杜兵耀 王加啟 文 芳* 鄭 楠 張養(yǎng)東 李國(guó)棟 郭曉東(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部奶產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(北京)，北京100193；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊830052；3.農(nóng)業(yè)部奶及奶制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(北京)，北京100193；4.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193)

牛奶中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展

杜兵耀1,2,3,4王加啟1,3,4文 芳1,3,4*鄭 楠1,3,4張養(yǎng)東1,3,4李國(guó)棟1,3,4郭曉東1,3,4
(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部奶產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(北京)，北京100193；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊830052；3.農(nóng)業(yè)部奶及奶制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(北京)，北京100193；4.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193)

近年來(lái)，牛奶質(zhì)量安全問(wèn)題頻發(fā)，已嚴(yán)重威脅到公共健康。因此，牛奶質(zhì)量安全成為國(guó)際關(guān)注的重點(diǎn)。當(dāng)牛奶中殘留獸藥時(shí)，會(huì)對(duì)消費(fèi)者造成不良的影響。本文從牛奶中獸藥檢測(cè)技術(shù)的原理和優(yōu)缺點(diǎn)出發(fā)，對(duì)牛奶中獸藥殘留的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了較全面的綜述，并對(duì)牛奶中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)在未來(lái)的發(fā)展方向作了展望。

獸藥殘留；牛奶；微生物檢測(cè)；儀器分析；免疫分析；適配體傳感器

在動(dòng)物的生產(chǎn)過(guò)程中，往往會(huì)使用獸藥來(lái)進(jìn)行疾病治療和提高生產(chǎn)性能。隨著獸藥使用量的增加，會(huì)導(dǎo)致藥物在動(dòng)物源性食品如牛奶、肌肉、肝臟中的殘留，進(jìn)而影響食品質(zhì)量安全，對(duì)消費(fèi)者產(chǎn)生不良的副作用，如過(guò)敏反應(yīng)、產(chǎn)生耐藥性、毒性反應(yīng)[1-2]。由于獸藥的廣泛應(yīng)用，引起的獸藥殘留在動(dòng)物源性食品中廣泛存在，各個(gè)國(guó)家已經(jīng)設(shè)立了動(dòng)物源性食品的最大殘留限量，用來(lái)保護(hù)消費(fèi)者的身體健康。鑒于獸藥殘留對(duì)機(jī)體造成的危害，需要對(duì)獸藥的殘留進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測(cè)[3-7]。隨著科技的發(fā)展，各種技術(shù)已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于獸藥殘留的檢測(cè)。然而，在動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的檢測(cè)和量化存在以下幾個(gè)難點(diǎn)：不同性質(zhì)的獸藥同時(shí)測(cè)定較為復(fù)雜；獸藥殘留的濃度可能會(huì)很低；自然狀態(tài)下基質(zhì)很復(fù)雜。因此，需要采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒▽?duì)動(dòng)物源性食品中獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。

牛奶是人類(lèi)飲食中蛋白質(zhì)的重要來(lái)源，具有高蛋白質(zhì)和高脂肪含量，但是牛奶基質(zhì)復(fù)雜，能夠結(jié)合分析物和干擾分析物浸出液[8]。從分析的角度來(lái)看，即使是少量的脂肪也可以惡化分析柱和污染分析系統(tǒng)，因此測(cè)定牛奶中殘留微量水平的獸藥時(shí)，樣品前處理要有效的分離蛋白質(zhì)和脂肪，才能實(shí)現(xiàn)對(duì)牛奶中殘留獸藥進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測(cè)。牛奶中殘留的獸藥主要有4類(lèi)，即磺胺類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和氨基糖苷類(lèi)。針對(duì)牛奶中存在獸藥殘留的現(xiàn)狀，我國(guó)和歐盟均設(shè)置了牛奶中獸藥的最大殘留限量，如表1所示。政府機(jī)構(gòu)和乳品企業(yè)非常重視對(duì)牛奶中獸藥殘留進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測(cè)，因此，需要建立快速、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、高效的方法檢測(cè)牛奶中存在的獸藥，用來(lái)確保消費(fèi)者的安全。

