董雅潔 盧鍇鋒 高維娟 錢 濤 謝亞芹

(承德醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，河北 承德 067000)

黃芪注射液減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的機(jī)制

董雅潔 盧鍇鋒 高維娟1錢 濤2謝亞芹

(承德醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，河北 承德 067000)

目的 探討黃芪注射液減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的作用機(jī)制。方法 取體外無(wú)血清原代培養(yǎng)8 d的大鼠海馬神經(jīng)元，采用隨機(jī)數(shù)表法分為A組：正常對(duì)照組、B組：模型組(缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組)、C組：黃芪注射液溶劑對(duì)照組、D組：黃芪注射液組、E組：二甲基亞砜(DMSO)組、F組：Bax抑制劑組、G組：Bax激動(dòng)劑組、H組：Bax抑制劑+黃芪注射液組、I組：Bax激動(dòng)劑+黃芪注射液組。各組除A組均經(jīng)0.5 h缺氧缺糖，分別采用免疫組化法和RT-PCR法對(duì)復(fù)氧復(fù)糖后0、0.5、2、6、24、72、120 h的Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)和比較。結(jié)果 各組海馬神經(jīng)元除0 h外，其他時(shí)間點(diǎn)的Bcl-2水平均高于A組，且各組Bcl-2水平均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，2 h達(dá)到頂峰。除0 h外，其他各時(shí)間點(diǎn)H組大鼠海馬神經(jīng)元的Bcl-2水平均顯著高于其他組(P<0.05)，其次為F組、D組、I組、G組、E組、B/C組、A組，且B組與C組無(wú)顯著差異(P>0.05)。各組大鼠海馬神經(jīng)元除0 h外，其他各時(shí)間點(diǎn)的Bax水平均低于A、B組，且各組均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，6 h達(dá)到頂峰，各組大鼠海馬神經(jīng)元除0 h外，其他各時(shí)間點(diǎn)的Caspase-3 mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元百分率均高于A組，且各組均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，24 h達(dá)到頂峰。除0 h外，其他各時(shí)間點(diǎn)B組Bcl-2水平和Caspase-3 mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元百分率均顯著高于其他組(P<0.05)，其次為E組、G組、I組、D組、F組、H組，且B組與C組各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。結(jié)論 黃芪注射液能夠抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元Bax蛋白的表達(dá)，提高Bcl-2蛋白表達(dá)，抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡；且Bax激動(dòng)劑能夠加速缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡，Bax抑制劑能夠減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡。

Bax；黃芪注射液；缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖；海馬神經(jīng)元；凋亡

臨床上治療缺血性腦損傷的有效途徑之一為抑制細(xì)胞凋亡〔1〕。目前常將黃芪注射液作為治療缺血性腦血管病的常用藥物，其能夠顯著抑制全腦缺血再灌注大鼠海馬神經(jīng)元凋亡，但臨床上并未明確黃芪注射液對(duì)缺血性腦血管病患者作用的具體靶點(diǎn)〔2〕。研究表明〔3〕，在腦缺血損傷中，神經(jīng)元凋亡受多種相關(guān)基因及蛋白的調(diào)控，其中Bax是與細(xì)胞凋亡關(guān)系最密切的凋亡調(diào)控基因之一。本研究旨在探討黃芪注射液減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 1～2 d SPF級(jí)SD大鼠20只，雌雄兼有。

1.2 方法

1.2.1 大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察和純度鑒定 取新生24 h內(nèi)的SD乳鼠，酒精消毒后迅速取出海馬組織，采用濃度為0.125%的胰蛋白酶消化法加機(jī)械吹打法分離細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。采用細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)海馬神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白A(GFAP) 的表達(dá)，在顯微鏡下觀察海馬神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和純度。

