王鳳英，黃路圣，徐康，葉林華，黃云，肖飛

（揚(yáng)州大學(xué)附屬泰興醫(yī)院兒科，江蘇 泰興 225400）

正五聚蛋白3在兒童過敏性紫癜中的表達(dá)

王鳳英，黃路圣，徐康，葉林華，黃云，肖飛

（揚(yáng)州大學(xué)附屬泰興醫(yī)院兒科，江蘇 泰興 225400）

目的 檢測(cè)過敏性紫癜（HSP）患兒外周血正五聚蛋白3（PTX3）、白細(xì)胞介素8（IL?8）、腫瘤壞死因子α（TNF?α）、超敏C反應(yīng)蛋白（hs?CRP）的表達(dá)，探討PTX3表達(dá)在HSP患兒中的意義。方法 選取HSP患兒36例（HSP組）和健康兒童17例（對(duì)照組）作為研究對(duì)象。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清PTX3、IL?8、TNF?α水平，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清hs?CRP水平。結(jié)果HSP組急性期外周血PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP的水平均較對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；HSP組伴有關(guān)節(jié)和（或）消化道癥狀和（或）腎臟受累的患兒PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP表達(dá)水平較僅有皮膚受累的患兒增高（均P＜0.05）。HSP患兒PTX3表達(dá)水平與IL?8、TNF?α的表達(dá)呈正相關(guān)（r分別為0.514、0.833，均P＜0.05），PTX3與hs?CRP表達(dá)無相關(guān)性（r=0.292，P＞0.05）。HSP患兒PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP表達(dá)均無性別差異（均P＞0.05）。結(jié)論 PTX3高表達(dá)與HSP患兒炎癥反應(yīng)程度有關(guān)，PTX3可能在HSP發(fā)病中起重要作用。

正五聚蛋白3；白細(xì)胞介素8；腫瘤壞死因子α；超敏C反應(yīng)蛋白；過敏性紫癜；兒童

過敏性紫癜（Henoch?Sch?nlein purpura，HSP）是一種IgA介導(dǎo)的白細(xì)胞碎裂性小血管炎，是兒童血管炎最常見類型。2012年6月Chapel Hill會(huì)議提出將HSP更名為IgA血管炎，分類上屬于小血管炎下的免疫復(fù)合物性血管炎。研究［1］認(rèn)為HSP發(fā)病是多種因素綜合作用的結(jié)果，在環(huán)境因素、個(gè)體遺傳等作用下HSP引起機(jī)體免疫功能紊亂，產(chǎn)生多種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)、抗體等，引起全身小血管的損傷和炎癥。其中細(xì)胞因子是HSP發(fā)病中重要的因素之一。盡管對(duì)HSP發(fā)病機(jī)制既往有多種研究，但迄今為止，HSP確切的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚［2］。正五聚蛋白3（pentraxin3，PTX3）為新型的炎性細(xì)胞因子，與C反應(yīng)蛋白（C?reactive protein，CRP）在結(jié)構(gòu)功能上具有同源性，同屬于正五聚蛋白家族。PTX3作為一種可識(shí)別多種外源性物質(zhì)的急性相反應(yīng)蛋白，在固有免疫、炎癥調(diào)節(jié)、基質(zhì)沉積、血管重塑、妊娠中均發(fā)揮重要作用［3?4］，研究［5?7］發(fā)現(xiàn)在許多心血管疾病、免疫性疾病、急慢性腎臟損傷、膿毒血癥等多種疾病中PTX3表達(dá)增高，認(rèn)為可作為一種炎癥標(biāo)志物。超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitivi?ty C?reactive protein，hs?CRP）是使用高敏感的檢測(cè)方法檢測(cè)到的低濃度CRP，在HSP急性期CRP等反映炎癥的指標(biāo)可增高。白細(xì)胞介素8（interlukin?8，IL?8）和腫瘤壞死因子α（tumornecrosisfactor?α，TNF?α）是研究較成熟的炎性細(xì)胞因子，在很多炎癥性疾病中表達(dá)增高。本研究通過檢測(cè)HSP患兒血PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP的表達(dá)水平，分析PTX3與IL?8、TNF?α、hs?CRP的相關(guān)性，旨在探討PTX3在兒童HSP發(fā)病過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

