蔡美艷　葉建人　李程巧　施海萍

摘要：為了明確棚栽嫁接西瓜黃瓜綠斑駁花葉病毒發(fā)病地雜草染病情況，采集3個鎮(zhèn)（街道）5個村的發(fā)病地雜草樣本進(jìn)行種類識別與酶聯(lián)免疫雙抗體夾心（DAS-ELISA）法檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)82份雜草有18科39種，其中37種雜草78個樣本染病，染病率分別為94.8%和95.1%；且在染病的雜草中有12種雜草表現(xiàn)著不同程度的黃瓜綠斑駁花葉病毒疑似癥狀，以繁縷癥狀表現(xiàn)最早，也較嚴(yán)重。說明棚栽西瓜田內(nèi)雜草種類繁多，且很多都能感染或攜帶黃瓜綠斑駁花葉病毒。

關(guān)鍵詞：黃瓜綠斑駁花葉病毒；雜草；染病性

中圖分類號：S451文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1003-935X（2016）02-0058-05

黃瓜綠斑駁花葉病毒（cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV），煙草花葉病毒屬（Tobamovirus），是我國重要的農(nóng)業(yè)檢疫性有害生物[1]。2011年，浙江省溫嶺市在西瓜上首次發(fā)生CGMMV危害，發(fā)病面積100.7hm2，直接經(jīng)濟(jì)損失216.0萬元[2]。由于CGMMV危害性大，國外國內(nèi)對該病害的發(fā)生規(guī)律和影響因素進(jìn)行了大量的研究，有人研究認(rèn)為，CGMMV寄主范圍狹窄，自然侵染主要是黃瓜、西瓜等葫蘆科植物，人工接種可侵染藜科的莧色藜（Chenopodiumamaranticolor）、茄科的蔓陀羅（Daturastramonium）和玄參科的藍(lán)豬耳（Toreniafournieri）[3-4]。對于CGMMV在自然條件下侵染葫蘆科作物外的其他植物鮮見研究和報道。本研究采集了浙江省溫嶺市棚栽嫁接西瓜CGMMV發(fā)病田塊內(nèi)自然生長的農(nóng)田雜草，觀察癥狀，通過酶聯(lián)免疫雙抗體夾心（DAS-ELISA）方法檢測，明確棚栽西瓜田雜草的染毒性，為黃瓜綠斑駁花葉病毒病的綜合防治提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1采集地概況

于2015年，在浙江省溫嶺市（121°0950″～121°440″E，28°1245″～28°3202″N）轄區(qū)毛竹搭建的塑料大棚，棚內(nèi)整理成2條面積相同的種植畦，施足基肥覆蓋地膜后移栽定植嫁接西瓜苗[砧木（砧木品種：京研牌京欣砧，北京京研益農(nóng)科技發(fā)展中心生產(chǎn)；神通力，遼寧大連中裕種業(yè)有限公司生產(chǎn)）、接穗（西瓜品種：天山牌早佳8424，新疆哈密瓜種業(yè)公司生產(chǎn)；好利得牌小蘭，廈門好利得種苗公司生產(chǎn)）的培育和嫁接苗管理均在該市所屬的育苗場進(jìn)行；頂接法嫁接[5]，采集嫁接西瓜植株發(fā)生CGMMV大棚內(nèi)各種農(nóng)田雜草，采集地基本情況詳見表1：①嫁接西瓜苗人工接種CGMMV誘發(fā)地塊，橫峰街道后洋鄭村（該市農(nóng)作物病蟲觀測場內(nèi)），在瓜苗移栽后5d、20d2次人工剪葉接種誘發(fā)，保證種植地發(fā)病。接種方法：先用剪刀剪除嫁接西瓜苗頂葉或倒2葉片約半張形成傷口，然后在毒源（剪取的2014年棚栽嫁接西瓜病株藤蔓用西貝樂牌榨汁機(jī)榨成汁液，保存在-20℃的冰柜內(nèi)，使用時原汁液經(jīng)室內(nèi)自然解凍汁]液中浸漬，使傷口粘滿汁液。采集前嫁接西瓜除了適量澆（灌）水外，不施（追）肥料、不除草、不使用農(nóng)藥防治病蟲害等影響CGMMV發(fā)生擴(kuò)展的田間管理。②嫁接西瓜自然發(fā)病地，箬橫鎮(zhèn)團(tuán)結(jié)村、長塘村和濱海鎮(zhèn)永勝村、永進(jìn)村嫁接西瓜CGMMV發(fā)病種植戶各1戶，在嫁接西瓜苗移栽定植后，根據(jù)生長需要，正常澆（灌）水、施（追）肥料、除草、噴施農(nóng)藥防治病蟲害以及整枝打頂、人工授粉、摘瓜等田間管理。