1.2.2 細(xì)胞分組及模型制備 取體外無(wú)血清原代培養(yǎng)8 d的大鼠海馬神經(jīng)元，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)、缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖組(B組)、黃芪注射液溶劑對(duì)照組(C組)、黃芪注射液組(D組)、二甲基亞砜(DMSO)組(E組)、Bax抑制劑組(F組)、Bax激動(dòng)劑組(G組)、Bax抑制劑+黃芪注射液組(H組)、Bax激動(dòng)+黃芪注射液組(I組)。A組：不做任何特殊處理，正常培養(yǎng)；B組：加入與正常對(duì)照組培養(yǎng)基等量的無(wú)糖Earle液，將培養(yǎng)皿置于37℃溫箱里的缺氧裝置中，壓緊、密閉，快速通入高純氮?dú)?N2)5 min，以盡快排盡空氣，調(diào)分壓至1.5 kPa，繼續(xù)緩慢、勻速、連續(xù)通入，30 min后換正常無(wú)血清培養(yǎng)液，繼續(xù)在37℃恒溫、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；C組：加入等量的pH7.4的黃芪注射液溶劑即無(wú)菌去離子水，處理方法與B組同；D組：加入終濃度為0.5 g生藥/L的黃芪注射液，進(jìn)行缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖造模制備，直至細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束；E組：加入等量的無(wú)菌DMSO，處理方法與B組同；F組：用Bax抑制劑Bax inhibitor peptide V5預(yù)處理后，再進(jìn)行缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖，直至細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束；G組：用Bax激動(dòng)劑(BAM7)預(yù)處理后，再進(jìn)行缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖，直至細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束；H組：用Bax inhibitor peptide V5預(yù)處理，而后加入黃芪注射液，再進(jìn)行缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖，直至細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束；I組：用BAM7預(yù)處理，而后加入黃芪注射液，再進(jìn)行缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖，直至細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束。神經(jīng)細(xì)胞氧糖剝奪30 min后，分別復(fù)氧0.5、2、6、24、48、72、120 h。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定 分別采用免疫組化法和RT-PCR法對(duì)復(fù)氧復(fù)糖后0、0.5、2、6、24、72、120 h的Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)和比較。免疫組化SP法具體操作按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行(試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋公司)。RT-PCR法：收集細(xì)胞，采用TRIzol一步法將RNA提取出來(lái)，依據(jù)ExscriptTM RT reagent kit說(shuō)明將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。Caspase-3 cDNA引物序列下游5′-CAAAGCCAGTGGCACTCATTCTC-3′，上游5′-TGCGGCGTTACACGACCTT-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為200 bp。內(nèi)參照物β-actin的引物序列下游5′-ACATCTGGTGGAAGGTGGAC-3′，上游5′-GGACTTCGAGCAAGAGATGG-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為509 bp。按照PCR Amplificationkit說(shuō)明進(jìn)行反應(yīng)，擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性3 min，94℃ 40 s，54℃ 40 s，72℃ 40 s，循環(huán)30次，72℃終末延伸3 min。給予PCR產(chǎn)物采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定，以β-actin為內(nèi)參照重復(fù)試驗(yàn)6次。采用凝膠分析軟件Quantity one進(jìn)行半定量分析，目的條帶在200 bp位置。兔抗大鼠NSE多克隆抗體依照1∶50的比例稀釋，陽(yáng)性細(xì)胞質(zhì)和凸起呈棕黃色，胞核內(nèi)含有少量黃色顆粒。使用M1VNT圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行半定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析法和LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 NSE蛋白的表達(dá) A組大鼠海馬神經(jīng)胞體飽滿，突起明顯，且突起的末端分支形成相互支持生長(zhǎng)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較少，5個(gè)400倍視野中有72個(gè)陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞，純度為(91.48±0.72)%。見(jiàn)圖1。

