譚煒 朱錦德 郭敬強 李卓鍇 姜川

浙江省麗水市中心醫(yī)院肝膽胰外科 (浙江 麗水, 323000)

原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢[1,2]。原發(fā)性肝癌起病隱匿、早期癥狀不明顯，不易于臨床診斷；同時肝癌的進展迅速，給臨床診斷和治療帶來較大的難度，不利于患者的預(yù)后[3,4]。動脈化療栓塞術(shù)是臨床治療肝癌的常用方法，對原發(fā)性肝癌患者的臨床治療具有較好的療效。高強度聚焦超聲治療也是臨床上治療惡性腫瘤的常用手段。ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是細胞外信號向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路，也是肝癌等惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及凋亡過程的重要調(diào)控通路[5,6]。本研究對經(jīng)動脈化療栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌患者的臨床效果進行研究，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 200例患者為本院2012年1月至2016年12月期間診治的高齡原發(fā)性肝癌患者，均符合衛(wèi)生部頒布的《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》(2011年版)中原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。200例患者中男111例，女89例，年齡63～75歲，平均(68.5±7.5)歲。以本院同期200例健康體檢者為對照組。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝癌介入治療禁忌患者；原發(fā)性肝癌終末期患者；已行外科切除術(shù)者；嚴(yán)重的心腎功能異常者。兩組患者在一般臨床資料方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所有患者均知情并簽署知情同意書，研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 分組與治療方法 200例高齡原發(fā)性肝癌患者分為兩組：A組(100例)采用動脈化療栓塞術(shù)治療，B組(100例)采用動脈化療栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察兩組患者治療前及治療不同時間段(6個月、12個月、24個月)的Child-Pugh評分與生存率。評分標(biāo)準(zhǔn)為：肝臟功能損害程度輕，肝儲備能力較好：5～6分；肝臟功能損害程度較重，肝儲備能力一般：7～9分；肝臟儲備能力較差：≥10分。并分析患者治療前后血清中ERK通路蛋白表達變化及炎癥因子水平變化。

1.4 試驗試劑 P53檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；Caspase6、Caspase9檢測試劑盒購自Abcam公司；Laminin5γ2、E-cadherin檢測試劑盒購自R&D公司；β-catenin檢測試劑盒購自Sigma公司；Ras、Raf蛋白檢測試劑盒購自O(shè)mega公司；MEK及ERK1/2蛋白檢測試劑盒購自Lab Sciences公司；HIFα和COX2蛋白檢測試劑盒購自Amresco公司；基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2及MMP9蛋白檢測試劑盒購自天根生物工程有限公司；TIMP1及TIMP2蛋白檢測試劑盒購自碧云天生物工程有限公司；C-myc檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。所有操作均按照試劑盒說明書進行。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后Child-Pugh評分及生存率情況 見表1。

