譚啟東，張曉軒，周東輝，秦思源,5，殷銘陽，劉光學，朱興全，徐前明

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寧夏回族自治區(qū)奶牛感染貝氏柯克斯體的血清流行病學調查

譚啟東1,2,3，張曉軒2,4，周東輝2，秦思源2,4,5，殷銘陽2，劉光學2，朱興全2，徐前明1

目的 調查寧夏回族自治區(qū)奶牛感染貝氏柯克斯體狀況。方法 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢出奶牛血清貝氏柯克斯體抗體，總體陽性率為11.37%(103/906)。結果 吳忠市和青銅峽市奶牛貝氏柯克斯體抗體陽性率分別為12.28%和10.44%；不同年齡組的抗體陽性率為9.86%至13.21%；未生育過的奶?？贵w陽性率最高為11.99%。結果顯示地區(qū)、年齡和胎次均與貝氏柯克斯體感染無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。結論 揭示了寧夏地奶牛貝氏柯克斯體感染普遍存在，對該地區(qū)人群健康構成潛在威脅。

貝氏柯克斯體；流行病學；奶牛；ELISA；寧夏回族自治區(qū)

Q熱，由一種專性革蘭氏陰性胞內菌貝氏柯克斯體引起，在世界范圍內廣泛分布。貝氏柯克斯體可以感染家畜、野生動物、寵物、鳥、人[1]。貝氏柯克斯體感染人可引起人的急性、慢性Q熱[2]。急性Q熱癥狀主要包括發(fā)熱、頭痛、咳嗽，嚴重急性Q熱可出現非典型性肺炎、肝炎等并發(fā)癥[3]。慢性Q熱患者長期持續(xù)發(fā)熱，可有心內膜炎、慢性肝炎、骨髓炎等。在畜牧業(yè)，貝氏柯克斯體感染可引起牛、羊流產、死胎、厭食和不育[4]。已感染動物通過分娩、泌乳、排泄等方式將體內貝氏柯克斯體排出[2,5-6]，排出的貝氏柯克斯體對外界環(huán)境有很強的抵抗力，可在環(huán)境中長期存活[7]。貝氏柯克斯體主要通過空氣傳播，干燥和多風的氣候條件有利于其傳播和擴散[8]。因此減少動物排泄物對環(huán)境污染對于控制人和動物的貝氏柯克斯體感染至關重要。

近些年，一些血清學技術已經被應用于檢測貝氏柯克斯體的特異性抗體，包括補體結合試驗(CFT),微量凝集試驗(MA),間接熒光抗體試驗(IFAT),以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。由于其高度的敏感性、特異性和易操作性，ELISA已被廣泛用于分析人和動物的貝氏柯克斯體感染[9]。

世界范圍內很多地區(qū)如美洲、歐洲以及包括中國在內的亞洲均已做過關于牛貝氏柯克斯體感染的血清學調查[9-13]，所得結果差別很大。但是目前關于中國寧夏回族自治區(qū)奶牛貝氏柯克斯體的感染情況還不清楚。本研究的目的在于調查寧夏地區(qū)奶牛貝氏柯克斯體的感染情況，為該地區(qū)的貝氏柯克斯體感染的防控提供科學數據。

1 材料與方法

1.1 調查區(qū)域 本研究選取寧夏回族自治區(qū)吳忠市和青銅峽市作為奶牛貝氏柯克斯體感染情況的調查對象。吳忠市(35°14′～39°23′ N, 104°17′～107°39′ E)坐落于寧夏的中北部地區(qū)，溫帶大陸性半干旱季風氣候，年平均氣溫為9.4 ℃。青銅峽市(37°36′～38°15′ N, 105°21′～106°21′ E)地處寧夏西北部，為縣級市，氣候與吳忠市相仿，年平均氣溫為9.2 ℃。奶牛養(yǎng)殖業(yè)在這兩市畜牧業(yè)中占有重要地位。

1.2 血清樣品 于2013年分別在寧夏青銅峽市(450份)和吳忠市(456份)共采得906份荷斯坦奶牛血樣品，所有樣品均未經特殊處理，隨機采樣以保證每1個樣品都具有代表性。血樣品經4 000 r/min離心10 min后將血清轉移到新的離心管中，于-20 ℃保存待用。記錄奶牛的地區(qū)、年齡、胎次等重要基本信息。

1.3 血清學檢測 血清樣品采用酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測貝氏柯克斯體抗體，試劑盒為市場可購法國LSI ELISA檢測試劑盒，按照說明書的要求操作。每板設陰、陽性血清對照，若有可疑孔則進行復檢。在450 nm波長處讀取結果。陰陽性的判斷結果依據S/P值(%)，S/P值(%)=(樣品OD值-陰性OD值)/(陽性OD值-陰性OD值)×100%，S/P值(%)≤40%判為陰性，S/P值(%)>40%判為貝氏柯克斯體抗體陽性。

