葉 金，吳 宇，辛媛媛，周明慧，謝 剛，王松雪

(國(guó)家糧食局科學(xué)研究院，北京 100037)

超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜快速精準(zhǔn)測(cè)定糧食中多種真菌毒素

葉 金，吳 宇，辛媛媛，周明慧，謝 剛，王松雪*

(國(guó)家糧食局科學(xué)研究院，北京 100037)

采用直接提取稀釋的快速前處理方法，結(jié)合穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù)，利用超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜，建立了糧食中16種真菌毒素的快速精準(zhǔn)分析方法。樣品采用乙腈-水-乙酸溶液(70∶29∶1,體積比)提取，以C18色譜柱進(jìn)行色譜分離，通過(guò)全掃描模式進(jìn)行定量檢測(cè)，并采用穩(wěn)定同位素稀釋以減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量分析的影響。結(jié)果表明，16種真菌毒素在一定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.999，4種常見(jiàn)糧食基質(zhì)(小麥、玉米、大米、大麥)的限量濃度水平的加標(biāo)回收率(n=6)為75.3%～123.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%～14.7%。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，適用于糧食中真菌毒素的檢測(cè)，可滿(mǎn)足日常監(jiān)測(cè)工作的需要。

真菌毒素；高分辨質(zhì)譜；糧食；穩(wěn)定同位素稀釋

真菌毒素是由真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，常見(jiàn)的真菌毒素包括黃曲霉毒素(Aflatoxin,AF)、嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)、伏馬毒素(Fumonisin,FB)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、T-2毒素(T-2 toxin,T2)和HT-2毒素(HT-2 toxin,HT-2)，廣泛存在于各種糧油及其制品中。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織估計(jì)，全世界谷物供應(yīng)鏈的25%受到真菌毒素的污染，對(duì)人體和動(dòng)物的健康具有極大危害。全世界已有100多個(gè)國(guó)家規(guī)定了糧食中主要真菌毒素的限量[1]，其中歐盟已制定了DON,ZEN,AF,FB,OTA,T2和HT-2等真菌毒素的法規(guī)限量和推薦限量[2-3]，我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定谷物的DON限量為1 000 μg/kg，ZEN限量為60 μg/kg，黃曲霉毒素B1(AFB1)限量為5～20 μg/kg，OTA限量為5 μg/kg[4]。為了更好地加強(qiáng)對(duì)糧食中真菌毒素的監(jiān)測(cè)，保障人畜健康，開(kāi)發(fā)快速、高通量、前處理簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的真菌毒素檢測(cè)方法具有非常重要的意義。

目前，真菌毒素的檢測(cè)方法主要包括酶聯(lián)免疫試劑盒法[5]、膠體金試紙條法[6-7]、免疫親和柱凈化液相色譜法[8-9]和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[10-13]。其中酶聯(lián)免疫試劑盒和膠體金試紙條法均屬于快速檢測(cè)方法，其優(yōu)勢(shì)在于方法簡(jiǎn)單、便捷、快速，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員與實(shí)驗(yàn)條件要求不高，可用于樣品的快速篩查及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，但方法的準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性相對(duì)較差?；诿庖哂H和柱凈化的液相色譜法是目前真菌毒素檢測(cè)的主流方法，該方法具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，定量準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，但由于需使用免疫親和柱凈化，對(duì)于多目標(biāo)毒素的檢測(cè)能力有限，還存在著免疫親和柱費(fèi)用較高，結(jié)果假陽(yáng)性等缺點(diǎn)[14]。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有靈敏度高和抗干擾能力較強(qiáng)等特點(diǎn)，因此可以采用較為簡(jiǎn)單的前處理方法。常用的前處理凈化方法有固相萃取法[15-17]和QuEChERS法[18-19]，隨著儀器特異性和靈敏度的不斷提高，無(wú)需凈化的方法也開(kāi)始出現(xiàn)[20-21]，進(jìn)一步降低了樣品前處理時(shí)間和成本。

