胡新梅，農(nóng)清清*，趙惠柳，廖 娟，朱雪鳳，李江恒，費夢雪，賈雪姣

·論著·

廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR水平研究

胡新梅1，2，農(nóng)清清1，2*，趙惠柳3，廖 娟1，朱雪鳳1，李江恒1，費夢雪1，賈雪姣1

目的 探討廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR(MC-LR)的水平及其相關(guān)影響因素。方法 選取2014年12月—2016年6月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的來自廣西地區(qū)的144例原發(fā)性肝癌患者作為肝癌組，另選取同期本院體檢健康者158例作為對照組。調(diào)查兩組一般人口學(xué)特征、日常生活方式、飲食習慣等，并采集靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清乙型肝炎病毒(HBV)感染標志物，包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎核心抗體(HBcAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(HBeAb)，以及MC-LR水平和谷胱甘肽(GSH)含量。結(jié)果 肝癌組血清MC-LR水平為(0.078±0.039)μg/L，高于對照組的(0.061±0.041)μg/L(t=3.351，P<0.01)。肝癌組和對照組中不同性別、年齡、民族、HBsAg陽性、吸煙、飲酒情況者血清MC-LR水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；對照組中不同HBV感染者血清MC-LR水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；肝癌組和對照組中不同食魚生、溝塘水飲用史者血清MC-LR水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。肝癌組GSH含量為(9.1±5.1)μg/L，低于對照組的(15.2±8.1)μg/L(t=-6.899，P<0.001)。按照對照組血清MC-LR的中位數(shù)(0.042 μg/L)進行暴露程度分層，肝癌組低暴露和高暴露人群GSH含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-1.290，P=0.200)；對照組低暴露人群GSH含量高于高暴露人群(t=2.090，P=0.038)。結(jié)論 廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌患者血清MC-LR水平高于健康人群，GSH含量低于健康人群。MC-LR高暴露的健康人群血清GSH含量低于MC-LR低暴露人群。食用魚生、長期飲用溝塘水可升高血清MC-LR水平。

肝腫瘤；微囊藻毒素類；谷胱甘肽

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，1964年、1990年和2000年中國人口肝癌標化死亡率分別為22.17/10萬、26.59/10萬和32.21/10萬，廣西肝癌粗死亡率為34.39/10萬(男性和女性分別為55.30/10萬和13.21/10萬)[1]，南寧地區(qū)肝癌死亡率高達48.13/10萬[2]，已經(jīng)嚴重威脅我國居民的生命健康。肝癌的發(fā)生、發(fā)展受多種因素的影響，俞順章等[3]將微囊藻毒素(MC)、肝炎病毒和黃曲霉毒素列為我國南方原發(fā)性肝癌高發(fā)的三大環(huán)境危險因素。MC具有強烈的肝毒性，有80多種同分異構(gòu)體，其中MC-LR毒性最大，研究最廣[4]。因此，本研究通過測定廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌患者血清MC-LR水平，初步探索MC-LR與原發(fā)性肝癌發(fā)生的關(guān)系，為廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌的防治提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2014年12月—2016年6月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的來自廣西地區(qū)的144例原發(fā)性肝癌患者作為肝癌組，其均經(jīng)病理、臨床診斷確診。原發(fā)性肝癌診斷標準：(1)病理診斷：肝組織學(xué)檢查證實為原發(fā)性肝癌；肝外組織的組織學(xué)檢查證實為肝癌。(2)臨床診斷：如無其他肝癌證據(jù)，甲胎蛋白(AFP)對流法陽性或放射免疫法≥400 μg/L，持續(xù)4周以上，并排除妊娠、活動性肝病、生殖腺胚源性腫瘤及轉(zhuǎn)移性肝癌；影像學(xué)檢查有明確肝內(nèi)實質(zhì)性占位病變，排除肝血管瘤和轉(zhuǎn)移性肝癌，并具有下列條件之一：①AFP≥200 μg/L；②典型的原發(fā)性肝癌影像學(xué)表現(xiàn)；③無黃疸而堿性磷酸酶或谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶明顯增高；④遠處有明確的轉(zhuǎn)移性病灶或有血性腹腔積液，或腹腔積液中發(fā)現(xiàn)癌細胞；⑤明確的乙型肝炎陽性的肝硬化[5]。排除復(fù)發(fā)患者以及放、化療后患者。同期選取本院體檢健康者158例作為對照組。所有研究對象在同一地區(qū)居住10年以上，且均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 一般情況調(diào)查 研究對象按照統(tǒng)一的自制表格，由經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查員，采用面訪的調(diào)查方式按照調(diào)查表內(nèi)容逐一詢問，填寫表格。調(diào)查內(nèi)容包括：一般人口學(xué)特征、日常生活方式、飲食習慣等。其中，曾飲用溝塘水10年以上為“溝塘水飲用史”。所有研究對象隔夜空腹抽取肘靜脈血5 ml，不抗凝，待血液凝固后，于4 ℃、以3 000 r/min離心10 min，離心半徑為18.5 cm，分離血清后保存于-80 ℃，待檢。