1.4 數據分析 運用SAS軟件中的χ2分析不同變量包括地區(qū)、年齡和胎次與貝氏柯克斯體抗體陽性率之間是否存在差異，以P<0.05為具有統(tǒng)計學意義的判斷標準。

2 結 果

在此次調查的906份荷斯坦奶牛的血清樣品中，共檢出103份貝氏柯克斯體抗體陽性樣品，陽性率為11.37%(95%CI: 9.30-13.44)，其中吳忠市和青銅峽市的陽性率分別為12.28% (95%CI: 9.27-15.29) 和10.44% (95%CI: 7.62-13.27)。不同畜群的感染率從0%到40%不等(表1)。

表2顯示所有年齡組均檢出貝氏柯克斯體抗體陽性樣品，陽性率為9.86% (95%CI: 6.46-13.27)至13.21% (95%CI: 4.09-22.32)，其中大于37月齡奶牛陽性率最高。奶牛胎次分為0胎至大于等于2胎，陽性率從8.82% (95%CI: 4.56-13.09)至11.99%(95%CI: 9.29-14.68)不等，其中0胎奶牛感染率最高。然而，地區(qū)、年齡和胎次因素均與貝氏柯克斯體感染差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討 論

本文首次報道寧夏地區(qū)奶牛貝氏柯克斯體感染血清流行病學調查。寧夏作為中國5大牧區(qū)之一，畜牧業(yè)是當地經濟的重要組成部分。由于貝氏柯克斯體感染可引起奶牛流產、死胎等，這將對當地經濟產生巨大損失。此外，貝氏柯克斯體感染可通過奶牛的泌乳傳播，這將對人類健康產生潛在危害。而且寧夏地處中國西北部，干旱多風，對于貝氏柯克斯體的傳播提供了有利條件。因此，對奶牛做貝氏柯克斯體感染的流行病學調查十分必要。

表1 不同畜群奶牛血清貝氏柯克斯體抗體陽性率

Tab.e.1 Seroprevalence ofC.burnetiiinfection in dairy cattle in different herds

畜群Herd地區(qū)Region檢測數(份)No．tested陽性數(份)No．positive陽性率%Prevalence(%)95%CI1吳忠市66710．613．18-18．042吳忠市20210．000-23．153吳忠市2015．000-14．554吳忠市20630．009．92-50．085吳忠市20210．000-23．156吳忠市20210．000-23．157吳忠市20210．000-23．158吳忠市20000 9吳忠市20525．006．02-43．9810吳忠市2015．000-14．5511吳忠市2015．000-14．5512吳忠市20315．000-30．6513吳忠市20840．0018．53-61．4714吳忠市2015．000-14．5515吳忠市2015．000-14．5516吳忠市20000 17吳忠市2015．000-14．5518吳忠市20525．006．02-43．9819吳忠市50816．005．84-26．1620青銅峽市2202511．367．17-15．5621青銅峽市153138．504．08-12．9222青銅峽市77911．694．51-18．87總計90610311．379．30-13．44

表2 不同地區(qū)、年齡和胎次的奶牛血清貝氏柯克斯體抗體陽性率

Tab.e.2 Seroprevalence ofC.burnetiiinfection in dairy cattle in different regions,ages and numbers of pregnancies

變量Factor分類Category檢測數(份)No．tested陽性數(份)No．positive感染率%(95%CI)Prevalence(%)(95%CI)P值P?value地區(qū)Region青銅峽市4504710．44(7．62-13．27)0．38吳忠市4565612．28(9．27-15．29)年齡Age0-12月66710．61(3．18-18．04)0．7613-24月4936012．17(9．28-15．06)25-36月294299．86(6．46-13．27)≥37月53713．21(4．09-22．32)胎次No．pregnancies05596711．99(9．29-14．68)0．511170158．82(4．56-13．09)≥21772111．86(7．10-16．63)總計Total90610311．37(9．30-13．44)

到目前為止，世界范圍內很多國家都已經報道了關于奶牛貝氏柯克斯體感染的血清學調查。在本研究中，共有103份血清樣品檢出貝氏柯克斯體抗體，總體感染率為11.37%。這一結果低于韓國的25.6%[14]和英國的21%[15]，略高于北愛爾蘭的10.4%[16]。引起這些差異的原因可能歸結于奶牛的飼養(yǎng)條件、免疫水平、氣候條件、檢測方法敏感性和動物福利不同等[17]。和國內的一些省市報道相比，調查結果略高于黑龍江省報道的10.1%[13]，但是低于新疆報道的12.9%[9]。之前提到過干旱多風的氣候條件對于貝氏柯克斯體的傳播十分有利，新疆地處我國西北部，而黑龍江位于我國東北，西北相較于東北來說更加干旱和多風，因此可能更利于貝氏柯克斯體的傳播，使感染率更高。