四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀(Q-Exactive)具有分辨率高及定量能力好的優(yōu)點(diǎn)，不同于三重四極桿低分辨質(zhì)譜使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式通過(guò)目標(biāo)物的離子對(duì)進(jìn)行定量分析，高分辨質(zhì)譜可以利用目標(biāo)物母離子的精確分子量直接定量，無(wú)需對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù)，對(duì)于多目標(biāo)物分析可以極大地降低檢測(cè)方法的時(shí)間，同時(shí)又能很好地避免低分辨質(zhì)譜易受基質(zhì)干擾而產(chǎn)生假陽(yáng)性的現(xiàn)象[22]。目前基于Q-Exactive的檢測(cè)方法已在多個(gè)領(lǐng)域中得到快速發(fā)展和應(yīng)用[23-27]。

本研究利用無(wú)需凈化的直接提取稀釋前處理方法，有效避免了凈化過(guò)程中目標(biāo)物的損失，減少了前處理時(shí)間及成本，通過(guò)高分辨質(zhì)譜很大程度上降低了檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性，并利用穩(wěn)定同位素稀釋技術(shù)降低了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量分析的影響。本文通過(guò)優(yōu)化儀器條件，建立了快速檢測(cè)糧食中16種真菌毒素的方法，為有效監(jiān)測(cè)糧食中真菌毒素種類(lèi)和含量提供了有力的技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、3-乙?；撗跹└牭毒┐?3-AcDON)、15-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(15-AcDON)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(DON-3G)、T-2毒素(T-2)、HT-2毒素(HT-2)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素A(OTA)、伏馬毒素B1(FB1)、伏馬毒素B2(FB2)、雜色曲霉毒素(ST)標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為0.2～20 μg/mL，Romer公司)；黃曲霉毒素B1(AFB1)、黃曲霉毒素B2(AFB2)、黃曲霉毒素G1(AFG1)、黃曲霉毒素G2(AFG2)標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為0.03～1.0 μg/mL，Sigma-Aldrich公司)；13C標(biāo)記的黃曲霉毒素(B1，B2，G1，G2)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏馬毒素(B1，B2)、T-2毒素、HT-2毒素、雜色曲霉毒素的14種穩(wěn)定同位素標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為0.01～2.5 μg/mL，Romer公司)；甲醇、乙腈(HPLC級(jí)，F(xiàn)isher公司)；乙酸銨、甲酸、乙酸(HPLC級(jí)，美國(guó)Sigma公司)；0.2 μm PTFE膜針頭過(guò)濾器(PALL公司)；實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀Q-Exactive(ThermoFisher Scientific公司)；UltiMate 3000快速液相色譜儀(ThermoFisher Scientific公司)；3-30K離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司)；GT10-1 高速臺(tái)式離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司)；Roto-Shake Genie 多用途旋轉(zhuǎn)搖床(美國(guó)Scientific Industries公司)；Milli-Q超純水純化系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司)，渦旋振蕩器(德國(guó)IKA公司)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別移取一定體積的16種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到16種真菌毒素的混標(biāo)儲(chǔ)備液，于-20 ℃保存，濃度詳見(jiàn)表1。

穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液：根據(jù)表1相應(yīng)的穩(wěn)定同位素混合溶液的濃度，分別移取一定體積的14種真菌毒素穩(wěn)定同位素單標(biāo)溶液于4 mL儲(chǔ)液瓶中，用水稀釋至2 mL配制穩(wěn)定同位素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分混勻后于-20 ℃避光保存。準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液適量，用乙腈-水-乙酸溶液(35∶64.5∶0.5)逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥刹煌瑵舛认盗械幕旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液。向400 μL內(nèi)插管中加入20 μL 14種穩(wěn)定同位素混合工作液，再分別吸取180 μL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液于內(nèi)插管中，渦旋混勻后準(zhǔn)備上機(jī)檢測(cè)。