2.2 各組各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2水平比較 0 h時(shí)點(diǎn)A、B、C、D、E、F、G、H、I組Bcl-2水平分別為0.368±0.04，0.370±0.03，0.365±0.02，0.369±0.03，0.382±0.04，0.369±0.04，0.371±0.03，0.382±0.04，0.368±0.03，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組除0 h各時(shí)間點(diǎn)的Bcl-2水平均高于A組，且各組均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，2 h達(dá)到頂峰。除0 h各時(shí)間點(diǎn)H組Bcl-2水平均顯著高于其他組(P<0.05)，其次為F組、D組、I組、G組、E組、B/C組、A組，且B組與C組無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

圖1 NSE蛋白表達(dá)(×400)

組別0.5h2h6h24h72h120hA組0.352±0.040.371±0.020.366±0.050.370±0.030.358±0.040.349±0.02B組0.536±0.041)0.630±0.021)0.583±0.031)0.539±0.021)0.486±0.051)0.404±0.031)C組0.553±0.041)0.625±0.041)0.572±0.021)0.543±0.041)0.475±0.031)0.386±0.041)D組0.573±0.021)2)3)0.681±0.031)2)3)0.631±0.051)2)3)0.571±0.011)2)3)0.521±0.021)2)3)0.395±0.031)2)3)E組0.527±0.031)2)3)4)0.648±0.031)2)3)4)0.579±0.031)2)3)4)0.542±0.021)2)3)4)0.491±0.041)2)3)4)0.412±0.041)2)3)4)F組0.583±0.041)2)3)4)0.693±0.031)2)3)4)0.648±0.041)2)3)4)0.593±0.041)2)3)4)0.563±0.031)2)3)4)0.455±0.021)2)3)4)G組0.534±0.031)2)3)4)5)0.652±0.041)2)3)4)5)6)0.624±0.021)2)3)4)5)6)0.556±0.041)2)3)4)5)6)0.483±0.031)2)3)4)5)6)0.395±0.031)2)3)4)5)6)H組0.618±0.051)2)3)4)5)6)0.728±0.041)2)3)4)5)6)0.649±0.051)2)3)4)5)6)7)0.611±0.031)2)3)4)5)6)0.583±0.041)2)3)4)5)6)0.467±0.031)2)3)4)5)6)I組0.564±0.031)2)3)4)5)6)7)8)0.671±0.021)2)3)4)5)6)7)8)0.613±0.031)2)3)4)5)6)7)8)0.564±0.031)2)3)4)5)6)7)8)0.512±0.041)2)3)4)5)6)7)8)0.410±0.031)2)3)4)5)6)7)8)

與A組比較:1)P<0.05；與B組比較:2)P<0.05；與C組比較:3)P<0.05；與D組比較:4)P<0.05；與E組比較:5)P<0.05；與F組比較:6)P<0.05；與G組比較:7)P<0.05；與H組比較:8)P<0.05，下表同

2.3 各組各時(shí)間點(diǎn)Bax水平比較 0 h時(shí)點(diǎn)A、B、C、D、E、F、G、H、I組Bax水平分別為0.443±0.04，0.430±0.06，0.432±0.05，0.429±0.03，0.428±0.05，0.419±0.04，0.419±0.04，0.421±0.04，0.427±0.05，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組除0 h各時(shí)間點(diǎn)的Bax水平均低于A、B組，且各組均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，6 h達(dá)到頂峰。除0 h各時(shí)間點(diǎn)B組Bcl-2水平均顯著高于其他組(P<0.05)，其次為E組、G組、I組、D組、F組、H組，且B組與C組各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.4 各組各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3 mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元百分率比較 0 h時(shí)點(diǎn)A、B、C、D、E、F、G、H、I組Caspase-3 mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元百分率分別為(3.762±0.83)%，(3.479±0.83)%，(3.173±0.83)%，(3.249±0.74)%，(3.573±0.81)%，(3.482±0.39)%，(3.729±0.92)%，(3.684±0.84)%，(3.572±0.83)%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組除0 h各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3 mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元百分率均高于A組，且各組均隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高，24 h達(dá)到頂峰。除0 h各時(shí)間點(diǎn)B組Caspase-3 mRNA陽(yáng)性神經(jīng)元百分率均顯著高于其他組(P<0.05)，其次為E組、G組、I組、D組、F組、H組，且B組與C組各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。見(jiàn)表3。

