謝偉東

（廣東省廣州市蘿崗區(qū)中醫(yī)醫(yī)院 廣州 510530）

上調(diào)基因-11在骨肉瘤中的表達(dá)及其臨床意義

謝偉東

（廣東省廣州市蘿崗區(qū)中醫(yī)醫(yī)院 廣州 510530）

目的：探討上調(diào)基因-11（UP-Regulated Gene 11，URG11）在骨肉瘤中的表達(dá)及其臨床意義。方法：選取我院骨科2005 年8月～2010年8月術(shù)后病理檢查明確為骨肉瘤的石蠟標(biāo)本100例，并以癌旁的正常骨組織或軟骨組織作為對(duì)照。比較URG11在骨肉瘤與癌旁正常組織中的表達(dá)，分析URG11在骨肉瘤組織中的表達(dá)與臨床、病理參數(shù)之間的關(guān)系；繪制Kaplan-Meier生存曲線，分析URG11在骨肉瘤組織中的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：（1）URG11在骨肉瘤組織的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P＜0.05）；（2）URG11的表達(dá)與骨肉瘤的分期、是否發(fā)生肺轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P＜0.05），而與性別、年齡、生長(zhǎng)部位和大小等無關(guān)（P＞0.05）；（3）URG11表達(dá)陽性患者的術(shù)后存活時(shí)間顯著低于URG11陰性患者（P＜0.05）。結(jié)論：URG-11在骨肉瘤組織中表達(dá)有所增加，對(duì)其生物學(xué)行為有一定的促進(jìn)作用。

骨肉瘤；上調(diào)基因-11；表達(dá)

骨肉瘤（Osteosarcoma）多見于兒童和青少年[1]，是起源于間葉組織的惡性腫瘤[2]。臨床資料顯示[3]，近1/4的患者在就醫(yī)時(shí)已發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，預(yù)后很差。為此，需要更多能夠提供骨肉瘤早期診斷、判斷預(yù)后的指標(biāo)。國(guó)內(nèi)有學(xué)者[4]運(yùn)用抑制消減雜交和差異PCR比較了HBx轉(zhuǎn)染細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)的分子，成功克隆了一組可以被HBx蛋白上調(diào)的新基因（Up-Regulated Gene，URG），包括URG4、URG11、URG7等。有研究[5]已發(fā)現(xiàn)，URG在肝癌、結(jié)腸癌等組織的標(biāo)本中處于高表達(dá)，與腫瘤的生長(zhǎng)密切相關(guān)?，F(xiàn)已證實(shí)[6]，URG11是一種細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)因子，在多種腫瘤組織中都存在高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但是目前，URG11在骨肉瘤是否存在表達(dá)以及對(duì)骨肉瘤的意義仍不清楚。本研究采用免疫組化方法，旨在探討URG11在骨肉瘤組織的表達(dá)狀況和對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院骨科2005年8月～2010 年8月術(shù)后病理檢查明確為骨肉瘤的石蠟標(biāo)本100例，標(biāo)本的病歷資料齊全；以癌旁的正常骨組織或軟骨組織作為對(duì)照。所有患者中，男53例，女47例；年齡12～63歲，平均（18.53±1.27）歲；根據(jù)Enneking分期：Ⅰ期15例，Ⅱa期18例，Ⅱb期34例，Ⅲ期33例；組織學(xué)分類中，普通型65例（其中成骨細(xì)胞型33例，成軟骨細(xì)胞型15例，成纖維細(xì)胞型17例），小細(xì)胞型12例，毛細(xì)血管擴(kuò)張型13例，其他類型中，骨旁骨肉瘤4例，未分化型骨肉瘤6例；腫瘤生長(zhǎng)部位：股骨者40例，脛腓骨者35例，其他部位者24例。所有患者術(shù)前均經(jīng)影像學(xué)檢查（X線＋MRI）、活檢后確診，采用化療和手術(shù)的治療方案，手術(shù)方式為骨肉瘤骨段切除＋假體置換，術(shù)后輔助化療8～12個(gè)療程。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)骨肉瘤組織中URG11的表達(dá)采用EnVision法[7]進(jìn)行染色，脫蠟，水化，PBS漂洗，微波修復(fù)，山羊血清封閉30 m in；滴加一抗URG11鼠抗人單克隆抗體，4℃過夜，PBS漂洗后加二抗封閉30 m in；PBS漂洗，DAB顯色；自來水漂洗，蘇木精復(fù)染，脫水；經(jīng)無水乙醇處理后，用二甲苯透明，中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽性切片作為陽性對(duì)照。