表1 真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度及相應(yīng)的穩(wěn)定同位素混合溶液Table 1 Concentrations of the standard stock solutions of mycotoxins and related stable isotope standard solutions

-:no data

1.4 樣品處理

樣品經(jīng)粉碎(90%通過(guò)40目篩)混勻后，準(zhǔn)確稱(chēng)取5.00 g，加入20 mL乙腈-水-乙酸(70∶29∶1)混合溶劑，渦旋混勻1 min，振蕩30 min后，以4 000 r/min離心10 min使固液分離。準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移0.5 mL上清液于1.5 mL離心管中，加入0.5 mL水稀釋?zhuān)瑴u旋混勻1 min，然后于12 000 r/min離心10 min，取上清液用0.22 μm的PTFE濾膜過(guò)濾，吸取20 μL預(yù)先渦旋混勻的穩(wěn)定同位素混合溶液于400 μL內(nèi)插管中，再加入180 μL的樣品濾液，混合后待測(cè)。

1.5 儀器條件

液相色譜條件：Waters 公司CORTECSTM UPLC C18柱(100 mm×2.1 mm，1.6 μm)；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量2 μL。流動(dòng)相：A為甲醇，B為含0.1%(體積分?jǐn)?shù))的甲酸和1 mmol/L乙酸銨的水溶液，流速：0.3 mL/min。梯度洗脫條件：0～2 min,90% B；2～3 min,90% ～80% B；3～4 min,80%～79% B；4～5 min,79%～74% B；5～7 min,74% B；7～10.5 min,74% ～40% B；10.5～13.5 min,40% B；13.5～14.5 min,40%～5% B；14.5～17 min,5% B；17～18 min,5% ～90% B；18～21 min,90% B。

質(zhì)譜條件：加熱電噴霧離子源(HESI)溫度為300 ℃；毛細(xì)管電壓為3.2 kV；離子傳輸管溫度為320 ℃；鞘氣為35 unit，輔助氣為10 unit。full scan/ddms2掃描模式：采集范圍為200～800 Da，正離子采集；一級(jí)質(zhì)譜分辨率為70 000 FWHM，二級(jí)質(zhì)譜分辨率為17 500 FWHM；碰撞池能量(NCE)為35 eV。

2 結(jié)果與討論

2.1 真菌毒素的選擇

本研究選擇的16種真菌毒素目標(biāo)物涵蓋了我國(guó)食品安全限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及歐盟已制定限量法規(guī)的真菌毒素及其相關(guān)的衍生物。

圖1 直接提取稀釋方法與商品化的多毒素凈化方法(MycoSpin 400)對(duì)于目標(biāo)毒素回收率(n=3)結(jié)果Fig.1 Recoveries of mycotoxins purified with direct extract and MycoSpin 400 methods

2.2 前處理方法的選擇

由于真菌毒素的理化性質(zhì)相差較大，常見(jiàn)的凈化方法容易造成毒素的損失。鄭翠梅等[15]在研究中發(fā)現(xiàn)使用MycoSep 226多功能凈化柱時(shí)，會(huì)吸附FBs，DON糖苷化衍生物和OTA等毒素。此外，由于凈化方法步驟較多，不利于大批量樣品的快速處理。近年來(lái)隨著質(zhì)譜儀器抗干擾能力及靈敏度的不斷提升，直接提取且無(wú)需凈化的方法被越來(lái)越多的使用。圖1為直接提取稀釋法與商品化的多毒素凈化填料(MycoSpin 400)凈化方法對(duì)16種目標(biāo)毒素的回收率，MycoSpin 400前處理方法按照其產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果顯示，MycoSpin 400對(duì)于DON-3G，F(xiàn)B1，F(xiàn)B2，OTA 4種真菌毒素的回收率不高，主要由于該凈化填料對(duì)于這些毒素有一定的吸附，會(huì)導(dǎo)致凈化過(guò)程中目標(biāo)毒素的損失，影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性，而直接提取稀釋法由于無(wú)需凈化步驟，避免了該過(guò)程中目標(biāo)物的損失，對(duì)于所有目標(biāo)毒素的回收率均在91%～113%之間。因此，直接提取稀釋法更適合于多種真菌毒素的快檢前處理，而且處理過(guò)程更加簡(jiǎn)單、快捷。

