?；奂t，張路生，王小夢(mèng)，巴秀成

（山東省濱州市植保站，山東濱州 256600）

瓜類果斑病寄主范圍測(cè)定

?；奂t，張路生，王小夢(mèng)，巴秀成

（山東省濱州市植保站，山東濱州 256600）

瓜類果斑病嚴(yán)重危害了瓜類產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本文介紹了通過(guò)田間接種多種作物葉片和室內(nèi)菌懸液浸泡不同葫蘆科作物種子兩種方式進(jìn)行寄主范圍測(cè)定。結(jié)果表明，西瓜、甜瓜、苦瓜等葫蘆科作物都是該病菌的寄主，傷口及種子帶菌均可使寄主作物染病。

瓜類果斑??；人工接菌；寄主范圍

瓜類果斑病（Acidovorax avenae subsp.citrulli），又稱細(xì)菌性果腐病，是一種嚴(yán)重的細(xì)菌性病害，是瓜類作物生產(chǎn)中的重要病害[1,2]。該病在20世紀(jì)80年代后期在美國(guó)爆發(fā)而受到廣泛關(guān)注，自此，在世界范圍內(nèi)開始傳播[3]。引起該病的病菌為嗜酸菌屬燕麥種西瓜亞種，具有高度破壞性，是一種常見的瓜類果實(shí)采后腐爛的病原菌[4,5]。該病可以通過(guò)多種途徑傳播，可侵染植株、果實(shí)及種子，使幼苗患病，出現(xiàn)褐色壞死斑；帶菌果實(shí)在采后貯藏運(yùn)輸過(guò)程中感染健康果實(shí)，使果實(shí)表面出現(xiàn)水漬狀斑點(diǎn)，進(jìn)而導(dǎo)致整個(gè)果實(shí)腐爛，嚴(yán)重影響瓜類產(chǎn)量[6]；還可以通過(guò)種子遠(yuǎn)距離傳播。果斑病具有發(fā)病迅速、爆發(fā)性強(qiáng)、傳播速度快等特點(diǎn)，感染會(huì)給瓜類產(chǎn)量帶來(lái)巨大的損失，成為影響我國(guó)瓜類生產(chǎn)的主要病害之一[7]。該病高溫多雨潮濕的年份發(fā)病較重，一般田塊發(fā)病率在45%～75%，嚴(yán)重時(shí)高達(dá)100%，該病的發(fā)生嚴(yán)重危害了瓜類產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展[8]。目前,瓜類果斑病在國(guó)內(nèi)部分省區(qū)發(fā)生危害,主要有海南、陜西、河北、山西、吉林、沈陽(yáng)、內(nèi)蒙古、新疆[9]。本文介紹通過(guò)田間接種多種作物葉片和室內(nèi)菌懸液浸泡不同葫蘆科作物種子兩種方式進(jìn)行寄主范圍測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病原菌

采用瓜類果斑病的標(biāo)準(zhǔn)菌株，山東省植?？傉咎峁?/p>

1.1.2 供試植物

選用西瓜、甜瓜、黃瓜、南瓜、絲瓜、西葫蘆、苦瓜、白菜、豇豆、番茄、辣椒這11種作物作為田間接菌作物，所選品種為濱州市農(nóng)戶田間地頭主栽品種。選用西瓜、甜瓜、黃瓜、南瓜、苦瓜5種葫蘆科作物作為室內(nèi)菌懸液浸種試驗(yàn)，品種及來(lái)源見表1。

1.2 方法

1.2.1 田間接種方法

先用4%次氯酸鈉浸種15min，清水沖洗后播種在無(wú)菌土中，待出苗后植株3～5葉期，分別采用注射和針刺兩種方法接種，接種所用菌株是在NA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)48h，然后用無(wú)菌水配制成的1×108cfu/mL菌懸液。每株接種5片葉，4次重復(fù)。設(shè)置清水對(duì)照組。接種后外罩塑料袋保濕2d，2d后開始觀察記錄不同作物的癥狀表現(xiàn)，7d后觀察記錄發(fā)病情況，計(jì)算發(fā)病率和病情指數(shù)，研究明確病原菌的寄主范圍[10]。

1.2.2 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算公式[11]

病斑面積占葉片面積的比例來(lái)判斷植株的發(fā)病級(jí)別，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表2，然后計(jì)算發(fā)病率和病情指數(shù)，公式見式（1）和式（2）。

1.2.3 室內(nèi)菌懸液浸種試驗(yàn)