1.2采集與鑒定

在嫁接西瓜CGMMV發(fā)病大棚內(nèi)的種植畦上，雜草以株為單位，對地膜邊緣、溝邊、地膜破損處生長的雜草，先拍照，觀察形態(tài)變化，再取樣；株型小的雜草直接采集全株；株型大或較大的雜草，用75%乙醇擦拭消毒后的普通剪刀剪取帶葉片的莖稈（藤蔓）1～2條；然后裝入裝樣袋，標(biāo)記、編號；每剪取1個樣品，剪刀用75%乙醇擦拭多遍消毒1次，避免取樣時樣品間相互污染CGMMV。采集的樣品帶回檢測[6]；暫時不能檢測的樣品保存在-20℃的冰柜（冰箱）內(nèi)，檢測時取出，并將樣品自然解凍后檢測。

雜草種類識別參照文獻(xiàn)[7-8]。

1.3檢測

病毒檢測采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法（DAS-ELISA）[9]，病毒檢測試劑盒購自美國安德珍（Adgen）生物公司，為96孔酶聯(lián)板。

2結(jié)果與分析

2.1雜草染毒性

經(jīng)對該市橫峰街道后洋鄭村和濱海鎮(zhèn)永勝村、永進(jìn)村以及箬橫鎮(zhèn)長塘村、團(tuán)結(jié)村5個嫁接西瓜種植戶CGMMV發(fā)病地采集的禾本科（Gramineae）看麥娘（A.aequalis）、莎草科（Cyperaceae）碎米莎草（C.iria）等18科39種雜草82個樣品進(jìn)行DAS-ELISA檢測后匯總，結(jié)果除了永勝村病地上的蒲公英（T.mongolicum）、臭薺（C.didymus）和團(tuán)結(jié)村病地上的葡莖通泉草（M.miquelii）、陌上菜（L.procumbens）外，其他37種雜草78個樣品均呈陽性，即染病，雜草種類染病率94.8%，樣品染病率95.1%，其中人工接種誘發(fā)染病發(fā)病地田間雜草染病種類最多，計15科33種，全部呈陽性，染病率達(dá)100%；而自然染病發(fā)病地，濱海鎮(zhèn)永勝村、永進(jìn)村以及箬橫鎮(zhèn)長塘村、團(tuán)結(jié)村雜草種類分別為10科17種、8科14種和9科15種、2科3種，染病率則為88.2%、100%和86.7%、100%（表2），平均為93.72%。圖1是橫峰街道后洋鄭村31種雜草在酶聯(lián)板上的顯色程度與對照的比較，雜草顯色與對照試劑無異。說明棚栽嫁接西瓜CGMMV發(fā)病種植地上自然生長的雜草也會感染CGMMV，并且染病率極高。

2.2癥狀表現(xiàn)

在染病的雜草中，經(jīng)形態(tài)比對，龍葵（S.nigrum）、雀舌草（S.alsine）、牛繁縷（M.aquaticum）、小飛蓬（C.canadensis）、黃花蒿（A.annua）、野茼蒿（C.crepidioides）、苦苣菜（S.oleraceus）、香薷（E.ciliata）、空心蓮子草（A.Philoxeroides）、紫云英（A.sinicus）、酸模葉蓼（P.lapathifolium）、丁香蓼（L.prostrata）等12種雜草有疑似CGMMV癥狀，集中在人工接種誘發(fā)地塊，疑似癥狀比較明顯的有：龍葵（S.nigrumL.）、雀舌草（S.alsine）、牛繁縷（M.aquaticum）、小飛蓬（C.canadensis）和黃花蒿（A.annua）等5種，其中牛繁縷表現(xiàn)癥狀最早，葉片有黃綠斑駁或褪綠、皺縮嚴(yán)重，后期逐漸枯萎（圖2）。

3小結(jié)與討論

農(nóng)田雜草種類繁多[7，10-11]，一般條件下農(nóng)田雜草都可以在棚栽嫁接西瓜地上自然發(fā)生和生長。棚栽嫁接西瓜地上雜草感染或攜帶CGMMV，無論其在侵染環(huán)節(jié)的作用如何，均大大增加了CGMMV在棚栽嫁接西瓜上的傳播和發(fā)病能力，因此，在開展雜草CGMMV研究的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)棚栽嫁接西瓜除草工作，切斷再侵染途徑，保障棚栽嫁接西瓜的正常健康生長。

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