楊小軍 譚詠梅 田智慧 周婷 趙望泓 侯晉

1.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院口腔科；2.南方醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，廣州 510515

細(xì)菌感染影響牙周組織細(xì)胞表達(dá)環(huán)鳥(niǎo)苷-腺苷合成酶的實(shí)驗(yàn)研究

楊小軍1,2譚詠梅1,2田智慧1,2周婷1,2趙望泓1,2侯晉1,2

1.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院口腔科；2.南方醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，廣州 510515

目的 研究侵入牙周組織細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌對(duì)細(xì)胞表達(dá)環(huán)鳥(niǎo)苷-腺苷合成酶（cGAS）的影響。方法將SYTO9標(biāo)記的牙齦卟啉單胞菌（P. gingivalis）以感染復(fù)數(shù)（MOI）為10與人牙周膜細(xì)胞（hPDLCs）共培養(yǎng)24 h后，使用激光共聚焦顯微鏡觀察P. gingivalis對(duì)hPDLCs的侵襲情況，并應(yīng)用熒光標(biāo)記活細(xì)胞篩選（FACS）分選出被P. gingivalis入侵的hPDLCs，利用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）和Western blot對(duì)hPDLCs中cGAS的表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè)。此外還利用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)細(xì)菌感染性牙齦組織和正常牙齦組織中cGAS表達(dá)定位和表達(dá)水平變化進(jìn)行分析。結(jié)果激光共聚焦顯微鏡下觀察，P. gingivalis和hPDLCs共培養(yǎng)24 h后，幾乎所有的細(xì)胞內(nèi)都可觀察到綠色熒光；被P. gingivalis感染的hPDLCs中cGAS表達(dá)水平明顯上調(diào)；在牙齦組織中cGAS主要在上皮細(xì)胞和上皮下組織中的炎性細(xì)胞中表達(dá)；且細(xì)菌感染性的牙齦組織中cGAS的表達(dá)水平明顯高于正常牙齦組織。結(jié)論侵入hPDLCs內(nèi)的活體P. gingivalis，可以明顯上調(diào)細(xì)胞中cGAS的表達(dá)；且在細(xì)菌感染的炎性牙齦組織中cGAS的表達(dá)也明顯升高。該結(jié)果提示cGAS可能參與了牙周組織細(xì)胞中細(xì)菌來(lái)源的病原dsDNA的識(shí)別。

牙齦卟啉單胞菌； 人牙周膜細(xì)胞； 環(huán)鳥(niǎo)苷-腺苷合成酶； DNA感受器

固有免疫應(yīng)答是機(jī)體防御感染性疾病的第一道防線。在固有免疫過(guò)程中，宿主免疫細(xì)胞借助模式識(shí)別受體（pattern-recognition receptors，PRRs）迅速識(shí)別大量不同的病原體組分，通過(guò)激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，產(chǎn)生多種炎性細(xì)胞因子或Ⅰ型干擾素，發(fā)揮抗感染作用[1]。但是已有的大量研究[2]證明，過(guò)度的Ⅰ型干擾素反應(yīng)與炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生有著密切關(guān)系?，F(xiàn)有的研究[3]結(jié)果已表明，細(xì)菌所產(chǎn)生的核酸類病原相關(guān)的分子模式（pathogenassociated molecular patterns，PAMPs）在宿主固有免疫信號(hào)的激活上發(fā)揮著重要作用。

在牙周病的發(fā)病機(jī)制中，微生物雖然是牙周病的始動(dòng)因素，但是隨著病情的發(fā)展，最終造成牙周組織損傷的原因卻是由于過(guò)度的宿主免疫反應(yīng)。因此固有免疫的信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)是機(jī)體啟動(dòng)有效、適度的免疫應(yīng)答的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前有關(guān)牙周病免疫機(jī)制的研究多集中在細(xì)胞膜表面的Toll樣受體，如TLR2、TLR4，以及胞漿內(nèi)NOD樣受體，如NOD1和NOD2，這些可以識(shí)別細(xì)菌表面復(fù)合物如脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、肽聚糖和菌毛等PAMPs作用的受體上[4]，而細(xì)菌產(chǎn)生的核酸類PAMPs在牙周組織細(xì)胞中是被何種PRRs所識(shí)別的？關(guān)于這個(gè)問(wèn)題，還未有明確答案。近年來(lái)的研究[5]發(fā)現(xiàn)干擾素基因刺激因子（stimulator of interferon genes，STING）可被細(xì)菌、病毒等微生物產(chǎn)生的核酸分子，如DNA、RNA以及環(huán)二核苷酸（cyclic dinucleotides，CDNs）信號(hào)分子激活，促發(fā)Ⅰ型干擾素反應(yīng)。由于STING分子中并不存在DNA和RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，STING本身不太可能直接與DNA和RNA相互作用，而需要借助細(xì)胞內(nèi)其他PRRs[6]。目前并未發(fā)現(xiàn)一種在細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的胞內(nèi)DNA感受器（DNA sensor），因?yàn)椴煌腄NA Sensor所能識(shí)別的核酸分子不同，而且在不同的細(xì)胞中DNA Sensor的種類也不盡相同。