目前我國(guó)針對(duì)牛奶中獸藥殘留的檢測(cè)設(shè)置了相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)：1)高效液相色譜法檢測(cè)牛奶中殘留喹諾酮類(lèi)藥物[11]；2)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)動(dòng)物源性食品中殘留的青霉素族抗生素[12]；3)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)動(dòng)物源性食品中殘留的磺胺類(lèi)藥物[13]；4)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法檢測(cè)動(dòng)物源性食品中殘留的四環(huán)素類(lèi)獸藥[14]；5)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)牛奶和奶粉中殘留的硝基呋喃類(lèi)藥物[15]等。這些標(biāo)準(zhǔn)中獸藥殘留的檢測(cè)方法雖然多，但是需要專(zhuān)業(yè)的操作人員和昂貴的儀器設(shè)備。近年來(lái)，一些高技術(shù)含量的檢測(cè)方法也相繼被開(kāi)發(fā)出來(lái)，被廣泛的應(yīng)用于牛奶中獸藥殘留的檢測(cè)。本文主要介紹幾種獸藥殘留檢測(cè)方面的相關(guān)技術(shù)。

表1 獸藥在牛奶中的最高殘留限量

1 微生物檢測(cè)法

微生物檢測(cè)法是基于獸藥對(duì)微生物的抑制作用，測(cè)定原理是利用獸藥對(duì)微生物的生理機(jī)能和代謝的抑制作用來(lái)確定樣品中的獸藥殘留，結(jié)果通過(guò)測(cè)量抑菌圈的大小進(jìn)行衡量。微生物檢測(cè)法簡(jiǎn)單快速，成本低，不需要通過(guò)化學(xué)的方法，不需要復(fù)雜的儀器，可以檢測(cè)出廣譜的抗菌藥物，但是勞動(dòng)強(qiáng)度大，只能定性的測(cè)量，并且該方法靈敏度和特異性有待進(jìn)一步提高[16-17]。

Appicciafuoco等[18]報(bào)道了1個(gè)基于大腸桿菌的生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)的生物光學(xué)方法檢測(cè)牛奶中喹諾酮類(lèi)藥物的殘留，樣品采用空白和加標(biāo)的牛奶，在培養(yǎng)基中接種10 000 CFU/mL的大腸桿菌，若喹諾酮藥物存在時(shí)，抑制培養(yǎng)基中大腸桿菌的生長(zhǎng)。該方法中環(huán)丙沙星和恩諾沙星的檢出限為100 μg/L，但該檢測(cè)方法不能檢測(cè)出牛奶中低濃度藥物的殘留，靈敏度有待于進(jìn)一步的提高。Stead等[19]利用戴爾沃檢測(cè)法檢測(cè)牛奶中的青霉素、氨芐西林、阿莫西林、頭孢菌素、頭孢噻呋、氯唑西林、磺胺嘧啶、土霉素、新霉素、紅霉素10種獸藥殘留，檢測(cè)結(jié)果符合歐盟的最大殘留限量的要求；樣品的終端測(cè)量視覺(jué)系統(tǒng)通過(guò)戴爾沃掃描系統(tǒng)，戴爾沃可視化系統(tǒng)可以有效地區(qū)分基質(zhì)對(duì)殘留獸藥的影響；另外，該方法還適用于檢測(cè)牛奶中的脂肪含量和體細(xì)胞數(shù)。氯霉素是一種價(jià)格低廉、廣譜高效的獸藥，被廣泛的應(yīng)用于臨床的治療和疾病的預(yù)防。然而，對(duì)人類(lèi)來(lái)說(shuō)，氯霉素可能會(huì)造成不利影響，如造成再生障礙性貧血。Samsonova等[20]建立了用于檢測(cè)不同類(lèi)型食品(牛奶、肉、蛋)中的獸藥(氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素)殘留的方法，該方法篩選了如微生物抑制法、基于抗體的免疫法、生物傳感器檢測(cè)法，并對(duì)這些方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了討論和比較，對(duì)獸醫(yī)殘留檢測(cè)方法當(dāng)前的狀態(tài)和未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行了分析。Kumar等[21]利用微生物檢測(cè)法對(duì)牛奶中芽孢桿菌的萌芽孢子和休眠孢子進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)殘留的獸藥抑制孢子的萌芽過(guò)程來(lái)監(jiān)測(cè)牛奶中的獸藥殘留情況，在64 ℃的條件下孵育2～3 h，可以激活孢子到萌芽狀態(tài)，顏色從紫色變化為黃色作為檢測(cè)牛奶中獸藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)。該試驗(yàn)通過(guò)對(duì)228個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)獸藥的殘留水平為10.08%，假陽(yáng)性率為0.43%。該研究結(jié)果表明該方法可以應(yīng)用于奶制品企業(yè)，用于檢測(cè)牛奶中獸藥的殘留，然而只能半定量的檢測(cè)，存在靈敏度低和選擇性差等缺點(diǎn)。許多法規(guī)禁止在飼料中使用獸藥，以保護(hù)消費(fèi)者和動(dòng)物的健康。Bohn等[16]開(kāi)發(fā)了1種簡(jiǎn)單、成本低的方法用于檢測(cè)飼料中的獸藥殘留，并驗(yàn)證了14種代表性藥物，其中環(huán)丙沙星的檢出限為10 μg/L，氯苯胍的檢出限為10 mg/L，但是該檢測(cè)方法存在一定的假陰性，需要進(jìn)一步的改進(jìn)。Yamaki等[22]使用微生物檢測(cè)法對(duì)西班牙的1個(gè)牧場(chǎng)生產(chǎn)過(guò)程中羊奶中殘留的獸藥進(jìn)行了分析，通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)樣品的陽(yáng)性率為2.6%，陽(yáng)性樣品中大約25%為β-內(nèi)酰胺類(lèi)獸藥，陽(yáng)性樣品82 ℃加熱10 min后陽(yáng)性率降低了0.9%，并且9和10月份陽(yáng)性率最高，但是該方法存在一定的假陽(yáng)性，且靈敏度有待提高。