1.2.2 實驗室檢查

1.2.2.1 乙型肝炎病毒(HBV)感染標志物的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清HBV標志物，包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎核心抗體(HBcAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(HBeAb)。試劑盒購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，操作步驟按照試劑盒說明書進行。

1.2.2.2 血清MC-LR水平及谷胱甘肽(GSH)含量的檢測 采用ELISA檢測血清MC-LR水平以及GSH含量。MC-LR檢測試劑盒購自美國Beacon公司，GSH檢測試劑盒購自南京建成生物科技有限公司，操作步驟均按照試劑盒說明書進行。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 肝癌組男125例，女19例；年齡25～83歲，平均年齡(49.6±9.3)歲，≤30歲3例，31～40歲20例，41～50歲55例，51～60歲51例，≥61歲15例。對照組男126例，女32例；年齡21～71歲，平均年齡(48.3±9.2)歲，≤30歲7例，31～40歲20例，41～50歲60例，51～60歲63例，≥61歲8例。兩組性別、年齡構(gòu)成比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.674、4.477，P>0.05)。

2.2 兩組HBV感染標志物陽性率比較 肝癌組HBsAg陽性率為85.42%(123/144)，高于對照組的10.76%(17/158)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=168.860，P<0.01)。肝癌組HBV感染(包括HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb任一陽性)率為100.00%(144/144)，高于對照組的45.57%(72/158)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=99.964，P<0.01)。

2.3 兩組血清MC-LR水平比較 肝癌組血清MC-LR水平為(0.078±0.039)μg/L，高于對照組的(0.061±0.041)μg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.351，P<0.01)。

2.4 不同人口學(xué)資料對血清MC-LR水平的影響 肝癌組和對照組中不同性別、年齡、民族、HBsAg陽性、吸煙、飲酒情況者血清MC-LR水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；對照組中不同HBV感染者血清MC-LR水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；肝癌組和對照組中不同食魚生、溝塘水飲用史者血清MC-LR水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

表1 不同人口學(xué)資料對血清MC-LR水平的影響±s，μg/L)

注：a為F值；-為無此數(shù)值；MC-LR=微囊藻毒素-LR，HBsAg=乙型肝炎表面抗原，HBV=乙型肝炎病毒

2.5 兩組血清GSH含量比較 肝癌組GSH含量為(9.1±5.1)μg/L，低于對照組的(15.2±8.1)μg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-6.899，P<0.001)。

2.6 按MC-LR暴露程度分層后肝癌組與對照組GSH含量的比較 MC-LR暴露程度按照對照組血清MC-LR的中位數(shù)分為低暴露(MC-LR<0.042 μg/L)和高暴露(MC-LR≥0.042 μg/L)。肝癌組中低暴露(n=34)人群GSH含量為(7.9±4.2)μg/L，高暴露(n=110)人群GSH含量為(9.7±5.5)μg/L，兩者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-1.290，P=0.200)。對照組中低暴露(n=79)人群GSH含量為(16.2±6.7)μg/L，高于高暴露(n=79)人群的(14.1±9.3)μg/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.090，P=0.038)。

3 討論

根據(jù)全國死因調(diào)查顯示，我國惡性腫瘤病死率逐年上升。全世界每年約50萬人因肝癌死亡，我國每年約為12萬人[6]。21世紀初，廣西肝癌粗死亡率為34.39/10萬，自20世紀70年代以來，廣西肝癌死亡率一直占據(jù)本地區(qū)惡性腫瘤的首位[7]，成為威脅廣西居民身體健康的主要因素之一。過去認為，原發(fā)性肝癌的發(fā)生與肝炎病毒感染、黃曲霉毒素的攝入有關(guān)[3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌的發(fā)生可能也與飲用水中的MC污染有關(guān)[8]。MC是由生長于富營養(yǎng)化水體中的銅綠微囊藻、水華魚腥藻、顫藻等產(chǎn)生的一組具有肝臟毒性的單環(huán)多肽毒素，其中以MC-LR含量最多且對人體危害最大[9]。