組別0.5h2h6h24h72h120hA組0.413±0.040.452±0.020.422±0.050.448±0.030.437±0.060.408±0.03B組0.730±0.041)0.880±0.031)0.965±0.021)0.795±0.051)0.644±0.061)0.514±0.021)C組0.728±0.061)0.875±0.041)0.972±0.031)0.810±0.021)0.639±0.051)0.621±0.041)D組0.655±0.041)2)3)0.735±0.031)2)3)0.802±0.041)2)3)0.693±0.031)2)3)0.576±0.041)2)3)0.468±0.051)2)3)E組0.718±0.051)2)3)4)0.894±0.041)2)3)4)0.973±0.021)2)3)4)0.782±0.041)2)3)4)0.652±0.041)2)3)4)0.521±0.031)2)3)4)F組0.628±0.031)2)3)4)5)0.714±0.051)2)3)4)0.784±0.041)2)3)4)5)0.671±0.041)2)3)4)5)0.609±0.031)2)3)4)5)0.439±0.041)2)3)4)5)G組0.703±0.041)2)3)4)5)6)0.884±0.051)2)3)4)5)6)0.961±0.031)2)3)4)5)6)0.773±0.051)2)3)4)5)6)0.638±0.051)2)3)4)5)6)0.517±0.041)2)3)4)5)6)H組0.601±0.041)2)3)4)5)6)7)0.702±0.041)2)3)4)5)6)7)0.749±0.031)2)3)4)5)6)7)0.654±0.031)2)3)4)5)6)7)0.584±0.051)2)3)4)5)6)7)0.417±0.031)2)3)4)5)6)7)I組0.692±0.031)2)3)4)5)6)7)8)0.871±0.041)2)3)4)5)6)7)8)0.948±0.021)2)3)4)5)6)7)8)0.751±0.021)2)3)4)5)6)7)8)0.618±0.041)2)3)4)5)6)7)8)0.502±0.031)2)3)4)5)6)7)8)

組別0.5h2h6h24h72h120hA組4.773±0.733.821±0.734.657±0.818.367±0.928.437±0.853.826±0.83B組6.178±0.841)34.629±7.371)43.758±9.371)74.375±11.271)41.736±7.371)8.369±0.921)C組5.739±0.891)39.249±9.281)42.479±9.241)68.384±13.211)41.369±8.161)7.936±1.151)D組5.863±0.931)2)3)14.379±10.371)2)3)36.274±8.371)2)3)47.840±12.171)2)3)17.374±7.221)2)3)3.274±0.731)2)3)E組6.026±0.731)2)3)4)30.379±8.271)2)3)4)39.279±9.141)2)3)4)71.378±10.361)2)3)4)38.479±7.191)2)3)4)8.037±0.841)2)3)4)F組5.480±0.821)2)3)4)11.389±9.481)2)3)4)27.479±9.281)2)3)4)35.280±13.281)2)3)4)13.479±8.371)2)3)4)2.946±0.771)2)3)4)G組5.936±0.661)2)3)4)5)6)23.368±9.371)2)3)4)5)6)38.479±9.371)2)3)4)5)6)64.375±12.471)2)3)4)5)6)34.279±9.181)2)3)4)5)6)7.649±1.111)2)3)4)5)6)H組5.148±0.741)2)3)4)5)6)7)9.364±8.941)2)3)4)5)6)7)24.360±9.161)2)3)4)5)6)7)31.368±11.341)2)3)4)5)6)7)11.378±7.361)2)3)4)5)6)7)2.748±0.931)2)3)4)5)6)7)I組5.916±0.831)2)3)4)5)6)7)8)19.379±9.211)2)3)4)5)6)7)8)37.279±9.111)2)3)4)5)6)7)8)57.369±11.361)2)3)4)5)6)7)8)26.379±8.171)2)3)4)5)6)7)8)5.375±0.931)2)3)4)5)6)7)8)