HSP診斷符合2013年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)免疫學(xué)組制定的兒童HSP循證診治建議［8］。HSP患兒（HSP組）均為初次發(fā)病，病程在3 d內(nèi)；受檢前4周內(nèi)未使用任何糖皮質(zhì)激素或細(xì)胞毒性藥物；除外伴有其他內(nèi)科疾病或HSP暫不能確診者。對(duì)照組兒童為正常健康體檢兒童，既往無過敏性疾病病史，4周內(nèi)未使用任何糖皮質(zhì)激素或細(xì)胞毒性藥物，采血前24 h無用藥史，性別、年齡與HSP患兒相匹配。本研究經(jīng)我院醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象家長(zhǎng)均知情同意。HSP組患兒36例，男21例，女15例，平均年齡（7.8±3.2）歲，僅有皮膚損害8例（單純型），伴有皮膚外的臟器損害28例（混合型，其中有23例伴有關(guān)節(jié)癥狀，16例伴消化道癥狀，5例伴腎臟損害）。對(duì)照組兒童17例，男10例，女7例，平均年齡（7.5±2.5）歲。2組兒童的年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.19，P=0.871；χ2=0.01，P= 0.931）。

1.2 標(biāo)本采集

HSP患兒入院當(dāng)日或次日清晨采集空腹外周靜脈血4 mL，對(duì)照組體檢日采集空腹外周靜脈血4 mL，離心取血清，-80℃冰箱保存待測(cè)PTX3、IL?8、TNF?α含量。同時(shí)用臨床免疫管采集外周血測(cè)定hs?CRP。

1.3 血清PTX3、IL?8、TNF?α檢測(cè)

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清PTX3、IL?8、TNF?α水平，試劑盒購自Elabscience公司，按照儀器操作規(guī)程和試劑盒說明書要求進(jìn)行，嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少誤差。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)，OD值作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)方程，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算出每個(gè)樣本的濃度。

1.4 血清hs?CRP含量檢測(cè)

應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清hs?CRP，嚴(yán)格按照操作程序完成定標(biāo)和檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以表示，2組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)進(jìn)行指標(biāo)間相關(guān)性的分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP水平比較

HSP患兒血清PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP水平均較對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。臨床表現(xiàn)不同的HSP患兒中，混合型HSP患兒PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP表達(dá)均較單純型增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。不同性別HSP患兒PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

2.2 HSP組PTX3與IL?8、TNF?α、hs?CRP的相關(guān)性分析

HSP患兒PTX3與IL?8、TNF?α的表達(dá)相關(guān)（r分別為0.514、0.833，P分別為0.01、＜0.001）；PTX3和hs?CRP的表達(dá)不相關(guān)（r=0.292，P=0.166）。

表1 HSP組和對(duì)照組PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP表達(dá)水平的比較Tab.1 Comparison of expression levels of PTX3，IL?8，TNF?α and hs?CRP between HSP group and control group

表2 不同臨床表現(xiàn)的HSP患兒PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP表達(dá)水平的比較Tab.2 Comparison of expression levels of PTX3，IL?8，TNF?α and hs?CRP between patients with different clinical feature

表3 不同性別的HSP患兒PTX3、IL?8、TNF?α、hs?CRP表達(dá)水平的比較Tab.3 Comparison of expression levels of PTX3，IL?8，TNF?α and hs?CRP between different gender