本調查中，不同畜群的貝氏柯克斯體抗體陽性率從0%到40%不等，這可能歸結于不同牧場的管理模式和飼養(yǎng)條件存在差異。吳忠和青銅峽相毗鄰，氣候條件相似，因此抗體陽性率也相差不大。地區(qū)之間不存在統(tǒng)計學差異(P=0.38)。

4個年齡分組中，大于37月齡的奶牛貝氏柯克斯體抗體陽性率最高為13.21%。這可能由于年齡越大，獲得感染的機會越多；而且犢牛可能自出生攜帶母源抗體，因此有著更強的抵抗力。然而，貝氏柯克斯體的感染與年齡之間并無統(tǒng)計學意義(P=0.76)。

胎次方面，檢測的906頭奶牛中，有347頭奶牛至少生育過一次。未生育過的奶牛貝氏柯克斯體抗體陽性率最高為11.99%，其次為≥2胎的奶牛，生育過1胎的奶牛陽性率最低，同樣，貝氏柯克斯體感染與胎次之間也并無統(tǒng)計學意義(P=0.51)，表明胎次也并不是奶牛感染貝氏柯克斯體的風險因素。先前有報道稱懷孕反芻動物對貝氏柯克斯體感染高度敏感[18]，這與本文的結果并不一致，因此需要進一步的研究。

總之，本次調查結果表明寧夏地區(qū)奶牛貝氏柯克斯體感染普遍存在，這對于當地人群健康構成潛在威脅。應當采取有效的防控手段和管理方法以阻止和控制奶牛的貝氏柯克斯體感染。

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Xu Qian-ming, Email: vetqmxu@163.com.

Seroprevalence ofCoxiellaburnetiiinfection in dairy cattle in Ningxia Hui Autonomous Region,Northwest China

TAN Qi-dong1,2,3, ZHANG Xiao-xuan2,4, ZHOU Dong-hui2, QIN Si-yuan2,4,5, YIN Ming-yang2, LIU Guang-xue2, ZHU Xing-quan2, XU Qian-ming1

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036,China; 2.StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology,LanzhouVeterinaryResearchInstitute,CAAS,Lanzhou730046,China; 3.AnimalQuarantineStationofBeijingEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Beijing101312,China; 4.CollegeofAnimalScienceandTechnology,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China; 5.GeneralStationforSurveillanceofWildlifeDiseases&WildlifeBorneDiseases,StateForestryAdministration(SFA),Shenyang110034,China)

The aim of this present study was to examine the seroprevalence ofCoxiellaburnetiiinfection in randomly selected dairy cattle in Ningxia Hui Autonomous Region (NXHAR)，Northwest China. The overallC.burnetiiseroprevalence was 11.37% (103/906) by ELISA. The seroprevalence ofC.burnetiiwas 12.28% and 10.44% in dairy cattle，in Wuzhong and Qingtongxia respectively. The seropositive rate ranged from 9.86% to 13.21% in different age groups. Dairy cattle with no pregnancy had the highest seroprevalence (11.99%). Geographical location, age and number of pregnancies had no apparent association withC.burnetiiseropositivity (P>0.05). This survey indicates thatC.burnetiiinfection is highly prevalent in dairy cattle in NXHAR, which may pose a potential threat to human health.

Coxiellaburnetii；seroprevalence；dairy cattle；ELISA；NXHAR

10.3969/j.issn.1002-2694.2017.04.011

國家科技支撐計劃項目(No.2012BAD12B07)和甘肅省創(chuàng)新研究群體計劃項目(No.1210RJIA006)聯(lián)合資助

徐前明，Email: vetqmxu@163.com

1.安徽農業(yè)大學動物科技學院，合肥 230036； 2.中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室，蘭州 730046； 3.北京出入境檢驗檢疫局動物隔離場，北京 101312； 4.吉林農業(yè)大學動物科技學院，長春 130118； 5.國家林業(yè)局野生動物疫源疫病監(jiān)測總站，沈陽 110034

Supported by National Key Project of Scientific and Technical Supporting Program (No.2012BAD12B07) and the Science Fund for Creative Research Groups of Gansu Province (No.1210 RJIA006).

R378

A

1002-2694(2017)04-0349-04

2016-03-24 編輯：張智芳