2 免疫分析法

免疫分析法是以抗體與抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。由于抗原與抗體的結(jié)合具有高度的敏感性和特異性，并且抗原(抗體)的量與其反應(yīng)強(qiáng)度呈明顯的函數(shù)關(guān)系，可以對(duì)樣品進(jìn)行定性或定量分析。利用該原理建立的一系列靈敏、高效的免疫分析方法被廣泛的應(yīng)用于牛奶中獸藥殘留的檢測(cè)[23]。

頭孢噻呋是強(qiáng)效的獸藥，常在泌乳期用于治療牛的肺炎，使用不當(dāng)會(huì)造成在牛奶中殘留。Stanker等[24]開(kāi)發(fā)出基于單克隆抗體的競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)法，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)牛奶中殘留的頭孢噻呋及其代謝物，操作簡(jiǎn)單，且樣品只需要進(jìn)行稀釋就可以進(jìn)行檢測(cè)，檢出限達(dá)到1 μg/L，回收率在80.8%～116.8%。Zhi等[25]采用免疫分析法檢測(cè)牛奶中的頭孢菌素，回收率到達(dá)74%～120%，檢出限達(dá)到1 μg/L，可以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)牛奶中的頭孢菌素。Pennacchio等[26]利用新型的免疫傳感器方法檢測(cè)牛奶中的青霉素G，首先將牛血清蛋白(BSA)溶解在碳酸鹽緩沖液中，加入青霉素G進(jìn)行共軛，形成青霉素G-BSA的復(fù)合物，免疫家兔獲得免疫球蛋白G(IgG)抗體。該方法可以直接地應(yīng)用于檢測(cè)牛奶中青霉素G的殘留，而不受其他物質(zhì)的干擾，檢測(cè)限達(dá)到0.356 μg/L。

克林沙星常用于治療動(dòng)物的疾病，但其殘留在奶制品中會(huì)對(duì)人體的健康造成危害，導(dǎo)致產(chǎn)生細(xì)菌的耐藥性或者過(guò)敏反應(yīng)。Chen等[27]利用熒光示蹤劑建立了熒光偏振免疫分析法，通過(guò)合成異硫氰酸熒光素標(biāo)記的獸藥，在黑暗條件下混勻，示蹤劑與抗體結(jié)合，然后測(cè)量加入不同濃度的藥物與示蹤劑競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體后的熒光偏振值，進(jìn)而高靈敏度檢測(cè)奶制品中克林沙星的殘留，該方法的回收率為86.8%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.1%～7.2%，其中依諾沙星的檢出限達(dá)到3.3 μg/L。Gao等[28]通過(guò)合成單克隆抗體測(cè)定牛奶中的四環(huán)素類(lèi)獸藥殘留，分別用強(qiáng)力霉素和金霉素的免疫原免疫小鼠來(lái)合成單克隆抗體，獲得的抗體和包被的抗原進(jìn)行混合，通過(guò)篩選獲得抗體和抗原的最佳組合，從而建立可以同時(shí)檢測(cè)7種四環(huán)素類(lèi)藥物的酶聯(lián)免疫技術(shù)，該方法的回收率在75.3%～106.8%，檢出限的范圍在1.5～6.9 μg/L。但該方法可能存在各種干擾試驗(yàn)的因素，如果沒(méi)有精確的方法和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，也可能發(fā)生交叉效應(yīng)，有待于進(jìn)一步完善。