用無(wú)菌水配制成1×108cfu/mL菌懸液，將不同葫蘆科種子浸泡在菌懸液中，震蕩浸泡24h，催芽并使種子帶菌，取出后用無(wú)菌水沖洗3～4次，洗去表面菌懸液，無(wú)菌水浸泡5種葫蘆科種子為對(duì)照，每種種子菌懸液重復(fù)處理4次，每次重復(fù)30粒種子，進(jìn)行培養(yǎng)皿之間發(fā)芽試驗(yàn)[12]。將種子均勻放在帶有濕潤(rùn)吸水紙的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)，每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)放置3粒種子，種子上面再覆蓋另一張濕潤(rùn)吸水紙保濕，28℃內(nèi)保濕培養(yǎng)，每天觀察發(fā)病情況，14d記錄不同種子的發(fā)病情況，計(jì)算病株率。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間接種

2.1.1 田間接種后的癥狀

（1）西瓜癥狀

4d后出現(xiàn)明顯癥狀，病斑直徑0.1mm左右，病斑中間呈暗褐色，周圍有明顯的黃色暈圈。葉片上病斑密集，葉背面病斑呈灰白色，病健交界處明顯，擴(kuò)展后病斑呈水漬狀，有黃色暈圈，嚴(yán)重時(shí)病斑融合呈一大斑，黃褐色至黑褐色，病斑沿葉脈進(jìn)行擴(kuò)展，后期整個(gè)葉片干枯死亡。

（2）甜瓜癥狀

7d后癥狀明顯，病斑沿葉片主脈明顯擴(kuò)展，葉脈附近葉片顏色變淺，褪綠，病斑呈黃褐色，中間顏色淺，病斑外有黃色暈圈，較嚴(yán)重的可見葉片穿孔、開裂。發(fā)病速度較慢。

（3）苦瓜癥狀

4d后出現(xiàn)明顯病斑，直徑0.1～0.2mm左右，葉片正面出現(xiàn)暗褐色病斑，病斑明顯擴(kuò)展，具黃色暈圈，葉背面顏色褪綠，隨后病斑進(jìn)一步擴(kuò)大，沿主脈擴(kuò)展，受葉脈限制，形成多角形或長(zhǎng)條形病斑，暗褐色，周圍有黃色暈圈，葉片背面灰白色，后期病斑不融合。

表1 室內(nèi)菌懸液浸種試驗(yàn)供試植物

表2 植株發(fā)病級(jí)數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)

（4）南瓜癥狀

注射4d后出現(xiàn)壞死斑，黃褐色至深褐色，具黃色暈圈，后期病斑穿孔，開裂。

（5）絲瓜癥狀

4d后表現(xiàn)發(fā)病癥狀，針刺孔附近出現(xiàn)褪綠斑，顏色變黃，病斑周圍具有明顯黃色暈圈，隨后病斑進(jìn)一步擴(kuò)大，具明顯黃色暈圈，較嚴(yán)重的可見病斑融合，形成穿孔，葉背面病斑呈水漬狀，中間灰白色。

（6）黃瓜癥狀

病斑顏色較淺，呈白色至灰白色，葉背面癥狀與正面相似，擴(kuò)展范圍較小，與其他瓜類的癥狀有區(qū)別。

（7）西葫蘆癥狀

注射后出現(xiàn)褐色枯死斑，周圍有淺黃色暈圈，葉背面顏色較淺，褪綠；針刺接種處發(fā)病明顯，但癥狀較輕。

（8）番茄、辣椒、白菜、豇豆癥狀

接種后上述作物未發(fā)現(xiàn)病斑，也未在葉片中分離到病原物。

2.1.2 田間寄主作物發(fā)病情況

表3顯示的是11種作物的發(fā)病情況調(diào)查結(jié)果。由表3可知，瓜類果斑病對(duì)西瓜、甜瓜、苦瓜的致病力最強(qiáng)，發(fā)病率均達(dá)到100%，病情指數(shù)分別為49.44、38.89、45.56；對(duì)南瓜、西葫蘆、絲瓜、黃瓜的致病力也較強(qiáng)，但病斑擴(kuò)展速度不同；對(duì)番茄、白菜、辣椒、豇豆沒有致病力。

2.2 室內(nèi)菌懸液浸種作物測(cè)定

不同葫蘆科作物浸種后發(fā)芽時(shí)期表現(xiàn)不同，培養(yǎng)2d后甜瓜種子最先發(fā)芽，平均發(fā)芽率為12.2%。培養(yǎng)7d后，5種作物均發(fā)芽，發(fā)病癥狀基本相同，具體表現(xiàn)為子葉發(fā)病，出現(xiàn)深綠色小點(diǎn)，凹陷，根莖部發(fā)病較少，發(fā)病輕，部分莖基部、根微變黃色，還未表現(xiàn)典型發(fā)病癥狀。培養(yǎng)14d后，不同作物發(fā)病癥狀及侵染部位存在區(qū)別。西瓜、甜瓜發(fā)病最重，部分西瓜、甜瓜種子開裂后即死亡，根系、子葉還未長(zhǎng)出。另部分西瓜、甜瓜受侵染后，部分植株根部發(fā)病較重，表現(xiàn)為根系不發(fā)達(dá)，須根少，且部分根系顏色變?yōu)辄S褐色；部分甜瓜苗莖部發(fā)病較重，莖褪綠凹陷，后開裂腐爛，植株死亡；5種作物葉片發(fā)病表現(xiàn)癥狀基本相同，初為水浸狀褪綠病斑，后病斑擴(kuò)大，部分連片，部分病斑周圍出現(xiàn)菌膿。由表4可知，甜瓜病株率最高，為93.33%；其次為西瓜，病株率為90.83%；黃瓜病株率最低，為41.67%。