圖2 16種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的色譜圖Fig.2 Chromatogram of 16 mycotoxins mixed standard solution 1.NIV，2.DON，3.DON-3G，4.3-AcDON，5.15-AcDON，6.AFG2，7.AFG1，8.AFB2，9.AFB1，10.HT-2，11.FB1，12.T-2，13.ZEN，14.OTA，15.ST，16.FB2

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

由于本方法前處理采用直接提取稀釋法，樣品中會(huì)存在一定的基質(zhì)效應(yīng)干擾。本實(shí)驗(yàn)對(duì)常見(jiàn)的4種糧食基質(zhì)進(jìn)行了考察，并以目標(biāo)物在空白基質(zhì)液中的峰面積與溶劑中峰面積的百分比來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)結(jié)果接近100%時(shí)，表明無(wú)明顯的基質(zhì)效應(yīng)，而高于100%說(shuō)明有基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，低于100%則說(shuō)明有基質(zhì)抑制效應(yīng)。16種真菌毒素在4種常見(jiàn)糧食基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果顯示，16種真菌毒素的基質(zhì)效應(yīng)為61.0%～118.4%，說(shuō)明在這幾種常見(jiàn)的基質(zhì)中存在一定的基質(zhì)增強(qiáng)或抑制效應(yīng)。如玉米基質(zhì)中的黃曲霉毒素，基質(zhì)抑制作用明顯(61.0%～84.4%)?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是一種常見(jiàn)的減少基質(zhì)效應(yīng)的方法，但是由于真菌毒素污染的普遍性，16種毒素均不含的空白基質(zhì)不易獲得，特別是完全匹配的基質(zhì)難以獲得，而代表性基質(zhì)的普適性面臨挑戰(zhàn)，具有較大的不確定性，導(dǎo)致基質(zhì)匹配定量在標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)中的應(yīng)用受到局限。因此，為了更好消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，本實(shí)驗(yàn)采用穩(wěn)定同位素稀釋法進(jìn)行定量，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

2.4 檢測(cè)條件的優(yōu)化

對(duì)比含不同比例鹽和酸的弱洗脫流動(dòng)相對(duì)16種真菌毒素質(zhì)譜響應(yīng)的影響，結(jié)果顯示，以水為流動(dòng)相時(shí)，大部分的離子響應(yīng)不高，加鹽后大多數(shù)毒素的響應(yīng)明顯提高，其中乙酸銨的增強(qiáng)效果比甲酸銨明顯，同時(shí)低濃度(1 mmol/L)鹽比高濃度(2 mmol/L及5 mmol/L)鹽的響應(yīng)信號(hào)更強(qiáng)。而FB1和FB2需要在0.1%甲酸存在時(shí)才有明顯的質(zhì)譜響應(yīng)，因此，最終選擇含有0.1%甲酸和1 mmol/L NH4Ac的水相作為弱洗脫流動(dòng)相。

