馬明蘭

摘 要：本文用高效液相色譜法測(cè)定消糖靈膠囊中格列本脲和鹽酸小檗堿的含量。通過(guò)利用PLPLC法來(lái)沉淀待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而分析消糖靈類藥物的中藥成分與西藥成份。該方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性好，能夠用于消糖靈膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：HPLC；消糖靈膠囊；格列本脲；鹽酸小檗堿；含量檢測(cè)

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

消糖靈膠囊藥的處方由人參、天花粉、黃連、丹參、杜仲、黃芪、枸杞子、五味子、沙苑子、白芍、知母、優(yōu)降糖（格列本脲）十二味藥組成作用。臨床用于治療糖尿病，具有益氣養(yǎng)陰，清熱瀉火，益腎縮尿之功效。該藥是一種中西復(fù)方藥物，格列本脲為本處方中的西藥成分，其化學(xué)名稱為：N-[2-[4-[[[（環(huán)己氨基）羰基]氨基]磺?；鵠苯基]乙基]-2-甲氧基-5-氯苯甲酰胺，分子式：C23H28ClN3O5S 分子量：494.01，具有降血糖的功效。黃連素是一種重要的生物堿，是我國(guó)應(yīng)用很久的一種中藥材，有很好的殺菌作用，主要化學(xué)成分是鹽酸小檗堿，具有顯著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低膽固醇、抗制血管平滑肌增殖、改善胰島素抵抗、抗血小板、抗炎等等作用。格列本脲和鹽酸小檗堿和藥品的功能密切相關(guān)，都可用高效液相色譜法進(jìn)行含量的測(cè)定。

本文通過(guò)高相液相色譜法測(cè)定消糖靈膠囊中的格列本脲和鹽酸小檗堿含量，方法簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性均較好，通過(guò)利用HPLC法構(gòu)建待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此來(lái)測(cè)定樣品待測(cè)物質(zhì)的含量，并考察分析儀器精密度，樣品穩(wěn)定性，加樣回收率四項(xiàng)指標(biāo)。目的在于分析消糖靈該類藥物的中藥成分和西藥成分的含量和新藥的篩選提供新的思路和途徑，以達(dá)到為該類藥物做出更好的質(zhì)量控制。

1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器

1.1 材料及試劑

格列本脲對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司），鹽酸小檗堿對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公），消糖靈膠囊（0.4g/粒，遼寧綠丹藥業(yè)有限公司），甲醇、乙腈為色譜純，醋酸溶液，蒸餾水，進(jìn)樣針，進(jìn)樣瓶0.45um過(guò)濾紙（水系、有機(jī)系），燒杯，玻璃棒，容量瓶。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

電子分析天平（型號(hào)：BT 224S；廠家：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、高效液相色譜儀（型號(hào)：SPD-15；廠家：日本島津）、pH計(jì)（型號(hào)：PHS-3B；廠家：上海雷磁儀器有限公司 ）、超聲波清洗儀（型號(hào)：KQ-100DB；廠家：昆山市超聲儀器有限公司）

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 格列本脲的含量測(cè)定

2.1.1 格列本脲色譜條件

色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：甲醇—水溶液（70：30）；檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm；流速1ml.min-1；柱溫：室溫；理論塔板數(shù)按格列本脲計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.1.2 格列本脲對(duì)照品及供試品溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取格列本脲對(duì)照品5mg，加流動(dòng)相甲醇溶解并于10ml容量瓶中定容，制成格列本脲對(duì)照品溶液，即得濃度為0.5mg/ml對(duì)照液。

供試品溶液的制備：取樣品適量去膠囊殼，研細(xì)，混勻，精密稱取 2.0000g，加流動(dòng)相甲醇溶解并于50ml容量瓶中定容，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減少的重量至刻度線，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取上述格列本脲對(duì)照品溶液（0.5mg.ml-1），精密量取1ml、2ml、3ml、4 ml、5 ml，分別置10ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，各進(jìn)樣20?l，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，峰面積y為縱坐標(biāo)，格列本脲進(jìn)樣量x（ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程

2.2 鹽酸小檗堿的含量測(cè)定

2.2.1 鹽酸小檗堿色譜條件

色譜柱： C18柱；流動(dòng)相：甲醇—水溶液（加入適量醋酸）（75：25）；檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm，流速1ml.min-1；柱溫：35℃；理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 鹽酸小檗堿對(duì)照品及供試品溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品10mg，加流動(dòng)相甲醇溶解并于25ml容量瓶中定容，制成鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，濃度為0.4mg/ml，即得。

