張穎穎 ,付業(yè)佩 ,王 萍

(1 山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院2016級(jí)研究生，山東 濟(jì)南 250355)

羅勒多糖抗菌作用研究

張穎穎1*,付業(yè)佩2,王 萍2

(1 山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院2016級(jí)研究生，山東 濟(jì)南 250355)

目的:研究羅勒多糖對(duì)幾種常見(jiàn)致病細(xì)菌的抗菌活性。方法 采用微量肉湯稀釋法進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果:羅勒多糖對(duì)金黃色葡萄球菌(含MRSA)、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、普通變形桿菌、糞腸球菌及肺炎克雷伯菌等各菌都有較好的抗菌效果，對(duì)MRSA的抗菌能力最為突出，抗銅綠假單胞菌的效果較差。

羅勒；多糖；抗菌；MIC

羅勒(OcimumbasilicumL.)屬于唇形科(Lamiaceae) 羅勒屬，是藥食兩用植物之一，屬于一年生草本，主要分布于中國(guó)云南等南部省份及西部新疆等省份；國(guó)外主要分布于東南亞地區(qū)及南美洲、非洲部分地區(qū)。羅勒全草和種子藥用價(jià)值較高，有疏風(fēng)解表、強(qiáng)心安神、行氣活血、解毒消腫、散瘀止痛等作用，可用于感冒、咳嗽、中暑、月經(jīng)不調(diào)、跌打損傷等各種疾病的治療[1]。國(guó)內(nèi)外藥理研究證實(shí)，羅勒不同提取物分別有抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、降血脂和降血糖、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移等活性作用。Koffi Kobal[2]等人研究發(fā)現(xiàn)，羅勒中含有的甲基丁香酚、茴香腦類等成分可有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；G.Opalchenova等發(fā)現(xiàn)羅勒對(duì)金黃色葡萄球菌屬、腸球菌屬和假單胞菌均有較好抑制效果[3]；Prakash Chandra Gupta等發(fā)現(xiàn)羅勒甲醇提取物抑菌效果最佳，提示羅勒可作為防腐劑的來(lái)源[4]。Klaudija Carovic-Stanko等人對(duì)羅勒揮發(fā)油進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)其可抑制O157：H7型大腸埃希菌，可用于出血性腸炎及溶血性尿毒綜合征的治療[5]。上述研究中，多以羅勒醇提物、揮發(fā)油等為研究對(duì)象，而對(duì)羅勒多糖的研究集中于抗腫瘤方面[6]，抗菌研究相對(duì)較少。故此，本文以多種臨床常見(jiàn)細(xì)菌為對(duì)象，對(duì)羅勒多糖的抗菌作用進(jìn)行了初步研究，結(jié)果顯示該多糖具有一定的抗菌效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 羅勒多糖制備

羅勒藥材粉碎，用85%乙醇脫脂，隨后用水煎煮，提取2次，合并濾液，以95%乙醇醇沉2次，將沉淀物真空干燥，得到羅勒粗多糖成品。用無(wú)菌生理鹽水配制成10mg/mL的溶液，0.22μm無(wú)菌濾器過(guò)濾備用。

1.1.2 培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基有營(yíng)養(yǎng)瓊脂(批號(hào)20170406001)和MH肉湯(批號(hào)20170406001)，均由杭州百思生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。以上培養(yǎng)基均按說(shuō)明書(shū)配制，并按要求高壓蒸汽滅菌后備用。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)菌

實(shí)驗(yàn)所用菌株由山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院微生物教研室保存?zhèn)溆?。菌種共有16株，包含金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株CMCC(B)26003，臨床分離MRSA 5株；大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)株CMCC(B)44102，臨床分離4株(ESBL+/ESBL-各2株)；銅綠假單胞菌CMCC(B)10104、枯草芽胞桿菌CMCC(B)63501、糞腸球菌ATCC 29212、普通變形桿菌CMCC(B)49027、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117，以上各菌株以營(yíng)養(yǎng)瓊脂進(jìn)行接種，37℃24h培養(yǎng)后挑取菌苔以生理鹽水配成1×106cfu/mL的對(duì)應(yīng)菌液備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用NCCLS推薦的微量稀釋法[7]，在此基礎(chǔ)上稍有改動(dòng)，使用96孔培養(yǎng)板測(cè)定羅勒多糖的MIC(最小抑菌濃度)。按照文獻(xiàn)方法，進(jìn)行藥物倍比稀釋[8]。羅勒多糖原始濃度為10mg/mL，經(jīng)遞倍稀釋得到2-256倍稀釋梯度。另單獨(dú)設(shè)置陰性對(duì)照，直接加入菌液，觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象。同時(shí)設(shè)立藥物稀釋梯度孔和MH肉湯空白孔以輔助對(duì)比。陽(yáng)性對(duì)照孔各加入慶大霉素注射液10μL。以上藥液和對(duì)照加樣完畢后，每孔加入1×106 cfu/mL的對(duì)應(yīng)菌液10μL，每個(gè)藥物重復(fù)3次，37℃培養(yǎng)24h，以酶標(biāo)儀對(duì)培養(yǎng)板在600nm波長(zhǎng)下測(cè)定 OD值，結(jié)合細(xì)菌生長(zhǎng)情況判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié)果