環(huán)鳥(niǎo)苷-腺苷合成酶（cyclic GMP-AMP synthase，cGAS），又稱為C6orf150或MB21D1，屬于核酸轉(zhuǎn)移酶家族成員，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的DNA感受器[7]。cGAS可通過(guò)鋅指結(jié)構(gòu)直接結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)的dsDNA或入侵細(xì)胞的病毒DNA上，利用三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）和三磷酸鳥(niǎo)苷（guanosine triphosphate，GTP），并由鎂離子介導(dǎo)，催化產(chǎn)生2’3’-cyclic GMP-AMP（cGAMP），cGAMP在細(xì)胞內(nèi)起到第二信使的作用，其具有獨(dú)特的磷酸二酯鍵可結(jié)合并活化下游的信號(hào)分子STING，通過(guò)STING依賴性的方式誘導(dǎo)TBK1、轉(zhuǎn)錄因子IRF3和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[8]。cGAS-cGAMP-STING信號(hào)通路是哺乳動(dòng)物胞漿DNA識(shí)別的基本機(jī)制[8]。轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)的外源性DNA或DNA病毒感染后，在cGAS功能缺陷（cGAS-/-）鼠的細(xì)胞，包括成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）均不能產(chǎn)生干擾素（interferon，IFN）和其他抗病毒細(xì)胞因子[9]。研究[9]發(fā)現(xiàn)，cGAS誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-β的數(shù)量級(jí)遠(yuǎn)多于其他DNA Sensor誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-β，表明cGAS是細(xì)胞質(zhì)的關(guān)鍵DNA Sensor。

cGAS作為宿主細(xì)胞胞漿內(nèi)的關(guān)鍵DNA Sensor，對(duì)侵入牙周膜細(xì)胞的牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，P. gingivalis）所產(chǎn)生的核酸類PAMPS，是否同樣存在著識(shí)別功能？對(duì)于這些問(wèn)題的答案目前仍是未知。本研究旨在研究P. gingivalis侵入細(xì)胞后，對(duì)牙周組織細(xì)胞中cGAS表達(dá)的影響，為進(jìn)一步探討細(xì)菌所產(chǎn)生的核酸類信號(hào)分子在牙周病免疫中的作用及其信號(hào)途徑奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)菌

P. gingivalis ATCC33277菌株（Microbiologics公司，美國(guó)）。

1.2 主要試劑和儀器

胰化酪蛋白大豆培養(yǎng)基（trypticase soy broth，TSB）、氯化血紅素、維生素K3（Sigma公司，美國(guó)），胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、DMEM培養(yǎng)基（Corning公司，美國(guó)），RNAiso Plus、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa公司，日本），熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒（Roche公司，瑞士），SYTO9（Invitrogen公司，美國(guó)），Alexa Fluor?594 Phalloidin（Molecular Probes公司，美國(guó)），Halt? Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail、RIPA Lysis and Extraction Buffer、Ultravision anti-rabbit免疫組化試劑盒（Thermo Fisher公司，美國(guó)），兔抗人C6orf150多克隆抗體（Abcam公司，英國(guó)），IRDye?680RD羊抗兔熒光二抗（Licor公司，德國(guó)）。

Anoxomat MarkⅡ厭氧微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)（MART公司，荷蘭），電子天平（Sartorius公司，德國(guó)），倒置相差顯微鏡及照相系統(tǒng)（Olympus公司，日本），流式細(xì)胞儀（BD FACSCalibur公司，美國(guó)），羅氏L480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Roche公司，瑞士），Odyssey近紅外成像系統(tǒng)（Licor公司，德國(guó)）。

1.3P. gingivalis的培養(yǎng)