供試品溶液的制備：取樣品適量去膠囊殼，研細(xì)，混勻，精密稱取 2.0000g，加流動(dòng)相甲醇溶解并于50ml容量瓶中定容，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減少的重量至刻度線，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液 （0.4mg.ml-1），精密量取1ml、2ml、3ml、4 ml、5 ml，分別置10ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，各進(jìn)樣20?l，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，峰面積y為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量x（ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 格列本脲測(cè)定結(jié)果

3.1.1 格列本脲對(duì)照品不同濃度的圖譜及供試品的圖譜（見(jiàn)圖1，2，3，4，5，6）

由圖譜可知，格列本脲的保留時(shí)間tR=8.24min

3.1.2 格列本脲標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)表1）

3.1.3 格列本脲的含量測(cè)定結(jié)果

利用前述的方法進(jìn)行處理，對(duì)測(cè)定的峰面積數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析與格列本脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)計(jì)算，供試品溶液的格列本脲的峰面積為A=345587，得到待測(cè)樣品的含量數(shù)據(jù)。

由標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 ：

3.2 鹽酸小檗堿測(cè)定結(jié)果

3.2.1 鹽酸小檗堿對(duì)照品不同濃度的圖譜及供試品的圖譜（見(jiàn)圖7，8，9，10，11，12）

由圖譜可知，鹽酸小檗堿的保留時(shí)間

3.2.2 鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)表2）

3.2.3 鹽酸小檗堿的含量測(cè)定

（1）利用前述的方法進(jìn)行處理，對(duì)測(cè)定的峰面積數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析與鹽酸小檗堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)計(jì)算，供試品溶液中的鹽酸小檗堿的峰面積A=12304836，得到待測(cè)樣品的含量數(shù)據(jù)。

4 方法學(xué)考察

4.1 格列本脲的方法學(xué)考察

4.1.1 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述供試品溶液，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，格列本脲的峰面積RSD為3.4%，結(jié)果表明所用的儀器精密度良好。

結(jié)論：所得到的精密度RSD%=3.4%≤5%，故符合要求。

4.1.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液20 ?l，依正文方法測(cè)定，測(cè)定格列本脲的峰面積的RSD為2.2% ，表明在24小時(shí)內(nèi)樣品中格列本脲的含量基本穩(wěn)定。 結(jié)論：樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD%=2.2%。

4.1.3 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品 6份，分別精密加入格列本脲對(duì)照品適量，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)論：經(jīng)吸光度檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)的加樣回收率結(jié)果平均值為101.0%，RSD%為2.3%。而藥典規(guī)定的范圍為95%～105%，均符合限量規(guī)定。

4.2 鹽酸小檗堿的方法學(xué)考察

4.2.1 精密度試驗(yàn)

結(jié)論：所得到的精密度RSD%=1.83%，故符合要求。

4.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液20 ?l，依正文方法測(cè)定，測(cè)定鹽酸小檗堿的峰面積的RSD為 ，表明在24小時(shí)內(nèi)樣品中鹽酸小檗堿的含量基本穩(wěn)定。

結(jié)論：樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD%=2.4%。

4.2.3 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。

結(jié)論：經(jīng)吸光度檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)的加樣回收率結(jié)果平均值為100.3%，RSD%為1.02%。而藥典規(guī)定的范圍為95%～105%，均符合限量規(guī)定

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相對(duì)消糖靈膠囊中格列本脲和鹽酸小檗堿的定量分析，格列本脲標(biāo)準(zhǔn)品R=0.9993，鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品R=0.9997，證明兩種物質(zhì)的線性關(guān)系良好。

運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和外標(biāo)法兩種方法測(cè)定，計(jì)算得到消糖靈膠囊中格列本脲的含量為2.2mg/g，鹽酸小檗堿的含量為3.6mg/g。

在線性回歸分析中，格列本脲測(cè)定中，儀器精密度準(zhǔn)確RSD%=3.4%，8h內(nèi)穩(wěn)定性良好RSD%=2.2%，加樣回收率平均值101.03%且RSD%=2.3%；鹽酸小檗堿測(cè)定中，儀器精密度準(zhǔn)確RSD%=1.8%，8h內(nèi)穩(wěn)定性良好RSD%=2.4%，加樣回收率平均值100.3%且RSD%=1.02%

綜合得出，以上數(shù)據(jù)較為準(zhǔn)確，符合藥典各項(xiàng)限量規(guī)定。

參考文獻(xiàn)：

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[3] 張玉娟，田景振，付英杰等.HPLC測(cè)定消糖靈膠囊中格列本脲的含量[J].食品與藥品，2005 （4）.

（本文審稿 戴定蘭）