3 儀器分析法

儀器分析法是通過(guò)獸藥分子中的基團(tuán)具有的特殊性質(zhì)或者反應(yīng)來(lái)測(cè)定其含量，如氣相色譜法、高效液相色譜法等，其中高效液相色譜儀結(jié)合紫外檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器被廣泛地應(yīng)用于牛奶中獸藥殘留的分析。在前處理步驟中利用蛋白質(zhì)沉淀、萃取等使牛奶中的獸藥分離。Samanidou等[29]利用高效液相色譜法與二極管陣列結(jié)合檢測(cè)牛奶中的四環(huán)素類(lèi)獸藥，用草酸鹽緩沖液加入20%的三氯乙酸蛋白質(zhì)洗脫劑，通過(guò)固相萃取柱提取牛奶中分析物，進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，該方法的加標(biāo)回收率在93.8%～107.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于8.5%。Yu等[30]開(kāi)發(fā)了1種簡(jiǎn)單、快速、靈敏、成本低的檢測(cè)技術(shù)，即利用C18攪拌棒吸附萃取技術(shù)結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜用來(lái)測(cè)定牛奶中的6種磺胺類(lèi)藥物。C18二氧化硅粒子包覆的攪拌棒制備簡(jiǎn)單，具有好的機(jī)械強(qiáng)度，可以重復(fù)使用20次以上。顆粒涂層表面積增大，對(duì)萃取過(guò)程極為有利，靶標(biāo)親和力強(qiáng)，通過(guò)對(duì)萃取時(shí)間、離子強(qiáng)度、樣品的pH和攪拌速度進(jìn)行優(yōu)化，6種磺胺類(lèi)藥物的檢出限達(dá)到0.9～10.5 μg/L，可以應(yīng)用于牛奶和奶粉中磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)。Arroyo-Manzanare等[31]分別采用分散液相微萃取和QuEChERS(quick, easy, cheap, effective, rugged and safe)前處理方法來(lái)檢測(cè)牛奶中的9種磺胺類(lèi)藥物。使用這2種前處理方法用來(lái)代替固相萃取，簡(jiǎn)單易行，減少了有機(jī)溶劑的使用量。分散液相微萃取和QuEChERS前處理方法的回收率分別在90.8%～104.7%和83.6%～104.8%，檢出限分別為1.21和2.73 μg/L。β-內(nèi)酰胺類(lèi)獸藥在牛奶中的殘留會(huì)對(duì)人體的健康造成不良的影響。Cámara等[32]描述了1個(gè)靈敏可靠的檢測(cè)方法，利用高效液相色譜結(jié)合紫外二極管陣列檢測(cè)器同時(shí)檢測(cè)多種β-內(nèi)酰胺類(lèi)獸藥，通過(guò)對(duì)色譜柱、流動(dòng)相、溫度和流速進(jìn)行優(yōu)化，回收率達(dá)到79%～96%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.5%～4.9%，檢出限達(dá)到3.4～8.6 μg/L，滿(mǎn)足國(guó)家最低殘留限量的要求。Adlnasab等[33]利用分散液-液固相萃取法檢測(cè)牛奶中β-內(nèi)酰胺類(lèi)獸藥的殘留，通過(guò)前處理和條件的優(yōu)化后上機(jī)檢測(cè)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.3%～8.5%，檢出限達(dá)到50～500 μg/L。Wang等[34]開(kāi)發(fā)了1種空氣輔助-液液微萃取的前處理方式結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)奶粉和雞蛋中的喹諾酮類(lèi)藥物殘留的方法，該方法對(duì)影響萃取效果的參數(shù)萃取溶劑的類(lèi)型、離心時(shí)間、pH等進(jìn)行了優(yōu)化，變異系數(shù)小于8%，回收率達(dá)到72%～115%，檢出限最低達(dá)到5 μg/L，該方法使用有機(jī)溶劑少、離心時(shí)間短、快速、簡(jiǎn)單。Lombardo-Agüí等[35]利用毛細(xì)管液相色譜法結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)法測(cè)定牛奶中7種獸藥的殘留，并且采用了QuEChERS和分子印跡聚合物2種萃取前處理方式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)QuEChERS前處理方式更快，回收率更高，檢出限更低，其中達(dá)氟沙星的檢出限達(dá)到0.4 μg/kg。Xu等[36]利用固相萃取技術(shù)結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)牛奶中四環(huán)素類(lèi)獸藥的殘留，在優(yōu)化試驗(yàn)條件后，對(duì)于四環(huán)素類(lèi)獸藥檢測(cè)的回收率達(dá)到81.5%～101.4%，檢出限達(dá)到0.61～10.34 μg/kg。Lv等[37]開(kāi)發(fā)了1種快速、靈敏、特異性好的方法用于檢測(cè)牛奶中的四環(huán)素類(lèi)獸藥，樣品通過(guò)分子印跡固相萃取技術(shù)結(jié)合反向高效液相色譜進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，以四環(huán)素類(lèi)為模板，功能單體為甲基丙烯酸，無(wú)機(jī)前驅(qū)體為四乙氧基硅烷，偶聯(lián)劑為甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷，合成了分子印跡有機(jī)-無(wú)機(jī)復(fù)合材料，建立了在線固相萃取結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)四環(huán)素類(lèi)獸藥的新方法，回收率達(dá)到85.3%～98.3%，檢出限達(dá)到0.76 μg/kg。Santos等[38]利用毛細(xì)管電泳法檢測(cè)牛奶中的6種獸藥，并與高效液相色譜法進(jìn)行對(duì)比，其中高效液相色譜法不能區(qū)分阿莫西林，檢出限范圍在0.48～1.09 mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<5%。該方法簡(jiǎn)單，容易使用，耗時(shí)短，檢測(cè)限低，操作簡(jiǎn)便，而且靈敏度高，測(cè)量范圍廣，但是該方法對(duì)樣品前處理要求高，設(shè)備昂貴。

