張青 陳凱 盧美麗 許威 向曉輝 夏時海 冀潤利

·論著·

脂多糖對胰腺星狀細(xì)胞Smad和ERK1/2信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

張青 陳凱 盧美麗 許威 向曉輝 夏時海 冀潤利

目的 探討脂多糖(LPS)干預(yù)對胰腺星狀細(xì)胞(PSC)Smad和ERK1/2信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。方法 體外培養(yǎng)大鼠PSC細(xì)胞株LTC-14，用不同濃度LPS和不同時間干預(yù)LTC-14細(xì)胞，采用蛋白質(zhì)印跡法檢測細(xì)胞Smad、ERK1/2通路相關(guān)蛋白以及α-平滑肌肌動(α-SMA)蛋白的表達(dá)。結(jié)果 0、1、5、10、20、50 mg/L LPS干預(yù)LTC-14細(xì)胞后，Smad3的蛋白表達(dá)量分別為0.15±0.02、0.37±0.02、0.44±0.01、0.46±0.02、0.37±0.01、0.24±0.03，Smad7蛋白表達(dá)量分別為0.79±0.05、0.84±0.02、0.55±0.03、0.45±0.03、0.34±0.02、0.92±0.07，p-ERK1/2蛋白表達(dá)量分別為0.48±0.05、0.74±0.03、0.72±0.04、0.89±0.02、0.81±0.02、0.72±0.03，p-cPLA2蛋白表達(dá)量分別為0.15±0.03、0.30±0.01、0.31±0.01、0.30±0.02、0.28±0.03、0.32±0.02，α-SMA蛋白表達(dá)量分別為0.56±0.06、0.62±0.06、0.54±0.04、1.03±0.11、1.39±0.08、1.28±0.10，均在LPS干預(yù)后發(fā)生顯著變化(P值均<0.01)；ERK1/2蛋白表達(dá)量分別為0.56±0.03、0.57±0.02、0.53±0.02、0.58±0.02、0.59±0.05、0.55±0.04，未隨著LPS濃度的升高而發(fā)生顯著變化。10 mg/L LPS干預(yù)0、1、3、6、9 h后，LTC-14細(xì)胞Smad3蛋白表達(dá)量分別為0.69±0.05、0.68±0.07、1.02±0.14、1.82±0.06、2.04±0.11，Smad7蛋白表達(dá)量分別為2.77±0.10、1.37±0.08、1.45±0.14、0.78±0.09、0.63±0.06，p-ERK1/2蛋白表達(dá)量分別為0.16±0.03、0.32±0.05、0.79±0.03、1.50±0.07、1.77±0.04， p-cPLA2蛋白表達(dá)量分別為0.15±0.04、0.32±0.06、0.63±0.04、0.95±0.04、1.49±0.10，α-SMA的蛋白表達(dá)量分別為0.84±0.03、1.26±0.21、1.81±0.19、4.28±0.26、4.37±0.15，均隨著LPS干預(yù)時間的延長而發(fā)生顯著變化(P值均<0.05或<0.01)；ERK1/2蛋白表達(dá)量分別為0.75±0.03、0.72±0.02、0.80±0.04、0.74±0.03、0.85±0.09，不隨LPS干預(yù)時間的延長而發(fā)生顯著變化。結(jié)論 LPS呈時間-劑量依賴性上調(diào)α-SMA表達(dá)，并激活胞內(nèi)Smad和ERK1/2炎癥通路，這可能是CP發(fā)生的分子機(jī)制之一。

胰腺； 脂多糖類； 星型細(xì)胞； 信號傳導(dǎo)