3 討 論

缺血性腦血管疾病發(fā)病的重要病理生理緩解為腦缺血后的再灌注損傷，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡引起神經(jīng)元死亡。臨床上腦缺血/再灌注損傷的主要表現(xiàn)形式為缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖所造成的神經(jīng)細(xì)胞損傷。有研究表明〔4〕，線粒體是有氧呼吸產(chǎn)生能量的主要場(chǎng)所，因而真核細(xì)胞凋亡的過(guò)程中線粒體發(fā)揮著樞紐作用，在神經(jīng)細(xì)胞凋亡的控制中線粒體通路發(fā)揮著決定性作用。因而通過(guò)對(duì)分布在線粒體核膜、外膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的Bcl-2家族蛋白的釋放進(jìn)行調(diào)控能夠?qū)?xì)胞凋亡進(jìn)行控制。

Bcl-2是Bcl基因家族中第一個(gè)被確認(rèn)的能對(duì)抗細(xì)胞凋亡的基因，具有抑制細(xì)胞凋亡和延長(zhǎng)細(xì)胞壽命的功能，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)〔5〕，Bcl-2基因主要是通過(guò)阻斷細(xì)胞凋亡的公共信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)抗細(xì)胞凋亡作用的。Bcl-2可通過(guò)阻滯線粒體釋放細(xì)胞色素(Cyt)-C、凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)，或通過(guò)作用于聚二苯二甲酯酸(PTP)的有關(guān)蛋白阻止PTP的開(kāi)放，維持線粒體內(nèi)膜跨膜電位，發(fā)揮抑制細(xì)胞凋亡的功能〔5〕。Bax是 Bcl-2基因家族中最主要的促凋亡基因，多以非活性單體形式分布于胞質(zhì)中，只有在接收到凋亡信號(hào)刺激后，發(fā)生分子構(gòu)象改變，移位并插入線粒體外膜后形成Bax/Bax同源二聚體蛋白通道，破壞線粒體膜的完整性，致使Cyt-C釋放入細(xì)胞中，與胞質(zhì)內(nèi)的凋亡蛋白酶活化因子(Apaf)-1和Caspase-9酶原形成復(fù)合物并相互作用，進(jìn)而激活Caspase蛋白酶系統(tǒng)，引發(fā)一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生凋亡信號(hào)，促進(jìn)凋亡的發(fā)生〔6〕。Gibson等〔7〕發(fā)現(xiàn)，Bax基因能夠促進(jìn)凋亡蛋白的釋放以及Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活，保護(hù)缺氧缺血的細(xì)胞。Hara 等〔5〕觀察了沙土鼠短暫前腦缺血 5 min再灌注 48、72、96 h及7 d后，發(fā)現(xiàn) Bax 的表達(dá)隨再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，至 72 h達(dá)頂峰，96 h立即消失。Chen等〔8〕通過(guò)血管阻斷法造成大鼠全腦缺血模型，在海馬 CA1 區(qū)，Bax mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)均明顯增多，由此可支持這樣的假說(shuō)：Bax 可能是導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡的原因。Bcl-2家族的促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白，共同參與了Bax依賴性的線粒體細(xì)胞外膜通透性的調(diào)節(jié)，因而決定細(xì)胞存亡的關(guān)鍵是細(xì)胞內(nèi)兩種對(duì)立蛋白間的比率〔9〕。研究發(fā)現(xiàn)，通常情況下Bcl-2和Bax兩種蛋白的表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定，而當(dāng)Bax在細(xì)胞內(nèi)超表達(dá)時(shí)，Bax/Bax同源二聚體的數(shù)量明顯增多，細(xì)胞對(duì)死亡信號(hào)的反應(yīng)性增強(qiáng)，啟動(dòng)凋亡〔8〕；而當(dāng)Bcl-2高表達(dá)時(shí)，則Bax/Bax二聚體大量解離，生成更為穩(wěn)定的Bcl-2/Bax異源二聚體，對(duì)抗其誘導(dǎo)凋亡的作用，使細(xì)胞存活期延長(zhǎng)。黃芪具有益氣固表、補(bǔ)氣生陽(yáng)、抗毒生肌的功能，藥理學(xué)研究結(jié)果顯示，黃芪因其復(fù)雜的成分而具有多種多樣的生理活性，其能夠顯著提高腦缺血/再灌注大鼠腦組織內(nèi)超氧化物歧化酶、一氧化氮、一氧化氮合酶的含量，清除氧自由基，增加微循環(huán)灌注，進(jìn)而減輕腦缺血/再灌注損傷。因而以黃芪提取液作為主要成分的黃芪注射液因其具有扶正祛邪、益氣養(yǎng)元、健脾利濕、養(yǎng)心通脈的功效而被廣泛應(yīng)用于對(duì)缺血性腦血管疾病的治療中〔10〕。本研究結(jié)果說(shuō)明，黃芪注射液能夠通過(guò)抑制Bax的表達(dá)來(lái)抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。因而推測(cè)，黃芪注射液對(duì)缺血性腦血管疾病作用的靶點(diǎn)為抑制Bax蛋白表達(dá)，但該推論仍需要進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