本研究檢測廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌人群血清MC-LR水平，結(jié)果顯示肝癌組血清MC-LR水平高于對照組。進一步分層分析后發(fā)現(xiàn)，性別、年齡、民族、HBsAg、HBV、吸煙、飲酒等因素對人群血清MC-LR水平無明顯影響。然而，無論是肝癌組還是對照組，食魚生的人群血清MC-LR水平顯著高于不食魚生的人群。廣西南寧地區(qū)居民有喜食魚生的風俗習慣，常見的魚生種類主要為鯉魚、鯽魚、草魚等淡水魚。有研究發(fā)現(xiàn)，魚類、蝦蟹長期暴露于MC時，體內(nèi)會出現(xiàn)MC的生物富集。徐海濱等[10]對我國淡水湖泊MC污染水品及其在魚體內(nèi)的動態(tài)變化進行研究，結(jié)果顯示魚肌肉和肝臟中均檢測出MC，10月份魚的肌肉中MC水平達(1.81±0.03)ng/g，肝臟中MC水平高達(31.66±4.36)ng/g。劉婉婧等[11]研究表明，MC進入人體的途徑主要是通過飲用水和食用MC污染的水產(chǎn)品(魚、蝦等)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，有溝塘水飲用史的人群血清MC-LR水平也顯著高于無溝塘水飲用史的人群，這可能與溝塘水中MC含量較高有關(guān)。李硯等[12]在原發(fā)性肝癌高發(fā)地區(qū)應(yīng)用流行病學(xué)、生態(tài)學(xué)、病例-對照等方法，研究慢性暴露于MC與肝癌的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)飲用溝塘水的人群肝癌發(fā)生率是飲用深井水人群的8倍；溝塘水中MC水平高達1.158 μg/L，高于我國生活飲用水衛(wèi)生標準規(guī)定的限值1 μg/L。董傳輝等[13]發(fā)現(xiàn)海門、泰興淮安和揚中地區(qū)的溝塘水MC檢出率為16.7%～42.8%。陳剛等[14]對海門市不同類型的飲用水中MC水平的檢測表明，溝塘水中的最高水平達300 ng/L，水MC污染與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。有研究表明，20世紀80年代中期以前，廣西南寧市崇左縣、扶綏縣地表水嚴重缺乏，導(dǎo)致農(nóng)業(yè)、人畜飲水緊張，居民主要飲用溝塘水，常人畜共用，有機污染嚴重[15]。因此，推測南寧地區(qū)肝癌人群血清MC-LR水平較高的原因可能與過去長期飲用溝塘水有關(guān)。

正常情況下，機體可以保持氧化應(yīng)激和抗氧化應(yīng)激平衡，保護組織細胞免受氧化損傷。GSH是細胞內(nèi)主要的抗氧化物質(zhì)，具有多種生物學(xué)功能，可以清除細胞內(nèi)自由基和過氧化氫，保護細胞免受氧化應(yīng)激損傷。研究認為，GSH可能在MC-LR的解毒過程中起了至關(guān)重要的作用[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌組中MC-LR高、低暴露人群的GSH含量無差異；但對照組中MC-LR高暴露人群GSH含量低于MC-LR低暴露人群，提示MC-LR進入機體后，在肝臟出現(xiàn)病變的早期，MC-LR已經(jīng)開始消耗機體內(nèi)的GSH，使機體抗氧化防御能力下降。目前，對于MC引起的嚴重肝損傷尚無有效的治療措施。因此，今后除加強飲用水中MC水平的監(jiān)測，還需要針對肝癌高發(fā)區(qū)MC高暴露人群加強健康教育及健康促進工作，糾正不良的生活習慣，從而有效減少MC的暴露及損傷。

本研究背景：

隨著農(nóng)業(yè)、工業(yè)的發(fā)展，水中微囊藻毒素(MC)污染加劇。MC-LR可以直接污染水源，然而常規(guī)水處理工藝對MC-LR的去除效果有限。MC-LR能夠在水生生物體內(nèi)蓄積，并經(jīng)過食物鏈進入人體，威脅人類健康。本研究初步探討肝癌發(fā)生與MC污染的關(guān)系，為今后肝癌的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù)，提醒人們對MC污染造成的危害引起足夠的重視。