將P. gingivalisATCC33277復(fù)蘇后接種于TSB羊血瓊脂培養(yǎng)基（含5%脫纖維羊血、5 mg·L-1氯化血紅素和1 mg·L-1維生素K3），37 ℃厭氧培養(yǎng)（80%N2、10%CO2、10%H2）。

1.4 人牙周膜細(xì)胞（human periodontal ligament cells，hPDLCs）的體外培養(yǎng)

經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及監(jiān)護(hù)人的知情同意后，樣本取自南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院口腔科12～25歲牙周組織健康，因正畸治療需要，減數(shù)拔除的前磨牙，牙齒拔出后立即放置于100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，冰上放置轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室，無(wú)菌PBS緩沖液沖洗3遍，無(wú)菌濕潤(rùn)條件下刮取根中1/3的牙周膜組織，利用組織塊酶消化法[10]原代培養(yǎng)人hPDLCs細(xì)胞。一般原代培養(yǎng)1周左右，可見(jiàn)細(xì)胞從組織塊周圍游出。待細(xì)胞生長(zhǎng)匯合達(dá)70%～80%時(shí)，進(jìn)行傳代、鑒定之后用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究。

1.5 體外感染實(shí)驗(yàn)

使用SYTO9按照產(chǎn)品說(shuō)明標(biāo)記P. gingivalis，以感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為10加入到hPDLCs中共培養(yǎng)24 h后，細(xì)胞用PBS清洗2次，4%多聚甲醛固定10 min，PBS洗滌，0.1%Triton透化處理10 min，PBS洗滌后，加入1%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）孵育20～30 min，滴加適宜濃度的Alexa Fluor?594 Phalloidin對(duì)細(xì)胞骨架中的絲狀肌動(dòng)蛋白（filamentous actin，F(xiàn)-actin）進(jìn)行染色，使用二氨基苯基吲哚（diamidino-phenyl-indole，DAPI）對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，激光共聚焦顯微鏡下觀察。

取第4～10代hPDLCs，將用SYTO9標(biāo)記的P. gingivalis，以MOI為10加入hPDLCs中共培養(yǎng)24 h，使用熒光標(biāo)記活細(xì)胞篩選（fluorescence-activated cell sorting，F(xiàn)ACS）分選出被感染的hPDLCs，常規(guī)培養(yǎng)。分別提取分選出的P. gingivalis感染細(xì)胞和作為對(duì)照組的未經(jīng)任何處理的正常hPDLCs細(xì)胞的總RNA和蛋白，用于后續(xù)的實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real time reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）和免疫印跡（Western blot）實(shí)驗(yàn)。

1.6 qRT-PCR

將收集的細(xì)胞用RNAiso Plus裂解，按照產(chǎn)品說(shuō)明提取總RNA。以總RNA為模板，使用PrimerScript RT reagent Kit試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。qRT-PCR檢測(cè)cGAS基因在對(duì)照組與P. gingivalis感染組hPDLCs中的表達(dá)。引物序列如下。cGAS上游引物序列：5’-ACATGGCGGCTATCCTTCTCT-3’，下游引物序列：5’-GGGTTCTGGGTACATACGTGAAA -3’，230 bp；磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH）上游引物序列：5’-ACAGTCAGCCGCATCTTCTT-3’，下游引物序列：5’-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3’，259 bp。反應(yīng)條件為：95 ℃ 5 min（預(yù)變性）；95 ℃ 10 s（變性）；60 ℃20 s（退火）；72 ℃ 20 s（延伸）；變性、退火、延伸共45個(gè)循環(huán)。

1.7 Western blot

將收集的細(xì)胞用含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液裂解，提取總蛋白，用BCA法定量，每個(gè)樣本以40 μg的總蛋白量進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE），將蛋白條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，5%脫脂奶粉-TBST封閉之后，1︰1 000稀釋的兔抗人C6orf150（cGAS/MB21D1）多克隆抗體4 ℃孵育過(guò)夜。TBST洗滌3次，每次5 min。1︰15 000稀釋IRDye?680RD羊抗兔熒光二抗室溫避光孵育1 h，TBST洗滌3次，每次5 min。Odyssey近紅外成像系統(tǒng)掃描成像。

1.8 免疫組織化學(xué)