2.5 目標(biāo)離子的選擇

基于三重四極桿質(zhì)譜儀的檢測(cè)需要對(duì)離子對(duì)及相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以選擇最佳的母離子、子離子。對(duì)于多目標(biāo)化合物的同時(shí)檢測(cè)方法，需花費(fèi)大量的時(shí)間對(duì)質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化。而利用Q-Exactive高分辨質(zhì)譜以母離子的精確質(zhì)量數(shù)直接定量，無(wú)需優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù)，可簡(jiǎn)化質(zhì)譜條件的優(yōu)化過(guò)程，有效提高實(shí)驗(yàn)效率。本實(shí)驗(yàn)采用全掃描模式對(duì)目標(biāo)物的不同加合離子進(jìn)行選擇，采用響應(yīng)最高的加合離子作為檢測(cè)離子。實(shí)驗(yàn)中觀察到HT-2等目標(biāo)毒素的加鈉峰信號(hào)較強(qiáng)，但考慮到加鈉離子不易碎裂，難以進(jìn)行二級(jí)定性分析，因此選擇加氫(M+H)和加銨(M+NH4)進(jìn)行比較。在當(dāng)前流動(dòng)相梯度下，DON-3G，HT-2，T-2的加銨峰的信號(hào)更強(qiáng)，而其他毒素均為加氫峰信號(hào)更強(qiáng)，選擇上述最佳的加合離子作為檢測(cè)離子進(jìn)行分析。16種真菌毒素的色譜圖見(jiàn)圖2。

2.6 方法學(xué)驗(yàn)證

2.6.1 線(xiàn)性范圍、檢出限及定量下限 配制16種真菌毒素的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，以穩(wěn)定同位素稀釋法進(jìn)行定量，相關(guān)信息見(jiàn)表2。結(jié)果表明，在各自的線(xiàn)性范圍內(nèi)，16種真菌毒素線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.999。對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行逐級(jí)稀釋?zhuān)?倍信噪比(S/N=3)計(jì)算檢出限(LOD)，S/N=10計(jì)算定量下限(LOQ)，結(jié)果見(jiàn)表3。16種真菌毒素的LOQ均低于我國(guó)和歐盟規(guī)定的糧食中真菌毒素限量，說(shuō)明本方法可以滿(mǎn)足日常檢測(cè)的需要。

表2 相關(guān)毒素的保留時(shí)間和選擇離子的精確分子量Table 2 Retention times and accurate masses of selected ions

表3 16種真菌毒素的線(xiàn)性范圍、檢出限及定量下限Table 3 Linear ranges,LODs and LOQs of 16 mycotoxins

2.6.2 準(zhǔn)確度與精密度 取空白玉米、小麥、大麥、大米樣品，分別添加高、中、低3個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.4”方法進(jìn)行處理，每個(gè)加標(biāo)水平進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)濃度、回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見(jiàn)表4。16種真菌毒素的回收率均在75.3%～123.5%之間，RSD為0.41%～14.7%，符合歐盟法規(guī)[28]對(duì)于真菌毒素檢測(cè)方法回收率和RSD的要求。

2.6.3 質(zhì)控樣品的考察 為了進(jìn)一步驗(yàn)證本方法的準(zhǔn)確性和適用性，使用本方法測(cè)定了FAPAS能力測(cè)試玉米樣品(FAPAS T04246QC)。結(jié)果如表5所示，證書(shū)標(biāo)示的8種真菌毒素的檢測(cè)值均在范圍內(nèi)，且接近標(biāo)示中值，表明本方法準(zhǔn)確可靠。相比于基于三重四極桿(QQQ，TSQ QUANTUM ULTRA)的檢測(cè)方法[18]，兩種方法的相對(duì)平均偏差均不大于5.8%，結(jié)果無(wú)顯著性差異。但高分辨質(zhì)譜方法(HRMS)的定量更加簡(jiǎn)單，且無(wú)需對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化母離子、子離子和碰撞能量，對(duì)多目標(biāo)物分析時(shí)可以有效減少建立儀器方法的難度與時(shí)間，便于實(shí)驗(yàn)室快速建立準(zhǔn)確可靠的定量方法。

表4 16種真菌毒素的回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 4 Recoveries and relative standard deviations(RSDs) of 16 mycotoxins(n=6)