慢性胰腺炎(CP)是由多種原因所致的胰腺實(shí)質(zhì)內(nèi)腺泡和胰管的反復(fù)或持續(xù)性損傷，引起腺泡和胰島細(xì)胞萎縮或消失，最終被纖維組織代替。CP臨床表現(xiàn)多樣，早期不易診斷。近年來大量研究顯示CP患者胰腺星狀細(xì)胞(pancreatic stellate cell, PSC)的活化程度與胰腺組織纖維化程度呈正相關(guān)， PSC 在胰腺慢性纖維化的進(jìn)程中具有重要作用，是各種誘因作用的靶點(diǎn)，也是導(dǎo)致CP 纖維化的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[1]。在CP起因的眾多假說中，腸道屏障破壞造成的細(xì)菌易位、反復(fù)的炎癥刺激是CP的主要成因之一。脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)是細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，也是主要的致炎因素，可以通過TGF-β1通路誘導(dǎo)多器官的炎癥反應(yīng)[2-3]。大鼠PSC中TGF-β1的分泌依賴于Smad和ERK1/2信號通路[4]。Smad3表達(dá)升高與PSC的激活有關(guān)[5]，而Smad7高表達(dá)的小鼠，胰腺纖維化程度減輕[6]；p-ERK1/2表達(dá)升高可以激活PSC[7]，胞質(zhì)型磷脂酶 A2(cytosolic phospholipase A2，cPLA2)作為ERK1/2通路的下游分子，是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵酶，在多種炎癥反應(yīng)中發(fā)揮作用[8]。由此推測LPS誘導(dǎo)PSC活化所發(fā)生的炎癥反應(yīng)可能有Smad和ERK1/2信號通路的參與。本研究應(yīng)用LPS刺激PSC，觀察其對Smad和ERK1/2信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，探討CP發(fā)生的分子機(jī)制。

材料和方法

一、細(xì)胞株及試劑

LTC-14細(xì)胞株是從大鼠胰腺分離出來的PSC，由德國Rostock大學(xué)醫(yī)學(xué)院Robert Jaster教授惠贈[9]；胎牛血清購自Gibco公司；青鏈霉素混合液購自Solarbio公司；IMDM培養(yǎng)基購自HyClone公司；LPS購自Sigma公司；胰酶消化液購自Gibco公司； ERK、β-actin單克隆一抗購自Proteintech公司； Smad3、Smad7抗體購自Abcam公司；p-ERK、p-cPLA2抗體購自Sigma公司；DMSO購自Sigma公司；BCA蛋白定量試劑盒購自北京碧云天生物技術(shù)有限責(zé)任公司；PVDF膜購自BD公司；蛋白Marker購自Solarbio公司；ECL發(fā)光液購自碧云天公司；顯影膠片購自柯達(dá)公司；顯影粉和定影粉購自天津世紀(jì)奧博公司。

二、細(xì)胞培養(yǎng)及分組

LTC-14細(xì)胞復(fù)蘇后常規(guī)培養(yǎng)、傳代。取對數(shù)生長期LTC-14細(xì)胞，待細(xì)胞70%融合時更換無血清培養(yǎng)液，分別加入0、1、5、10、20、50 mg/L LPS干預(yù)3 h，棄培養(yǎng)液，加入RIPA裂解液裂解細(xì)胞，提取蛋白；另取對數(shù)生長期LTC-14細(xì)胞，待細(xì)胞70%融合時更換無血清培養(yǎng)基，加入10 mg/L LPS分別干預(yù)0、1、3、6、9 h，棄去培養(yǎng)基，加入RIPA裂解液裂解細(xì)胞，提取蛋白。

三、蛋白質(zhì)印跡法檢測細(xì)胞相關(guān)通路的蛋白表達(dá)

取上述提取的蛋白，BCA定量后常規(guī)行蛋白質(zhì)印跡法檢測細(xì)胞α-SMA、Smad3、Smad7、p-ERK1/2、ERK、p-cPLA2蛋白表達(dá)，一抗工作濃度均為1∶1 000，內(nèi)參GAPDH工作濃度為1∶5 000， HRP標(biāo)記的二抗工作濃度為1∶5 000，最后用ECL化學(xué)發(fā)光顯影。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、LPS干預(yù)對LTC-14細(xì)胞 Smad3、Smad7表達(dá)的影響

LPS干預(yù)后LTC-14細(xì)胞Smad3蛋白表達(dá)量先隨LPS劑量的增加而增加，在10 mg/L時達(dá)峰值，其后又逐漸下降；Smad7蛋白表達(dá)量先隨LPS劑量增加而下降，在20 mg/L時達(dá)最低值，50 mg/L時又顯著升高(表1，圖1A)。LTC-14細(xì)胞Smad3蛋白表達(dá)量隨10 μg/ml LPS干預(yù)時間的延長而增加；Smad7蛋白表達(dá)量隨LPS干預(yù)時間的延長而減少(表2，圖1B)。

表1 不同濃度LPS干預(yù)后LTC-14細(xì)胞Smad3、Smad7蛋白表達(dá)量的變化

注：與0 mg/L組比較，aP<0.01

表2 10 mg/L LPS干預(yù)不同時間后LTC-14細(xì)胞Smad3、Smad7蛋白表達(dá)量的變化

注：與0 h組比較，aP<0.01

圖1 0、1、5、10、20、50 mg/L LPS干預(yù)3 h后(1A)及10 mg/L LPS干預(yù)0、1、3、6、9 h后(1B) LTC-14細(xì)胞Smad3、Smad7蛋白的表達(dá)