4 適配體傳感器檢測(cè)法

核酸適配體的概念最早由Ellington等[39]和Tuerk等[40]在1990年提出。核酸適配體在整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)中作為信號(hào)識(shí)別單元，在結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)上靈活多變，與靶標(biāo)作用后其結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生改變或重構(gòu)，是實(shí)現(xiàn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的良好選擇，可以用于檢測(cè)多種目標(biāo)物，包括獸藥、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、霉菌毒素、重金屬等[41-42]，適配體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，可以體外合成，不受自然和物理?xiàng)l件的限制，從而受到研究者們廣泛的關(guān)注，因此，核酸適配體檢測(cè)技術(shù)成為食品中獸藥快速檢測(cè)的新方法[43]。

當(dāng)前的高效液相色譜法費(fèi)時(shí)，需要受過(guò)專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員，且不容易攜帶。Sun等[44]開(kāi)發(fā)了1種基于石墨烯-納米金離子、多壁碳-酞菁鈷和殼聚糖-納米金離子復(fù)合材料之間協(xié)同效應(yīng)的適配體傳感器，電極修飾過(guò)程的電化學(xué)性能通過(guò)循環(huán)伏安法進(jìn)行表征，納米復(fù)合材料的形貌通過(guò)掃描電子顯微鏡表征，在最佳條件下，該適配體傳感器具有高靈敏度、高特異性、低檢出限等特點(diǎn)，用于牛奶中卡那霉素的檢測(cè)，檢出限達(dá)到3.37 μg/L。Zhou等[45]建立了電化學(xué)適配體傳感器檢測(cè)卡那霉素的方法，適配體通過(guò)巰基連接到金電極表面，卡那霉素和卡那霉素適配體特異性的結(jié)合后，發(fā)生空間構(gòu)象的變化，引起金電極表面的覆蓋率增加，造成電子傳遞被阻礙，通過(guò)差分脈沖伏安法在探針溶液中進(jìn)行表征，卡那霉素的濃度變化通過(guò)峰電流值的變化進(jìn)行表征。該方法的特異性好、靈敏度高，檢出限達(dá)到8.15 ng/L。Guo等[46]首先將四環(huán)素的適配體通過(guò)納米金離子修飾在電極表面，然后把亞甲基藍(lán)修飾到電極表面，當(dāng)加入四環(huán)素后，四環(huán)素與亞甲基藍(lán)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合適配體，由于四環(huán)素與適配體的親和力強(qiáng)于亞甲基藍(lán)，使亞甲基藍(lán)釋放，造成電流值的減小，通過(guò)電流的變化表征四環(huán)素的濃度。該方法選擇性好、靈敏度高，用于牛奶中四環(huán)素的檢測(cè)，回收率為94%～108%，檢出限到達(dá)1.86 ng/L。智文婷[47]開(kāi)發(fā)了用于檢測(cè)四環(huán)素的比色適配體傳感器，適配體與四環(huán)素結(jié)合后，納米金離子失去適配體的保護(hù)，高濃度的氯化鈉溶液促使納米金離子的間距縮小，引起納米金溶液顏色發(fā)生變化。該方法檢出限達(dá)到7.8 μg/L。Xu等[48]開(kāi)發(fā)了1種基于辣根過(guò)氧化物酶和氧化石墨烯-聚苯胺的信號(hào)放大策略構(gòu)建的適配體傳感器，氧化石墨烯-聚苯胺膜修飾到電極上，同時(shí)加入辣根過(guò)氧化物酶修飾的土霉素適配體和土霉素到電極表面，土霉素和適配體結(jié)合導(dǎo)致電極上的辣根過(guò)氧化物酶減少，引起電化學(xué)信號(hào)降低，利用電化學(xué)信號(hào)的變化來(lái)表征土霉素的濃度。該方法選擇性好、靈敏度高，檢出限達(dá)到2.3×10-6mg/L。雖然該方法靈敏度高、選擇性好、檢測(cè)成本低，但是也存在重復(fù)性差等問(wèn)題，需要進(jìn)一步的完善。

5 小 結(jié)

隨著科學(xué)技術(shù)的日益提高，獸藥殘留的檢測(cè)技術(shù)也在逐步的提高。在牛奶質(zhì)量安全的檢測(cè)分析中，作為目前較為常用的微生物檢測(cè)法、儀器分析法、免疫分析法的靈敏度有了顯著的提高，適配體傳感器檢測(cè)法也在逐步的改進(jìn)，相比較于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，適配體傳感器檢測(cè)法由于靈敏度高、特異性強(qiáng)、體積小、操作簡(jiǎn)單、成本低等諸多優(yōu)勢(shì)受到科研工作者的廣泛關(guān)注，但是也存在一些問(wèn)題，需要科研工作者逐步的完善。總之，我們相信在牛奶中獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，將會(huì)涌現(xiàn)出更多全新的靈敏度高、適用性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快捷的檢測(cè)分析方法。