表5 FAPAS能力測(cè)試樣品的檢測(cè)結(jié)果Table 5 Results of FAPAS proficiency test sample

(續(xù)表5)

CompoundContent(μg/kg)HRMSQQQRelativeaveragedeviation(%)Assignedvalue(μg/kg)Range(μg/kg)HT-2102.07108.215.810659～152OTA3.123.052.22.871.61～4.13T-2138.87145.624.815187～215ZEN212.01221.504.4212126～298

2.7 實(shí)際樣品的測(cè)定

采用本方法對(duì)某地區(qū)的10份小麥樣品進(jìn)行檢測(cè)，共檢出NIV，DON，DON-3G，15-AcDON，3-AcDON，AFB1，AFB2，ZEN，ST 9種真菌毒素，其他7種真菌毒素均未檢出，結(jié)果如表6所示。部分檢出毒素的定性結(jié)果如圖3所示。近年來(lái)由于異常氣候的原因，導(dǎo)致我國(guó)部分地區(qū)真菌毒素的污染較為嚴(yán)重，因此加強(qiáng)日常監(jiān)測(cè)尤為重要。本方法可以適用于大量糧食樣品中真菌毒素的快速準(zhǔn)確定量分析。

表6 10份小麥樣品中真菌毒素毒素的含量Table 6 Contents of mycotoxins in 10 wheat samples w/(μg·kg-1)

圖3 實(shí)際樣品(A)和標(biāo)準(zhǔn)溶液(B)中黃曲霉毒素B1的二級(jí)質(zhì)譜圖Fig.3 MS2 spectra of AFB1 in real sample(A) and standard solution(B)

3 結(jié) 論

基于Q-Exactive高分辨質(zhì)譜技術(shù)，結(jié)合穩(wěn)定同位素，建立了糧食中16種真菌毒素的快速準(zhǔn)確檢測(cè)方法。樣品只需簡(jiǎn)單的提取、稀釋、離心和過(guò)濾，即可直接上機(jī)檢測(cè)。采用加標(biāo)回收法和測(cè)定基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確度和精密度，方法的定量下限可滿(mǎn)足國(guó)內(nèi)外對(duì)糧食中真菌毒素限量的要求。本方法前處理快速，無(wú)需凈化，避免了凈化過(guò)程中的損失與誤差，且利用穩(wěn)定同位素稀釋法定值，避免了基質(zhì)效應(yīng)的影響，可滿(mǎn)足大量糧食樣品中真菌毒素快速、準(zhǔn)確定量分析的需要。

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Determination of Mycotoxins in Cereals by UPLC-Quadrupole/Orbitrap High Resolution Mass Spectrometry

YE Jin,WU Yu,XIN Yuan-yuan,ZHOU Ming-hui,XIE Gang,WANG Song-xue*

(Academy of State Administration of Grain,Beijing 100037,China)

A UPLC-Quadrupole/Orbitrap high-resolution mass spectrometric(HRMS) method with stable isotope dilution technique was established for the determination of 16 mycotoxins in cereals.The sample was extracted with acetonitrile-water-acetic acid(70∶29∶1,by volume).The mycotoxins were separated on a C18column,and quantified in full scan mode.The method showed good linearities(r2>0.999) in a certain concentration range.The average recoveries and RSDs of mycotoxins in 4 kinds of cereals(wheat,maize,rice and barley) were in the range of 75.3%-123.5% and 0.41%-14.7%,respectively.The method was simple and accurate,and was suitable for the daily monitoring of mycotoxins.

mycotoxins；high resolution mass spectrometry(HRMS)；cereals；stable isotope dilution

10.3969/j.issn.1004-4957.2017.04.002

2016-09-26；

2016-11-25

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFE0113000)

O657.63；S852.44

A

1004-4957(2017)04-0449-08

*通訊作者：王松雪，博士，研究員，研究方向：糧油分析和質(zhì)量控制，Tel：010-58523708，E-mail:wsx@chinagrain.org