二、LPS干預(yù)對LTC-14細(xì)胞ERK1/2信號通路的影響

LPS干預(yù)后LTC-14細(xì)胞p-ERK1/2、p-cPLA2蛋白表達(dá)量增加；而LPS干預(yù)對ERK1/2蛋白表達(dá)沒有影響(表3，圖2A)。10 mg/L LPS干預(yù)后LTC-14細(xì)胞p-ERK1/2、p-cPLA2蛋白表達(dá)量隨干預(yù)時間的延長而增加，在9 h時達(dá)峰值；而干預(yù)時間的延長對ERK1/2的表達(dá)沒有影響(表4，圖2B)。

三、LPS干預(yù)對LTC-14細(xì)胞α-SMA表達(dá)的影響

0、1、5、10、20、50 mg/L LPS干預(yù)后LTC-14細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)量分別為0.56±0.06、0.62±0.06、0.54±0.04、1.03±0.11、1.39±0.08、1.28±0.10，≥10 mg/L LPS干預(yù)后LTC-14細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)量顯著高于未干預(yù)細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.01，圖3A)。

10 μg/ml LPS干預(yù)0、1、3、6、9 h后LTC-14細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)量分別為0.84±0.03、1.26±0.21、1.81±0.19、4.28±0.26、4.37±0.15，隨干預(yù)時間的延長逐漸升高，6 h時達(dá)峰值(圖3B)，干預(yù)時間≥3 h時的表達(dá)量顯著高于未干預(yù)細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.01)。

圖2 0、1、5、10、20、50 mg/L LPS干預(yù)3 h后(2A)及10 mg/L LPS干預(yù)0、1、3、6、9 h后(2B ) LTC-14細(xì)胞 p-ERK1/2、ERK1/2、p-cPLA2蛋白的表達(dá)

圖3 0、1、5、10、20、50 μg/ml LPS干預(yù)3 h后(3A)及10 μg/ml LPS干預(yù)0、1、3、6、9 h后(3B) LTC-14細(xì)胞α-SMA蛋白的表達(dá)

CP的臨床表現(xiàn)主要為腹痛、脂肪瀉和糖尿病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[10]。CP確診后20～25年的病死率為50%，并有4%的患者可發(fā)展為胰腺癌[11]。然而由于其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前尚無針對CP的有效藥物，因此研究CP的發(fā)病機(jī)制迫在眉睫。

腸道細(xì)菌易位學(xué)說是解釋胰腺炎發(fā)病機(jī)制的理論之一，該學(xué)說認(rèn)為，正常情況下腸道內(nèi)的細(xì)菌由于

表3 不同LPS濃度干預(yù)后LTC-14細(xì)胞ERK1/2通路相關(guān)蛋白表達(dá)量的變化

注：與0 mg/L組比較，aP<0.01

表4 10 mg/L LPS干預(yù)不同時間后LTC-14細(xì)胞ERK1/2通路相關(guān)蛋白表達(dá)量的變化

注：與0 h組比較，aP<0.05，bP<0.01

受到腸黏膜屏障的阻礙而難以易位到腸外組織，但在細(xì)菌過度生長、腸黏膜破壞的情況下，細(xì)菌可突破腸黏膜屏障而發(fā)生易位，易位的細(xì)菌除本身刺激細(xì)胞產(chǎn)生致炎因子外，革蘭陰性細(xì)菌死亡或被吞噬后釋放LPS進(jìn)一步刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生大量炎性因子，最終引發(fā)多臟器損傷[12]。

LPS引起的炎癥反應(yīng)有TGF-β1信號通路的參與。作為TGF-β1的核心信號通路，Smad通路與LPS引起的炎癥反應(yīng)關(guān)系密切[2-3]。大量研究表明，Smad通路在CP纖維化進(jìn)程中也發(fā)揮重要作用[5-6]，但其在細(xì)菌易位方面的研究還未見報道。為此，本研究用LPS模擬腸道細(xì)菌突破腸黏膜屏障，采用不同LPS濃度及不同時間干預(yù)LTC-14細(xì)胞。結(jié)果顯示，隨著LPS刺激濃度的增加，Smad3表達(dá)逐漸升高，在10 mg/L時達(dá)峰值，其后逐漸降低；而Smad7蛋白的變化正好與其相反，LPS作用拐點(diǎn)的出現(xiàn)可能與高劑量LPS誘發(fā)了胞內(nèi)的其他應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。而隨著LPS干預(yù)時間的延長，Smad3表達(dá)逐漸升高，Smad7表達(dá)逐漸降低，表明Smad通路被持續(xù)活化，且活化程度不斷提高。提示當(dāng)有適量的細(xì)菌反復(fù)刺激時，胰腺產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)會逐漸增強(qiáng)，這與細(xì)菌易位假說相呼應(yīng)，可能是CP發(fā)生的病理基礎(chǔ)。