作者貢獻：農(nóng)清清進行文章的構(gòu)思與設(shè)計、對文章整體負責；農(nóng)清清、趙惠柳進行研究的實施與可行性分析、負責文章的質(zhì)量控制及審校；胡新梅、廖娟、朱雪鳳、李江恒、費夢雪、賈雪姣進行數(shù)據(jù)收集；胡新梅、廖娟進行數(shù)據(jù)整理；胡新梅進行統(tǒng)計學(xué)處理、結(jié)果的分析與解釋、撰寫論文；胡新梅、農(nóng)清清進行論文的修訂。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：賈萌萌)

Levels of Serum Microcystin-LR of Patients with Primary Liver Cancer in Guangxi

HUXin-mei1,2,NONGQing-qing1,2*,ZHAOHui-liu3,LIAOJuan1,ZHUXue-feng1,LIJiang-heng1,FEIMeng-xue1,JIAXue-jiao1

1.DepartmentofEnvironmentalHygiene,SchoolofPublicHealth,GuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China2.KeyLaboratoryofPreventionandControlofHighlyPrevalentDiseasesinGuangxiUniversities,Nanning530021,China3.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China

*Correspondingauthor：NONGQing-qing,Professor;E-mail：nnqq26@163.com

Objective To preliminarily study the levels of serum microcystin-LR (MC-LR) and its related influencing factors of patients with primary liver cancer in Guangxi.Methods A total of 144 patients with primary liver cancer admitted in the Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University from December 2014 to June 2016 were selected as liver cancer group and 158 healthy subjects underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the control group.The general demographic characteristics,daily lifestyle,eating habits of the two groups were investigated.The venous blood samples were collected and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect infection markers of serum hepatitis B virus (HBV),including hepatitis B surface antigen (HBsAg),hepatitis B surface antibody (HBsAb),hepatitis B core antibody (HBcAb),hepatitis B e antigen (HBeAg),hepatitis B e antibody (HBeAb),and MC-LR levels and glutathione (GSH) contents.Results The levels of serum MC-LR〔(0.078±0.039)μg/L〕 in liver cancer group were significantly higher than those in the control group〔(0.061±0.041)μg/L〕 (t=3.351,P<0.01).There were no significant differences in serum MC-LR levels among patients of different gender,age,nationality,HBsAg-infected,smoking and drinking status between the two groups (P>0.05).There was no significant difference in serum MC-LR level of different HBV-infected patients in control group (P>0.05).There was significant difference in the serum levels of MC-LR of patients having different history of eating sashimirawfishin and drinking pond water between the two groups (P<0.05).The content of GSH in liver cancer group〔(9.1±5.1)μg/L〕 were significantly lower than those in the control group (15.2±8.1)μg/L (t=-6.899,P<0.001).The degree of exposure was stratified according to the median (0.042 μg/L) of serum MC-LR in the control group,there was no significant difference in GSH contents between people with low degree of exposure and people with high degree of exposure in the liver cancer group (t=-1.290,P=0.200),and the GSH contents of people with low degree of exposure were higher than those with high degree of exposure in the control group (t=2.090,P=0.038).Conclusion The levels of serum MC-LR in patients with liver cancer in Guangxi are significantly higher than those of healthy subjects,while their GSH contents are higher than those of healthy subjects.The serum GSH contents in healthy subjects of high degree of MC-LR exposure are lower than those of low degree of MC-LR exposure.Eating sashimirawfish and long-term drinking pond water can improve the serum MC-LR levels.

Liver neoplasms;Microcystins;Glutathione

國家自然科學(xué)基金資助項目(81360420，81660529)；廣西自然科學(xué)基金資助項目(2015GXNSFAA139120)

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.11.011

2016-12-16；

2017-02-13)

1.530021廣西南寧市，廣西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室

2.530021廣西南寧市，廣西高校高發(fā)疾病預(yù)防與控制研究重點實驗室

3.530021廣西南寧市，廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科

*通信作者：農(nóng)清清，教授；E-mail：nnqq26@163.com

胡新梅，農(nóng)清清，趙惠柳，等.廣西地區(qū)原發(fā)性肝癌患者血清微囊藻毒素-LR水平研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2017，20(11)：1330-1334.[www.chinagp.net]

HU X M,NONG Q Q,ZHAO H L,et al.Levels of serum microcystin-LR of patients with primary liver cancer in Guangxi[J].Chinese General Practice，2017，20(11)：1330-1334.