3 討論

PTX3是由BREVIARIO等［9］研究發(fā)現(xiàn)的一種長(zhǎng)鏈五聚體蛋白，為長(zhǎng)PTXs成員之一，分子量為（40～50）×103，又稱腫瘤壞死因子刺激基因14。PTX3一般情況下在正常人血清和組織中表達(dá)很低，接受到TNF?α、IL?1β等細(xì)胞因子、Toll樣受體激動(dòng)劑、脂多糖等炎癥信號(hào)時(shí)，單核巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、樹枝狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞均可合成，其合成受IL?1及TNF的調(diào)節(jié)；PTX3作為多功能模式識(shí)別受體，在進(jìn)化上高度保守，在體內(nèi)具有多種生物學(xué)效應(yīng)，可清除微生物、活化補(bǔ)體、結(jié)合P?選擇素、減輕炎癥部位的白細(xì)胞募集，參與免疫防御、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和血管再生、女性生殖生育的調(diào)節(jié)等［3?6，10］。

PTX3是一種多功能蛋白，在許多疾病中發(fā)揮不同的作用。有研究［11?13］認(rèn)為在自身免疫性疾病和炎癥中，患者血清中的PTX3水平與其疾病的活動(dòng)性和治療的反應(yīng)性相關(guān)；在血管炎中，PTX3不僅參與了血管炎癥反應(yīng)，且其血漿水平可以反映血管炎癥的活動(dòng)性。YüKSEL等［14］研究認(rèn)為HSP患者血清PTX3增高和皮膚IgM沉積預(yù)示腎臟受累。GE等［15］研究認(rèn)為PTX3在兒童HSP的多系統(tǒng)血管受累中起重要作用，參與了紫癜性腎炎的發(fā)生，可作為兒童過敏性紫癜型腎炎的早期預(yù)測(cè)因子。本研究發(fā)現(xiàn)PTX3在兒童HSP血清中表達(dá)增高，且伴有關(guān)節(jié)和（或）消化道癥狀和（或）腎臟受累的患兒較僅有皮膚受累的患兒其血清PTX3的增高程度更明顯，提示PTX3參與了兒童HSP的發(fā)病，PTX3增高明顯者更易出現(xiàn)皮膚外的其他系統(tǒng)受累，說明其血漿水平可以反映血管炎癥的程度和累及范圍，同以往研究［15］結(jié)果一致。在本研究中未發(fā)現(xiàn)HSP患兒存在PTX3性別表達(dá)差異。

本研究發(fā)現(xiàn)IL?8、TNF?α在兒童HSP血清中表達(dá)增高，在伴有關(guān)節(jié)和（或）消化道癥狀和（或）腎臟受累的患兒較僅有皮膚受累的患兒上述因子血清水平的增高程度更明顯，與既往研究［16］結(jié)果一致，提示IL?8、TNF?α參與了HSP的發(fā)病。相關(guān)分析表明，PTX3和TNF?α高度相關(guān)，和IL?8呈中等程度相關(guān)。PTX3合成受IL?1、TNF?α等炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)［9］，TNF?α可上調(diào)PTX3的表達(dá)［17］，本研究顯示PTX3和TNF?α表達(dá)均增高，呈兩者高度相關(guān)，認(rèn)為HSP患兒PTX3和TNF?α交互作用，相互促進(jìn)，從而加重HSP的小血管炎癥反應(yīng)。本研究中PTX3和IL?8存在相關(guān)，故認(rèn)為PTX3和IL?8之間亦可能存在相互作用。

研究［18］表明CRP本身也是促炎癥介質(zhì)，具有激活補(bǔ)體，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞活性、參與細(xì)胞凋亡、參與炎癥反應(yīng)等過程，其水平高低與炎癥反應(yīng)的程度有關(guān)。本研究HSP組hs?CRP水平顯著高于對(duì)照組，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［19］，且伴有關(guān)節(jié)、和（或）消化道癥狀和（或）腎臟受累的患兒較僅有皮膚受累的患兒hs?CRP表達(dá)水平亦增高，提示HSP患兒體內(nèi)高濃度hs?CRP可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，直接參與HSP的發(fā)病。在本研究中PTX3和hs?CRP均增高，但相關(guān)分析表明PTX3與hs?CRP無明顯相關(guān)性，但與IL?8、TNF?α等炎性細(xì)胞因子存在相關(guān)性，故認(rèn)為PTX3可能獨(dú)立于CRP，直接參與了HSP的血管炎癥反應(yīng)。hs?CRP在促炎癥介質(zhì)的誘導(dǎo)下由肝臟分泌，而PTX3主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，故有學(xué)者［13，20］推測(cè)PTX3水平更能反映脈管系統(tǒng)的炎癥狀態(tài)，是更好的血管炎癥預(yù)測(cè)因子，具有更高的特異性，本研究支持上述結(jié)果。