表1 兩組患者治療前后Child-Pugh評分及生存率情況

與A組同時間點比較，#P<0.05

2.2 兩組患者治療前后細胞凋亡相關(guān)蛋白表達情況 見表2。

表2 兩組患者治療前后細胞凋亡相關(guān)蛋白表達比較

與本組治療前比較，*P<0.05；與A組治療前后比較，#P<0.05

2.3 兩組患者治療前后Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表達情況 見表3。

表3 兩組患者治療前后Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表達比較

與本組治療前比較，*P<0.05;與A組治療前后比較，#P<0.05

2.4 兩組患者治療前后Ras及Raf蛋白表達情況 見表4。

表4 兩組患者治療前后Ras及Raf蛋白表達比較

與治療前比較，*P<0.05;與A組治療后比較，#P<0.05

2.5 兩組患者治療前后MEK及ERK1/2蛋白表達情況 見表5。

表5 兩組患者治療前后MEK及ERK1/2蛋白表達比較

與本組治療前比較，*P<0.05

2.6 兩組患者治療前后基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑表達情況 見表6。

表6 兩組患者治療前后基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑表達情況

與本組治療前比較，*P<0.05;與A組治療后比較，#P<0.05

3 討論

原發(fā)性肝癌是臨床上消化道系統(tǒng)中的常見惡性腫瘤，且隨著人口老齡化的加劇及飲食習(xí)慣的改變，其發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢。經(jīng)動脈化療栓塞術(shù)是臨床上治療原發(fā)性肝癌的首選措施，且已經(jīng)顯示了較好的優(yōu)越性。本研究在對經(jīng)動脈化療栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌的臨床效果進行研究時發(fā)現(xiàn)，與動脈栓塞治療組患者相比，經(jīng)動脈化療栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌患者后Child-Puge評分明顯降低，且生存率明顯高于動脈栓塞治療組患者(P<0.05)；治療后患者血清中促凋亡蛋白P53、Caspase6、Caspase9、Laminin5γ2、E-cadherin、β-catenin、ERK通路蛋白、HIFα和COX2及基質(zhì)金屬蛋白酶表達明顯升高，而C-myc表達明顯降低。因此，經(jīng)動脈化療栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌的效果與其抑制患者體內(nèi)激活的ERK通路有關(guān)。

MAPK/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了細胞外信號向細胞核轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程，也是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的主要途徑[7，8]。但是目前尚未見到關(guān)于該信號通路在動脈栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌的報道。在分析RNAi介導(dǎo)的IGF1R基因沉默對肝癌細胞生長、遷移與侵襲影響的研究中發(fā)現(xiàn),ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白表達的被抑制是該手段影響肝癌細胞病理過程的關(guān)鍵[9]。在地西他濱聯(lián)合丙戊酸鈉促進肝癌細胞凋亡的研究中也證實二者能夠通過抑制ERK通路蛋白Ras、Raf及MEK和ERK1/2蛋白的表達發(fā)揮促肝癌細胞凋亡的作用[10]。以往的研究也發(fā)現(xiàn)，Ras癌基因能夠誘導(dǎo)肝腫瘤的發(fā)生，且此過程中有活性氧的參與[11]，而上皮細胞轉(zhuǎn)化序列2能夠通過調(diào)控細胞內(nèi)Rho/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促使肝癌早期復(fù)發(fā)[12]。同時，As2O3聯(lián)合AZT對肝癌HepG2細胞遷移和侵襲調(diào)節(jié)作用也與其抑制細胞內(nèi)MAPK/ERK通路蛋白有關(guān)[13]，且mTOR與ERK是Hep3B細胞cyclin D1表達的協(xié)同調(diào)控分子[14]。本研究也發(fā)現(xiàn)，與A組相比，B組患者MEK及ERK1/2蛋白表達明顯降低，提示激活的ERK通路也與原發(fā)性肝癌的發(fā)病相關(guān)，而B組患者的效果與抑制該通路相關(guān)蛋白的過表達相關(guān)。

炎癥因子是細胞內(nèi)最常見的細胞因子，也是腫瘤細胞多種生理和病理學(xué)過程的共同通路，且已有的證據(jù)顯示頸動脈栓塞治療與調(diào)節(jié)體內(nèi)炎癥因子水平有關(guān)[15]。在研究肝動脈化療栓塞術(shù)聯(lián)合射頻消融術(shù)治療原發(fā)性肝癌的療效時發(fā)現(xiàn)栓塞治療的效果與其調(diào)控患者血清中炎癥反應(yīng)因子水平有關(guān)[16]，且肝動脈化療栓塞術(shù)治療肝癌的療效也主要通過影響血清中炎癥反應(yīng)因子的水平實現(xiàn)[17]。另外，在分析高強度聚焦超聲治療小鼠皮下瘤效果時發(fā)現(xiàn)高強度聚焦超聲的治療效果與其調(diào)控血清白細胞介素IL-6和IL-10的表達有關(guān)[18]，而益脾養(yǎng)肝方聯(lián)合肝動脈化療栓塞術(shù)治療原發(fā)性肝癌的療效也主要通過影響患者體內(nèi)炎癥因子水平實現(xiàn)[19]。本研究發(fā)現(xiàn)與A組患者相比，B組患者Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表達明顯升高，表明動脈化療栓塞聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌患者的效果也與其調(diào)控患者體內(nèi)炎癥因子水平相關(guān)。

因此，經(jīng)動脈化療栓塞術(shù)聯(lián)合高強度聚焦超聲治療高齡原發(fā)性肝癌患者的效果可能與其抑制患者體內(nèi)激活的ERK通路有關(guān)。

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