1 呂晉浩,馬 寧,袁景林,等.高分辨率磁共振檢測(cè)顱內(nèi)動(dòng)脈斑塊預(yù)測(cè)缺血性腦血管事件的研究〔J〕.中華神經(jīng)外科雜志,2015;31(5):444-7.

2 石景洋,付衛(wèi)云,毛秉豫,等.缺血性腦血管病治療中中藥應(yīng)用頻次及臨床分析〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2013;24(10):2464-7.

3 武登華,王光義.針刺結(jié)合亞低溫對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的影響〔J〕.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011;31(11):1506-9.

4 邢 菁,付 于.線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔與心腦血管缺血性疾病關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2014;34(2):265-7.

5 Hara A,Iwai T,Niwa M,etal.Immunohistochemical detection of Bax and Bcl-2 proteins in gerbil hippocampus following transient forebrain ischemia〔J〕.Brain Res,1996;711(1-2):249-53.

6 Reset R,Ortet L,Gomez G.Role of Bcl-2 family members on apoptosis:what we have learned from knock-out mice〔J〕.Front Biosci,2007;12(20):4722-30.

7 Gibson ME,Han BH,Choi J,etal.BAX contributes to apoptotic-like death following neonatal hypoxia-ischemia:evidence for distinct apoptosis pathways〔J〕.Mol Med,2001;7(9):644-55.

8 Chen J,Graham SH,Nakayama M,etal.Apoptosis repressor genes Bcl-2 and Bcl-x-long are expressed in the rat brain following global ischemia〔J〕.J Cereb Blood Flow Metab,1997;17(1):2-10.

9 王 彤,劉存志,劉玉珍,等.bcl-2/bax基因調(diào)控機(jī)體細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2008;28(16):1658-60.

10 王 晶,蔣 璐,譚展鵬,等.黃芪注射液聯(lián)合血必凈注射液對(duì)缺血性腦卒中急性期神經(jīng)保護(hù)作用的研究〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2016;14(4):349-51.

〔2016-12-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

河北省教育廳青年基金項(xiàng)目(No.Q2012002)；承德醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No.Q201506)；河北省高校重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目資助(冀教高〔2013〕4號(hào)病理學(xué)與病理生理學(xué))

1 河北中醫(yī)學(xué)院 2 河北省人民醫(yī)院

高維娟(1966-)，女，教授，主要從事腦血管病發(fā)病機(jī)制及中醫(yī)藥防治。

董雅潔(1980-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事腦血管病發(fā)病機(jī)制及中醫(yī)藥防治。

R363

A

1005-9202(2017)07-1608-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.017