姜雪敏，楊立志

高效液相色譜法測(cè)定耳聾左慈丸中毛蕊花糖苷含量

姜雪敏，楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江雞西 158100）

目的建立測(cè)定耳聾左慈丸中毛蕊花糖苷含量的高效液相色譜法。方法采用Agilent Extend－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 m)，以乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為334 nm，柱溫為30℃。結(jié)果毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在0.054 6～1.365 0 g內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好，r＝1.000 0（n＝6），平均回收率為96.86%，RSD為0.81%（n＝6）。結(jié)論該方法結(jié)果準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、可靠，可用于耳聾左慈丸的質(zhì)量控制。

毛蕊花糖苷；耳聾左慈丸；高效液相色譜法；含量測(cè)定

耳聾左慈丸是由磁石、熟地黃、山茱萸（制）、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉、竹葉柴胡制成的中成藥，具有滋腎平肝功效，用于肝腎陰虛、耳鳴耳聾、頭暈?zāi)垦1]。方中熟地黃具有補(bǔ)血滋陰、益精填髓功效。目前，該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中尚未對(duì)熟地黃進(jìn)行定性定量，而毛蕊花糖苷為熟地黃的活效成分。為完善其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，本研究參考文獻(xiàn)[2－16]，建立了高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定耳聾左慈丸中毛蕊花糖苷含量的方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC－2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；XSE－205DU型電子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：334 nm。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷峰計(jì)算不低于3 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

稱取毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含毛蕊花糖苷54.60 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液

取本品研細(xì)，稱取5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過(guò)，蒸干，加流動(dòng)相溶解，并定容至10 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液

由于河流變化較小，具體更新方法是采用空間數(shù)據(jù)屬性自動(dòng)傳遞工具將1∶50 000 DLG數(shù)據(jù)中河流屬性自動(dòng)傳遞到1∶250 000 DLG數(shù)據(jù)相對(duì)應(yīng)的河流上完成屬性的自動(dòng)更新。由于兩套數(shù)據(jù)現(xiàn)勢(shì)性不同、比例尺不同，在自動(dòng)傳遞的過(guò)程中會(huì)造成一定的錯(cuò)誤傳遞，所以自動(dòng)傳遞后還需采用人工排查的方式對(duì)傳遞后的屬性進(jìn)行校對(duì)。另外，由于1∶250 000 DLG數(shù)據(jù)現(xiàn)勢(shì)性較差，需要參照1∶50 000 DLG數(shù)據(jù)對(duì)重大自然環(huán)境變化導(dǎo)致河流改道，水利工程新建的大型溝渠、大型水庫(kù)等進(jìn)行逐一更新并進(jìn)行綜合處理。綜合處理后的水系要注意協(xié)調(diào)與其他要素間的相互關(guān)系(特別是與等高線、公路的相互關(guān)系)。

按處方量并以相同工藝制備不含毛蕊花糖苷的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在毛蕊花糖苷色譜峰相應(yīng)位置無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明陰性樣品的其他組分對(duì)毛蕊花糖苷的測(cè)定無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察：精密吸取毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液1，2，5，10，15，25 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以毛蕊花糖苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝2.0000×106X－1.6825×102，r＝1.000 0（n＝6）。結(jié)果表明，毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在0.054 6～1.365 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果峰面積的平均值為1021449，RSD為0.68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于配制后0，4，8，12，16，20，24 h時(shí)依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積的平均值為246 265，RSD為0.82%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為150518）樣品，分別依法制備6份供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果毛蕊花糖苷平均含量為0.106 mg／g，RSD為1.05%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的同一批（批號(hào)為150518，含量為0.106 mg／g）樣品2.5 g，共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入0.26 g／mL毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液0.8，1.0，1.2 mL，依法制備供試溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為150518，160204，150902的3批樣品中，毛蕊花糖苷含量分別為0.106，0.092，0.108 mg／g。

表1 毛蕊花糖苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

3 討論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)選擇

對(duì)毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液在300～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果毛蕊花糖苷在334 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，靈敏度最高，故選擇334 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相選擇

考察了甲醇－水（20∶80）、甲醇－冰醋酸－水（60∶0.4∶39.6）、乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）等不同的流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）為流動(dòng)相時(shí)分離較好，且柱效較高，故選乙腈－0.1%磷酸溶液（17∶83）為流動(dòng)相。

3.3 提取方法選擇

考察了甲醇、80%甲醇、稀乙醇為提取溶劑時(shí)的提取效果，結(jié)果以甲醇為提取溶劑時(shí)毛蕊花糖苷含量明顯高于后二者。本研究中還比較了回流0.5，1.0，1.5 h時(shí)的提取效果，結(jié)果表明回流0.5 h毛蕊花糖苷提取率與回流1.0 h和1.5 h的提取率基本相同，故選取回流0.5 h。

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Content Determination of Acteoside in Erlongzuoci Pills by HPLC

Jiang Xuemin,Yang Lizhi
(Jixi Center for Food and Drug Inspection and Testing,Jixi,Heilongjiang,China158100)

Objective To establish an HPLC methods for the content determination of acteoside in Erlongzuoci Pills.MethodsThe method was achieved on an Agilent Extend－C18column using acetonitrile－0.1%phosphoric acid(17∶83)as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL／min,and the detection wavelength was 334 nm.The column temperature was 30℃.ResultsQuercetin showed good linear relationship in the range of 0.054 6－1.365 0 μg,r＝1.000 0(n＝6),and the average recovery was 96.86%withRSD was 0.81%(n＝6).ConclusionThe method is accurate,simple,reliable and can be applied for the quality control of Erlongzuoci Pills.

acteoside;Erlongzuoci Pills;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)01－0033－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.011

2016－10－01；

2016－11－27)

姜雪敏（1979－），女，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)工作，（電子信箱）jiangxuemin88＠163.com。