HSP病理變化是以毛細(xì)血管炎為主的廣泛的白細(xì)胞碎裂性小血管炎，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、腫脹。一些導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷的因子作用于具有遺傳背景的個(gè)體，導(dǎo)致TNF?α、IL?8等炎性細(xì)胞因子釋放，從而介導(dǎo)PTX3的表達(dá)，PTX3表達(dá)增高后進(jìn)一步促進(jìn)TNF?α、IL?8等表達(dá)，這些因子相互作用又進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮系統(tǒng)受損，引起全身小血管的損傷和炎癥。PTX3可望成為一種不同于CRP的新的生物學(xué)標(biāo)志物用于臨床診斷、評(píng)定疾病活動(dòng)性和嚴(yán)重性，但其敏感性和特異性等問題還需要進(jìn)一步研究。

致謝：感謝本院檢驗(yàn)科蔡波主任，臨床實(shí)驗(yàn)室葉婷老師在本研究中給予的幫助。

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（編輯 武玉欣）

Expression of Pentraxin 3 in Children with Henoch?Sch?enlein Purpura

WANG Fengying，HUANG Lusheng，XU Kang，YE Linhua，HUANG Yun，XIAO Fei
（Department of Pediatrics，The Affiliated Taixing Hospital of Yangzhou University，Taixing 225400，China）

Objective Henoch?Sch?nlein purpura（HSP）is a common multisystemic vasculitis in children，but the exact pathogenesis remains unknown.Pentraxin 3（PTX3），a new kind of inflammatory cytokines，has a strong inflammatory effect，and is involved in occurrence and develop?ment of a variety of autoimmune diseases.The objective of this study is to evaluate the expression of PTX3，interleukin?8（IL?8），tumor necrosis fac?tor?α（TNF?α）and high sensitivity C?reactive protein（hs?CRP）in children with HSP，and explore the clinical significance of PTX3 in HSP devel?opment.Methods Thirty?six children（HSP group）and 17 healthy children（control group）were enrolled in the study.Serum levels of PTX3，IL?8 and TNF?α were detected by enzyme?linked immunosorbent assay.Serum hs?CRP levels were measured by automatic biochemical analyzer.Re?sults The serum levels of PTX3，IL?8，TNF?α，and hs?CRP were up?regulated in HSP group compared with the control group（P＜0.05）.The levels of PTX3，IL?8，TNF?α，and hs?CRP in patients with joint symptoms，or/and gastrointestinal symptoms，or/and kidney injury were significant?ly higher than those patients without joint symptoms，or/and gastrointestinal symptoms，or/and kidney injury（P＜0.05）.The expression of PTX3 was positively correlated with the expression of IL?8 and TNF?α（r=0.514，0.833，allP＜0.05），but there was no correlation between PTX3 and hs?CRP（r=0.292，P＞0.05）.The expression of PTX3，IL?8，TNF?α and hs?CRP in HSP patients had no gender difference（allP＞0.05）.Con?clusion The high expression of PTX3 is related to the degree of inflammation in children with HSP.The up?regulated expression of PTX3 may play an important role in pathogenesis of HSP in children.

pentraxin 3；interleukin?8；tumor necrosis factor?α；hypersensitive C?reactive protein；Henoch?Sch?nlein purpura；chil?dren

R725.9

A

0258-4646（2017）02-0156-04

10.12007/j.issn.0258?4646.2017.02.014

王鳳英（1975-），女，副主任醫(yī)師，碩士. E-mail：wfy6699@163.com

2016-05-11

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