細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)為絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)的主要成員，至少包括ERK1和ERK2兩個亞型。ERK通路參與應(yīng)激、細(xì)菌產(chǎn)物和炎癥遞質(zhì)等引起的細(xì)胞反應(yīng)。研究證實(shí)，用細(xì)胞因子干預(yù)大鼠PSC可激活ERK通路，增加CX3CL1的釋放；而阻斷ERK1/2通路可抑制CX3CL1的分泌，表明PSC通過ERK1/2通路促進(jìn)CP的發(fā)生[7]。在大鼠雪旺細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，LPS可以顯著激活ERK1/2通路，進(jìn)而誘導(dǎo)TNF-α的產(chǎn)生[13]。最近研究發(fā)現(xiàn)，LPS觸發(fā)的炎性環(huán)境可抑制BMP-9的表達(dá)，并激活ERK1/2信號通路[14]。cPLA2作為ERK1/2通路的下游分子，是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵酶，cPLA2水解胞膜磷脂酸釋放花生四烯酸(arachidonic acid，AA)，AA 在環(huán)氧化酶2(cycloxygenase，COX)和脂氧化酶(lypoxygenase，LOX)進(jìn)一步催化下生成前列腺素、 血栓素、白三烯以及ROS等物質(zhì)，廣泛參與炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激過程[8]。本研究結(jié)果顯示，LPS干預(yù)PSC后可上調(diào)p-ERK1/2及其下游分子p-cPLA2的表達(dá)，并隨著LPS干預(yù)時間的延長而逐漸升高；然而LPS干預(yù)并不影響ERK1/2蛋白的表達(dá)，表明LPS對ERK1/2通路的激活僅起到一個類似分子開關(guān)的作用，但激活程度不隨LPS濃度的增加而變化，而是隨著LPS干預(yù)時間的延長逐漸加大，與Smad通路效果類似。

PSC的活化在CP的發(fā)生和發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用，PSC活化所致的胰腺慢性纖維化是CP和胰腺癌共同的病理經(jīng)過，活化的PSC已經(jīng)有望成為CP和胰腺癌治療的一個新靶標(biāo)[15-16]。有研究證明，Smad通路和ERK1/2通路都參與PSC的活化。在二丁基二氯化物(dibutyltin dichloride，DBTC)所致的大鼠CP中，Smad7表達(dá)顯著降低，同時TGF-β1和α-SMA表達(dá)明顯升高，PSC被廣泛激活[17]。最近研究發(fā)現(xiàn)，ERK1蛋白在PSC的活化中發(fā)揮重要作用[18]，而α-SMA 表達(dá)是PSC激活的標(biāo)志[19]。為了更直接地反映LPS對PSC的影響，本研究同樣檢測了α-SMA的表達(dá)變化。結(jié)果顯示，低劑量LPS干預(yù)對PSC的α-SMA表達(dá)沒有影響，中劑量LPS干預(yù)使α-SMA的表達(dá)逐漸升高，而高劑量LPS干預(yù)后α-SMA的表達(dá)未繼續(xù)增加，表明中劑量LPS干預(yù)才能活化PSC，且隨著LPS干預(yù)時間的延長而逐漸增加，與胰腺Smad通路和ERK1/2通路的效果類似。由此推測，PSC中LPS所致α-SMA的表達(dá)變化可能是通過Smad通路和ERK1/2通路實(shí)現(xiàn)的。

[1] Masamune A, Watanabe T, Kikuta K, et al. Roles of pancreatic stellate cells in pancreatic inflammation and fibrosis[J]. Clin Gastroenterol Hepatol, 2009,7(11 Suppl):S48-S54. DOI: 10.1016/j.cgh.2009.07.038.

[2] 酈佳慧, 呂開陽, 李恒宇, 等. LPS誘導(dǎo)的肝臟急性期反應(yīng)在Smad3基因敲除小鼠中被抑制[C]. 中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文集,2009:83-84.