經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者知情同意的情況下將臨床上因牙周治療需要切除的感染性牙齦組織以及因第三磨牙拔除需要切除的正常牙齦組織各3例，用4%多聚甲醛固定，乙醇梯度脫水，石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片。所得的切片二甲苯脫蠟梯度水化至水，PBS洗滌；枸櫞酸鈉緩沖液熱修復(fù)抗原，PBS洗滌；血清封閉，室溫20 min，去除多余血清，勿洗；滴加1︰50稀釋的兔抗人C6orf150（cGAS/MB21D1）多克隆抗體4 ℃過(guò)夜，PBS洗滌。滴加羊抗兔二抗37 ℃孵育15 min，PBS洗滌。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素37 ℃孵育15 min，PBS洗滌；DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡觀察并照相。以PBS代替一抗或二抗做陰性對(duì)照。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

qRT-PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCT法進(jìn)行處理。用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，采用雙側(cè)性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1P. gingivalis感染hPDLCs

以MOI為10的P. gingivalis感染hPDLCs 24 h后，激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察可見(jiàn)：被SYTO9標(biāo)記的、呈現(xiàn)綠色熒光的P. gingivalis主要位于hPDLCs的胞漿內(nèi)，且主要分布在核周，而且?guī)缀跛械募?xì)胞內(nèi)都可觀察到綠色熒光（圖1）。

2.2P. gingivalis對(duì)hPDLCs表達(dá)cGAS的影響

以MOI為10的P. gingivalis感染hPDLCs 24 h后，qRT-PCR的結(jié)果顯示：被P. gingivalis感染的hPDLCs中cGAS的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.001）（圖2上）。應(yīng)用Western blot對(duì)該結(jié)果進(jìn)行了蛋白水平的驗(yàn)證。Western blot的結(jié)果同樣顯示，被P. gingivalis感染的hPDLCs中cGAS的表達(dá)水平高于對(duì)照組（圖2下）。

圖1 P. gingivalis侵入hPDLCs細(xì)胞24 h 激光掃描共聚焦顯微鏡 × 600Fig1 P. gingivalis invade hPDLCs after co-culture for 24 h laser scanning confocal microscope × 600

圖2 侵入hPDLCs的P. gingivalis上調(diào)細(xì)胞中cGAS的表達(dá)Fig2 Cytosolic P. gingivalis upregulates cGAS in hPDLCs

2.3 感染性牙齦組織中cGAS表達(dá)的變化

在牙齦組織中，cGAS主要在上皮細(xì)胞中表達(dá)，而且cGAS的表達(dá)水平在感染性牙齦組織（圖3A）中明顯高于正常牙齦組織（圖3C）；此外，在感染性的牙齦組織中，由于上皮下有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，因此還可以觀察到cGAS在上皮下炎癥細(xì)胞中同樣有表達(dá)（圖3B），而正常牙齦組織的上皮下只有少量炎性細(xì)胞，因此其上皮下cGAS的表達(dá)水平同樣低于炎性牙齦組織（圖3D）。

圖3 cGAS在炎性牙齦組織和正常牙齦組織中的表達(dá) 免疫組織化學(xué)Fig3 The expression of cGAS in inflammatory gingival tissues and normal gingival tissues immunohistochemistry

3 討論

在牙周病的發(fā)病機(jī)制中，最終造成牙周組織損傷的原因是過(guò)度的宿主免疫反應(yīng)。齦下菌斑中的微生物所產(chǎn)生的各個(gè)組分對(duì)宿主免疫的調(diào)節(jié)與牙周疾病的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系，目前有關(guān)牙周病免疫機(jī)制的研究多集中在細(xì)胞膜表面的Toll樣受體及胞漿內(nèi)的NOD樣受體，這些可以與細(xì)菌表面PAMPs作用的受體所引發(fā)的核因子活化B細(xì)胞κ輕鏈增強(qiáng)子、絲裂原活化蛋白激酶等信號(hào)通路的激活上[4]，而關(guān)于細(xì)菌所產(chǎn)生的核酸分子在牙周病免疫反應(yīng)中的作用迄今為止尚未明晰。

cGAS作為一種新型的胞質(zhì)DNA感受器，能時(shí)刻監(jiān)視細(xì)胞質(zhì)中不正常的DNA入侵或者積累[11]。胞外的核酸類PAMPs無(wú)法直接進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)激活機(jī)體的免疫反應(yīng)，但入侵到細(xì)胞內(nèi)的病毒和細(xì)菌都可將核酸類PAMPs攜帶至胞內(nèi)，病毒和細(xì)菌來(lái)源的病原dsDNA都能激活cGAS從而誘導(dǎo)IFN以及其他炎癥因子的產(chǎn)生[11]。P. gingivalis不但可分泌大量的毒力因子對(duì)牙周組織產(chǎn)生破壞作用，而且還可侵入到上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及成骨細(xì)胞等宿主細(xì)胞內(nèi)[12]。本研究中用P. gingivalis感染hPDLCs，用熒光標(biāo)記和激光掃描共聚焦成像，檢測(cè)到P. gingivalis入侵到了hPDLCs內(nèi)。