1.2.2 染色結(jié)果判斷染色結(jié)果以胞漿和（或）胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色為標(biāo)準(zhǔn)[8]。采用二次計(jì)分法[9]：隨機(jī)選取5個(gè)顯微鏡下的高倍視野（×400），每個(gè)視野下細(xì)胞計(jì)數(shù)約200個(gè)，綜合染色后的強(qiáng)弱程度和陽性細(xì)胞的百分比判定最后的結(jié)果。強(qiáng)度評(píng)分：不著色0分，淺著色1分，中著色2分，強(qiáng)著色3分。陽性細(xì)胞百分比的評(píng)分：0%～5%者0分，6%～25%者1分，26%～50%者2分，51%～75%者3分，超過75% 者4分。最終結(jié)果=強(qiáng)度評(píng)分×陽性百分比評(píng)分，0～3分歸為陰性，4～12分歸為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料用率或百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier曲線分析預(yù)后，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較骨肉瘤與癌旁組織URG11的表達(dá)URG11的表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色顆粒。見圖1。URG11在骨肉瘤的陽性表達(dá)為72例（72%），在癌旁組織的陽性表達(dá)為21例（21%），兩者比較，差異顯著（P＜0.05）。見表1。

圖1 URG11在骨肉瘤與癌旁組織的免疫組化染色（×400）

表1 骨肉瘤與癌旁組織URG11的表達(dá)[例（%）]

2.2 URG11的表達(dá)與多項(xiàng)臨床及病理參數(shù)的關(guān)系URG11的表達(dá)與骨肉瘤的分期、是否發(fā)生肺轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P＜0.05），而與性別、年齡、生長(zhǎng)部位和大小等無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

表2 URG11的表達(dá)與各項(xiàng)臨床及病理參數(shù)的關(guān)系（例）

2.3 URG11在骨肉瘤的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系術(shù)后隨訪資料顯示，72例URG11染色陽性的患者死亡48例，死亡率為66.67%；28例URG11染色陰性的患者死亡8例，死亡率為28.57%。繪制Kaplan-Meier生存曲線顯示，URG11染色陽性患者的術(shù)后存活時(shí)間顯著低于URG11染色陰性患者（P＜0.05）。見圖2。

圖2 URG11在骨肉瘤的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

3 討論

骨肉瘤的發(fā)病主要以兒童和青少年為主，發(fā)病率約為每年3/100萬[10]。流行病學(xué)資料顯示[11]，在我國(guó)，骨肉瘤占兒童和青少年全部原發(fā)惡性腫瘤的4%，導(dǎo)致最終死亡的主要原因是肺轉(zhuǎn)移。浸潤(rùn)和早期轉(zhuǎn)移的高傾向性是小兒腫瘤預(yù)后不好的主要原因之一，而且常規(guī)的腫瘤治療措施對(duì)于骨肉瘤效果并不理想，可見其診治難度之大[12]。早診斷、早治療對(duì)于提高療效、改善預(yù)后尤其重要。為此，尋找新的腫瘤標(biāo)記物、探索新的治療方法仍然是骨肉瘤的研究熱點(diǎn)。

URG11位于人的11號(hào)染色體長(zhǎng)臂，外顯子13個(gè)，堿基對(duì)2022個(gè)，大約可編碼70KD的蛋白。有研究發(fā)現(xiàn)，URG11內(nèi)含2個(gè)VWC結(jié)構(gòu)域和一個(gè)C-lectin結(jié)構(gòu)域。VWC作為血管黏附分子，與細(xì)胞黏附、遷移、淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)移都有很密切的關(guān)系；而C-lectin結(jié)構(gòu)域則主要參與細(xì)胞的增殖、分化及信號(hào)通路的過程[13]。

免疫組化的檢測(cè)顯示，URG11的表達(dá)存在于多種腫瘤組織中，如：肺癌、甲狀腺癌、乳癌、卵巢癌、胃癌、肝癌及前列腺癌[14]；也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)具有很大差異，相當(dāng)一部分腫瘤組織中就沒有檢測(cè)到URG11，如：胸腺瘤、淋巴瘤和腎癌組織。

腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是多基因、多步驟的過程[15]。URG11作為類似細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，參與了腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展過程。有學(xué)者[13]采用免疫組化方法研究URG11在胃癌及癌旁組織的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)URG11在胃癌組織中高表達(dá)，并且和胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。與URG11在胃癌組織的表達(dá)相似，本研究也發(fā)現(xiàn)，URG11在骨肉瘤組織的陽性表達(dá)率高于癌旁正常骨組織和軟骨組織，URG11的表達(dá)與骨肉瘤的分期、發(fā)生肺轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，URG11陽性表達(dá)者的術(shù)后生存時(shí)間低于URG11陰性者。這些表明，URG11的表達(dá)是影響骨肉瘤臨床生物學(xué)行為的重要因素，對(duì)疾病的發(fā)展起到了重要的促進(jìn)作用。綜上所述，URG11在骨肉瘤組織中表達(dá)有所增加，并且對(duì)其生物學(xué)行為有一定的作用，可以將其作為骨肉瘤早期診斷和判斷預(yù)后的輔助指標(biāo)。

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