[3] Mu E, Ding R, An X, et al. Heparin attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury by inhibiting nitric oxide synthase and TGF-β/Smad signaling pathway[J].Thromb Res,2012,129(4):479-485. DOI: 10.1016/j.thromres.2011.10.003.

[4] Aoki H, Ohnishi H, Hama K, et al. Autocrine loop between TGF-beta1 and IL-1beta through Smad3- and ERK-dependent pathways in rat pancreatic stellate cells[J]. Am J Physiol Cell Physiol, 2006,290(4):C1100-C1108. DOI: 10.1152/ajpcell.00465.2005.

[5] 陳凱, 榮亞梅, 曹衛(wèi)麗, 等. 氧化苦參堿對TGF-β1刺激的胰腺星狀細(xì)胞Smad通路相關(guān)因子表達(dá)的影響[J].世界華人消化雜志,2015,23(12):1883-1889.

[6] He J, Sun X, Qian KQ, et al. Protection of cerulein-induced pancreatic fibrosis by pancreas-specific expression of Smad7[J]. Biochim Biophys Acta, 2009,1792(1):56-60. DOI: 10.1016/j.bbadis.2008.10.010.

[7] Uchida M, Ito T, Nakamura T, et al. ERK pathway and sheddases play an essential role in ethanol-induced CX3CL1 release in pancreatic stellate cells[J]. Lab Invest, 2013,93(1):41-53. DOI: 10.1038/labinvest.2012.156.

[8] Hu R, Zhou J, Luo C, et al. Glial scar and neuroregeneration: histological, functional, and magnetic resonance imaging analysis in chronic spinal cord injury[J]. J Neurosurg Spine, 2010,13(2):169-180. DOI: 10.3171/2010.3.SPINE09190.

[9] Tsang SW, Zhang H, Lin C, et al. Rhein, a natural anthraquinone derivative, attenuates the activation of pancreatic stellate cells and ameliorates pancreatic fibrosis in mice with experimental chronic pancreatitis[J]. PLoS One, 2013,8(12):e82201. DOI: 10.1371/journal.pone.0082201.

[10] Zhang SK, Tsui NC, Li DH, et al. Expression of transforming growth factor beta1/Sma- and Mad-related proteins in rat with chronic pancreatitis induced by dibutyltin dichloride[J]. Pancreas, 2010,39(2):252-253. DOI: 10.1097/MPA.0b013e3181baeef2.

[11] Shimosegawa T, Kume K, Satoh K. Chronic pancreatitis and pancreatic cancer: prediction and mechanism[J]. Clin Gastroenterol Hepatol, 2009,7(11 Suppl):S23-S28. DOI: 10.1016/j.cgh.2009.07.042.

[12] Moody FG, Haley-Russell D, Muncy DM. Intestinal transit and bacterial translocation in obstructive pancreatitis[J]. Dig Dis Sci, 1995,40(8):1798-1804.

[13] 邵曉軼, 秦永偉, 王海波, 等. ERK在LPS誘導(dǎo)大鼠雪旺氏細(xì)胞TNF-α表達(dá)中的作用[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2007,27(6):485-489. DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2007.06.001.

[14] Daigang L, Jining Q, Jinlai L, et al. LPS-stimulated inflammation inhibits BMP-9-induced osteoblastic differentiation through crosstalk between BMP/MAPK and Smad signaling[J]. Exp Cell Res, 2016,341(1):54-60. DOI: 10.1016/j.yexcr.2016.01.009.

[15] Algül H, Treiber M, Lesina M, et al. Mechanisms of disease: chronic inflammation and cancer in the pancreas-a potential role for pancreatic stellate cells?[J]. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol, 2007, 4(8): 454-462. DOI: 10.1038/ncpgasthep 0881.

[16] Watari N, Hotta Y, Mabuchi Y. Morphological studies on a vitamin A-storing cell and its complex with macrophage observed in mouse pancreatic tissues following excess vitamin A administration[J]. Okajimas Folia Anat Jpn, 1982,58(4-6):837-858.

[17] Hou XJ, Jin ZD, Jiang F, et al. Expression of Smad7 and Smad ubiquitin regulatory factor 2 in a rat model of chronic pancreatitis[J]. J Dig Dis, 2015,16(7):408-415. DOI: 10.1111/1751-2980.12253.

[18] Yuantai W, Tiancai W, Qiu Z. PD98059 inhibits expression of pERK1 protein and collagen alpha1(I) mRNA in rat pancreatic stellate cells activated by platelet-derived growth factor[J]. Indian J Gastroenterol, 2005,24(3):100-103.