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*Corresponding author, assistant professor, E-mail: bnu104@126.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Advances in Detection Techniques of Veterinary Drug Residues in Milk

DU Bingyao1,2,3,4WANG Jiaqi1,3,4WEN Fang1,3,4*ZHENG Nan1,3,4ZHANG Yangdong1,3,4LI Guodong1,3,4GUO Xiaodong1,3,4
(1.LaboratoryofQuality&SafetyRiskAssessmentforDairyProducts(Beijing),MinistryofAgriculture,Instituteof
AnimalSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China; 2.CollegeofAnimalScience,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830052,China; 3.MilkandDairyProductInspectionCenter(Beijing),MinistryofAgriculture,Beijing100193,China; 4.StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition,InstituteofAnimalSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China)

In recent years, milk quality and safety events have occurred frequently, which imposes serious hazards to public health. Milk quality and safety thus plays an important role for international attention. Once present in milk, veterinary drugs pose a hazard to humans who consume them. In this paper, the principles, advantages and disadvantages of various analytical techniques for the detection of veterinary drug residues in milk were summarized, and the development trend of detection techniques of veterinary drug residues in the future was predicted.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(5)：1498-1505]

veterinary drug residues; milk; microbiology detection; instrumental analysis; immunoassays; aptasensors

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.05.007

2016-11-16

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(奶牛)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)(nycytx-04-01)；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目(ASTIP-IAS12)

杜兵耀(1990—)，男，河南許昌人，碩士，從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與牛奶質(zhì)量安全的研究。E-mail: bingyaochina@163.com

*通信作者:文 芳，助理研究員，E-mail： bnu104@126.com

TS252.1

A

1006-267X(2017)05-1498-08