經(jīng)37℃24h培養(yǎng)后，慶大霉素陽(yáng)性對(duì)照孔中無(wú)明顯細(xì)菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照孔中肉眼可見(jiàn)明顯渾濁，說(shuō)明陽(yáng)性對(duì)照有效，陰性對(duì)照細(xì)菌生長(zhǎng)良好；MH肉湯空白孔中無(wú)明顯生長(zhǎng)現(xiàn)象，證明培養(yǎng)基無(wú)污染。其他各孔測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

2.1 羅勒多糖抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表1)

由表1可見(jiàn)，羅勒多糖對(duì)不同菌株均有一定的抗菌效果。對(duì)金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株及MRSA臨床分離株均有明顯的抗菌效果，其中標(biāo)準(zhǔn)菌株MIC為0.625 mg/mL，臨床分離MRSA中的MIC在0.625～1.25mg/mL之間，抗菌效果較好。銅綠假單胞菌CMCC(B)10110的MIC是5.0mg/mL；大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株MIC是2.5mg/mL，ESBL+/ESBL-是1.25～5.0mg/mL，不同菌株之間差異較大；其他如枯草芽胞桿菌、普通變形桿菌、糞腸球菌及肺炎克雷伯菌等的MIC在1.25～2.5mg/mL之間。

3 討論

國(guó)內(nèi)外研究顯示，羅勒提取物具有具有抗菌、抗氧化、抗血栓、降血糖、降血脂、抑制腫瘤生長(zhǎng)等多方面的藥理活性[9]。國(guó)內(nèi)外對(duì)羅勒的抗菌作用做了初步研究，發(fā)現(xiàn)羅勒水提物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌抑制效果較好，醇提物對(duì)霍亂弧菌亦有明顯的效果。臨床觀察證實(shí)，羅勒注射液具有抗菌消炎、防治感染等作用，而且使用安全可靠[10]。

金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌都可通過(guò)創(chuàng)傷感染，屬于臨床常見(jiàn)感染菌。銅綠假單胞菌耐藥性強(qiáng)，臨床中該菌所致感染病例比例逐年上升，其耐藥性導(dǎo)致治療難度較大[11]。MRSA是臨床常見(jiàn)耐藥菌之一，基因組中固有耐藥序列及耐藥質(zhì)粒轉(zhuǎn)移等因素是其耐藥的主要機(jī)制。隨著各種抗生素的普遍應(yīng)用，其引發(fā)的臨床感染比例越來(lái)越高。該菌易在人體內(nèi)繁殖，可降低機(jī)體免疫力，嚴(yán)重感染者可能出現(xiàn)膿毒血癥等繼發(fā)感染[12]。大腸埃希菌、普通變形桿菌、糞腸球菌及肺炎克雷伯菌均可通過(guò)腸道感染，引起各種疾??；枯草芽胞桿菌可污染食物，引起腐敗變質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)中，羅勒多糖顯示出了較為廣泛的抗菌譜，對(duì)多種常見(jiàn)臨床感染細(xì)菌都有一定抑制效果。其中，羅勒多糖對(duì)大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、普通變形桿菌、糞腸球菌及肺炎克雷伯菌等菌有相對(duì)較好的抗菌效果，尤其是對(duì)MRSA表現(xiàn)出了較強(qiáng)的抗菌能力，未受其耐藥機(jī)制的影響。但羅勒多糖對(duì)個(gè)別大腸埃希菌臨床株抗菌效果較弱，且不同菌株間有較大差異；對(duì)銅綠假單胞菌抗菌效果較差。

羅勒為藥食兩用植物，即是開(kāi)發(fā)食品的有效原材料，又可廣泛用于醫(yī)藥生產(chǎn)。有鑒于此，羅勒多糖的抗菌潛力可應(yīng)用于臨床藥物的開(kāi)發(fā)，亦可用于食品中研制新型生物防腐劑，對(duì)制藥工業(yè)及食品工業(yè)的研發(fā)均有較高價(jià)值。

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(本文文獻(xiàn)格式：張穎穎,付業(yè)佩,王萍.羅勒多糖抗菌作用研究[J].山東化工，2017，46(20)：6-7.)

ResearchontheAntibacterialActionofOcimumBasilicumL.Polysaccharide

ZhangYingying1,FuYepei2,WangPing2

(1. College of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China; 2. 2016 graduate student, College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355,China)

Objective:To study the in vitro antimicrobial activity against certain clinical bacterias. Methods: Micro both dilution method. Results:The inhibition of Ocimum basilicum L. polysaccharide onStaphylococcusaureus,Escherichiacoli,Bacillussubtilis,Proteusvulgaris,Enterococcusfaecalis,Klebsiellapneumoniaeare obvious, Especially for MRSA, it showed strong antibacterial ability, and the antibacterial effect againstPseudomonasaeruginosawas weak.

Ocimum basilicum L.; polysaccharide; antibacterial; MIC

2017-09-14

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2015-116)

張穎穎(1977—)，山東日照人，碩士研究生，山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，講師，主要從事醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)教研工作。

R781.54

A

1008-021X(2017)20-0006-02