水平的變化可能部分的反映妊娠的病變情況，與妊娠的結(jié)局有關(guān)[14]。因此，檢測(cè)血清中PIBF的表達(dá)水平，可以預(yù)測(cè)胚胎發(fā)育情況，從而對(duì)于臨床使用黃體酮治療先兆流產(chǎn)具有重要的價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，給藥治療前即孕7周，試驗(yàn)組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對(duì)照組（P<0.05），之后給予黃體酮治療，試驗(yàn)組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長(zhǎng)，而逐漸升高，從8孕周起孕酮與PIBF水平均逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平。這與已有的研究結(jié)果也是一致的：對(duì)于先兆性流產(chǎn)患者，給予黃體酮治療一定的療程后，能起到維持良好的妊娠發(fā)育與胎兒成長(zhǎng)，改善孕婦正常的激素與內(nèi)分泌水平的作用[15-16]。也證明了PIBF及孕酮水平對(duì)于預(yù)測(cè)和診斷反復(fù)自然流產(chǎn)具有較大的參考意義。進(jìn)一步的，對(duì)于PIBF與孕酮之間的關(guān)系進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組血清孕酮及PIBF呈正相關(guān)關(guān)系，以血清孕酮水平做X軸，以血清孕酮誘導(dǎo)的封閉因子（PIBF）水平為Y軸進(jìn)行相關(guān)性分析，得到相關(guān)曲線為：Y=1.789+1.897X （R2=0.954）；但試驗(yàn)組中血清孕酮與PIBF水平不具備顯著相關(guān)關(guān)系。這證明兩者之間的相關(guān)性的確存在[17]。在試驗(yàn)組先兆性流產(chǎn)中兩者無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明體內(nèi)的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)的異常，可能導(dǎo)致了兩者水平的相對(duì)變化。

現(xiàn)在廣為接受的PIBF影響妊娠結(jié)局的機(jī)制主要是：妊娠過(guò)程中，父方基因胚胎抗原能夠刺激胎兒-母體之間的胎盤(pán)屏障區(qū)域，使相鄰界面部分蛻膜細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生PR，該受體可以與孕酮結(jié)合，并被激活，進(jìn)一步誘發(fā)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)蛋白PIBF，降低蛻膜淋巴細(xì)胞毒性，維持母體與胎兒的免疫微環(huán)境，改善胎兒的生活環(huán)境，有利于胚胎的免疫逃避[16-18]。而在先兆流產(chǎn)患者體內(nèi)，由于血中孕酮分泌不足、當(dāng)父方基因胚胎抗原刺激誘發(fā)免疫反應(yīng)，蛻膜細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生PR后，孕酮無(wú)法與其正常結(jié)合，或結(jié)合數(shù)量不足、結(jié)合后無(wú)法激活等原因而導(dǎo)致母體免疫系統(tǒng)的異常，胚胎可能受到細(xì)胞毒性損害[19]；另外可能會(huì)出現(xiàn)纖體分泌糖原不足，胚胎著床營(yíng)養(yǎng)不足等癥狀。而經(jīng)黃體酮治療后，能夠誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與PR結(jié)合并激活PR，產(chǎn)生足夠有效的PIBF，提升先兆流產(chǎn)患者血清孕酮水平，維持胎兒的正常免疫環(huán)境，促使其正常發(fā)育，保護(hù)妊娠過(guò)程[20-21]。

隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，各種的刺激因素越來(lái)越多，先兆流產(chǎn)與反復(fù)自然流產(chǎn)的患者越來(lái)越多，臨床的傳統(tǒng)治療為根據(jù)妊娠早期的低水平的孕激素，給予適度甚至過(guò)度黃體酮進(jìn)行治療，這可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重后果，不能夠準(zhǔn)確判斷病理妊娠。本研究測(cè)定PIBF與孕酮，并納入常規(guī)指標(biāo)，在早孕患者中進(jìn)行定期檢測(cè)，從而為診斷病理妊娠和給予黃體酮治療提供更加準(zhǔn)確與可靠的判斷依據(jù)，更加準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局，大大提高臨床治療先兆性流產(chǎn)的治療效果。

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