表3 瓜類果斑病的田間寄主范圍測(cè)定結(jié)果

表4 瓜類果斑病的室內(nèi)寄主范圍測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

通過(guò)田間人工接種和室內(nèi)菌懸液浸種試驗(yàn)表明，瓜類果斑病作為一種較危險(xiǎn)的病害，對(duì)多種作物特別是瓜類具有較強(qiáng)的致病能力，種子帶菌及植株傷口侵入均能導(dǎo)致瓜類作物致病，對(duì)西瓜、甜瓜、苦瓜等造成較大的損失。田間接種試驗(yàn)中，番茄、白菜、辣椒、豇豆未表現(xiàn)發(fā)病癥狀，說(shuō)明未對(duì)其有致病力。室內(nèi)菌懸液浸種試驗(yàn)中，5種葫蘆科作物均表現(xiàn)發(fā)病癥狀，可見，種子帶菌是其傳播途徑之一，生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)注意種子的處理?？傊?，瓜類果斑病可以通過(guò)多種途徑傳播，危害多種作物，在生產(chǎn)中應(yīng)引起足夠的重視，防止其擴(kuò)展蔓延。

[1]Bahar O,Burdman S.Bacterial fruit blotch∶a threat tothe cucurbit industry[J].IsraelJournalofPlantSciences,2010,58(1)∶19-31.

[2]Himananto O,Thummabenjapone P,Luxananil P,et al.Detection of Acidovorax avenae subsp citrulli in plant samples using enzyme-linked immunosorbent assay[J].Journal of ISSAAS,2009, 15(1)∶160-161.

[3]Schaad N W,Postnikova E,Sechler A,et al.Reclassification of subspectes ofAcidovoraxavenae as A.avenae(Manns,1905)emend., A.cattleyae(Pavarino,1911)comb.nov.,A.cirulli(Schaad et al.,1978) comb.nov.,and proposal of A.oryzae sp.nov [J].Systematic and Applied Micobiology,2008,31∶434-446.

[4]馬雅敏,吳萍,孫小武,等.瓜類細(xì)菌性果斑病菌種子檢疫性消毒方法的篩選[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,(9)∶91-94.

[5]陳海燕,陳綿才,秦雙,等.海南甜瓜細(xì)菌性果斑病田間藥效試驗(yàn)[J].長(zhǎng)江蔬菜,2012,(2)∶62-64.

[6]董明明,張?zhí)鹛?魏梅生,等.利用GICA-PCR快速檢測(cè)瓜類細(xì)菌性果斑病菌[J].植物檢疫,2011,(1)∶36-38.

[7]牛慶偉,孔秋生,黃遠(yuǎn),等.不同藥劑處理對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病帶菌種子的影響[J].長(zhǎng)江蔬菜,2012,(22)∶79-82.

[8]王婧,畢陽(yáng),朱艷,等.巢式PCR快速檢測(cè)西瓜細(xì)菌性果斑病菌[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,47(2)∶284-291.

[9]方中達(dá).植病研究方法[M].北京∶中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1998.

[10]宋順華,吳萍,孟淑春,等.種子處理對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病的防治效果[J].中國(guó)瓜菜,2013,26(3)∶5-9.

[11]牛慶偉,孔秋生,黃遠(yuǎn),等.不同藥劑處理對(duì)西瓜細(xì)菌性果斑病帶菌種子的影響[J].長(zhǎng)江蔬菜,2013,(22)∶79-82.

[12]李艷嫦,孔靜月,吳九玲,等.西瓜細(xì)菌性果斑病菌在不同場(chǎng)所存活期的檢測(cè)[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,(3)∶332-336.

Host Range Determination of Melon Fruit Blotch

CHANG Hui-hong,ZHANG Lu-sheng,WANG Xiao-meng,BA Xiu-cheng
(Binzhou Plant Protection Station of Shandong Province,Binzhou 256600,China)

Melon fruit spot disease seriously endanger the healthy development of the melon industry.In the paper,the author carry out the host range test through two ways,including field inoculation many blades and indoor bacterial suspension with different cucurbit seeds.The results showed that the watermelon,muskmelon,bitter gourd and other cucurbit crops were the host pathogen,wound and seed could make the host infected.

Melon fruit spot disease;artificial host

S436.42 S436.429

A

1008-1038(2017)04-0075-04

2017-02-19

?；奂t（1978—），女，農(nóng)藝師，從事農(nóng)作物病蟲害綜合防治工作