FACS是一種很好的純化表型已知細(xì)胞群的方法。雖然前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明P. gingivalis與hPDLCs共培養(yǎng)24 h后，其侵襲效率超過(guò)90%[13]，但在本研究中仍使用FACS將被P. gingivalis入侵的細(xì)胞篩選出來(lái)，使得研究對(duì)象純度更高，具有單一性。

本研究結(jié)果顯示被P. gingivalis侵入的hPDLCs中cGAS的表達(dá)在mRNA和蛋白水平上明顯上調(diào)，而且在細(xì)菌感染性牙齦組織中cGAS的表達(dá)也明顯高于正常牙齦組織。微生物入侵牙周組織細(xì)胞，可同時(shí)將DNA、RNA以及CDNs信號(hào)分子也攜帶進(jìn)入細(xì)胞，cGAS作為胞漿內(nèi)的DAN感受器，能夠監(jiān)視病原微生物攜帶進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)的核酸類PAMPs，從而激活Ⅰ型干擾素反應(yīng)[11]。研究[2]證明，過(guò)度的Ⅰ型干擾素反應(yīng)與炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生有著密切關(guān)系。細(xì)菌感染后，牙周組織細(xì)胞中cGAS的表達(dá)升高，是否意味著Ⅰ型干擾素反應(yīng)的激活？以及牙周致病微生物所攜帶的核酸類PAMPs是否也參與了牙周組織損傷？有關(guān)問(wèn)題仍有待于進(jìn)一步的研究。

本研究結(jié)果提示，在牙周炎的發(fā)病過(guò)程中，一些可以入侵到宿主細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌，如P. gingivalis等，可將核酸類的PAMPs帶入宿主細(xì)胞內(nèi)，而cGAS可能參與了這些細(xì)菌來(lái)源的病原dsDNA的識(shí)別。

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（本文編輯 杜冰）

Effects of cytosolic bacteria on cyclic GMP-AMP synthase expression in human gingival tissues and periodontal liga- ment cells

Yang Xiaojun1,2, Tan Yongmei1,2, Tian Zhihui1,2, Zhou Ting1,2, Zhao Wanghong1,2, Hou Jin1,2. (1. Dept. of Stomatology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2. College of Stomatology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China)

Objective This work aims to determine the effect of cytosolic bacteria on the expression of cyclic GMP-AMP synthase (cGAS) in human periodontal ligament cells (hPDLCs) and gingival tissues.MethodsThe ability ofPorphyromonas gingivalis(P. gingivalis) to invade hPDLCs was detected using laser scanning confocal microscope assay at a multiplicity of infection of 10.P. gingivalis-infected cells were sorted by fluorescence-activated cell sorting (FACS). Then, quantitative real time reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) and Western blot were used to detect cGAS expression in infected cells. Finally, the location and expression of cGAS in inflammatory and normal gingival tissues were investigated by immunohistochemistry.ResultsP. gingivalisactively invaded hPDLCs. Moreover, cGAS expression significantly increased inP. gingivalis-infected cells. Although cGAS was expressed in the epithelial and subepithelial cells of both inflamed and normal gingival tissues, cGAS expression significantly increased in inflamed gingival tissues.ConclusionCytosolic bacteria can upregulate cGAS expression in infected cells. These data suggest that cGAS may act as pattern-recognition receptors and participate in recognizing cytosolic nucleic acid pathogen-associated molecular patterns.

Porphyromonas gingivalis; human periodontal ligament cells; cyclic GMP-AMP synthase; DNA sensor

Q 26

A

10.7518/hxkq.2017.02.018

Supported by: The National Natural Science Foundation of China (81500870); President Foundation of Nanfang Hospital, Southern Medical University (2013C017). Correspondence: Hou Jin, E-mail: houjin@smu.edu.cn.

2016-09-30；

2016-12-27

國(guó)家自然科學(xué)基金（81500870）；南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院院長(zhǎng)基金（2013C017）

楊小軍，講師，博士，E-mail：yxj_den@163.com

侯晉，副教授，博士，E-mail：houjin@smu.edu.cn