[19] 王興鵬, 張汝玲, 龔自華, 等. 胰腺星狀細(xì)胞在大鼠胰腺纖維化形成中的作用[J].中華消化雜志,2003,23(8):466-469.DOI:10.3760.j.issn:0254-1432.2003.08.005.

(本文編輯：屠振興)

The influence of LPS on the protein expression of related molecules in Smads and ERK1/2 signal pathway in LTC-14 cells

ZhangQing,ChenKai,LuMeili,XuWei,XiangXiaohui,XiaShihai,JiRunli.

DepartmentofGastrointerology,TianjinXiqingHospital,Tianjin300162,China

Objective To explore the influence of LPS treatment on related molecules in Smads and ERK1/2 signal pathway in pancreatic stellate cell line LTC-14. Methods LTC-14 cells were cultured in vitro, and were treated with LPS at different dose in different time points. Protein expressions of related molecules in Smads pathway and ERK1/2 pathway and α-SMA in LTC-14 Cells were examined by Western blot. Results On Treated LTC-14 cells by 0, 1, 5, 10, 20 and 50 mg/L LPS，protein expressions of Smad3 were 0.15±0.02, 0.37±0.02, 0.44±0.01, 0.46±0.02, 0.372±0.01 and 0.24±0.03; expressions of Smad7 were 0.79±0.05, 0.84±0.02, 0.55±0.03, 0.45±0.03, 0.34±0.02 and 0.92±0.07; p-ERK1/2 levels were 0.48±0.05, 0.74±0.03, 0.72±0.04, 0.89±0.02, 0.81±0.02 and 0.72±0.03; p-cPLA2 levels were 0.15±0.03, 0.30±0.01, 0.31±0.01, 0.30±0.02, 0.28±0.03 and 0.32±0.02; α-SMA levels were 0.56±0.06, 0.62±0.06, 0.54±0.04, 1.03±0.11, 1.39±0.08 and 1.28±0.10. The changes of protein expressions before and after LPS treatment were obvious (allP<0.01). The protein expressions of ERK1/2 were 0.56±0.03, 0.57±0.02, 0.53±0.02, 0.58±0.02, 0.59±0.05 and 0.55±0.04, which did not change obviously along with increased LPS dosages. LTC-14 cells treated with 10 mg/L LPS for 0, 1, 3, 6 and 9 h，the expressions of Smad3 were 0.69±0.05, 0.68±0.07, 1.02±0.14, 1.82±0.0 and 2.04±0.11，those of Smad7 were 2.77±0.10, 1.37±0.08, 1.45±0.14, 0.78±0.09 and 0.63±0.06，those of p-ERK1/2 were 0.16±0.03, 0.32±0.05, 0.79±0.03, 1.50±0.07 and 1.77±0.04，those of p-cPLA2 were 0.15±0.04, 0.32±0.06, 0.63±0.04, 0.95±0.04 and 1.49±0.10，those of α-SMA were 0.84±0.03, 1.26±0.21, 1.81±0.19, 4.28±0.26 and 4.37±0.15, all of which changed obviously as the treatment time increased (P<0.05 or 0.01). The expressions of ERK1/2 were 0.75±0.03, 0.72±0.02, 0.80±0.04, 0.74±0.03 and 0.85±0.09, which did not change obviously as the treatment time increased. Conclusions LPS could upregulate the expression of α-SMA in a time- and dose-dependent way, and activate intracellular Smads and ERK1/2 inflammatory pathways, which may be the potential molecular mechanism of the development of chronic pancreatitis.

Pancreas; Lipopolysaccharides; Astrocytes; Signal transductionFund program: Subject Foundation of Tianjin Xiqing Hospital(xqlx201401, xqlx201406); Seed-foundation of Affiliated Hospital of Logistics University of PAP(FYM201522); Startup Project of Doctor Scientific Research of Logistics University of PAP(WHB201515)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2017.02.005

300162 天津，天津市西青醫(yī)院消化內(nèi)科(張青)；武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院消化二科/肝膽胰脾中心(陳凱、盧美麗、許威、向曉輝、夏時海、冀潤利)

冀潤利， Email: base_19901s@163.com

天津市西青醫(yī)院院級課題(xqlx201401，xqlx201406)；武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院種子基金(FYM201522)；武警后勤學(xué)院博士啟動金(WHB201515)

2016-09-06)