周里欣，林彥朝，章運(yùn)典，陳洪英

（仲景宛西制藥股份有限公司，河南南陽 474500）

黃芩配方顆粒的高效液相色譜指紋圖譜研究

周里欣，林彥朝，章運(yùn)典，陳洪英

（仲景宛西制藥股份有限公司，河南南陽 474500）

目的建立黃芩配方顆粒的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜。方法以黃芩苷為參照物，采用Thermo BDS Hypersil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 m），以乙腈－0.5%磷酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為1.0 mL／min，柱溫為40℃，檢測(cè)波長為280 nm。結(jié)果通過HPLC指紋圖譜分析，共標(biāo)示出黃芩配方顆粒有8個(gè)共有色譜峰，相似度均大于0.90，確認(rèn)3號(hào)峰為黃芩苷。結(jié)論該研究建立的黃芩配方顆粒HPLC指紋圖譜法，操作簡單，穩(wěn)定可靠，可為黃芩配方顆粒的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

黃芩；配方顆粒；高效液相色譜法；黃芩苷；指紋圖譜

黃芩配方顆粒由黃芩經(jīng)水提取、濃縮干燥制成。黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效。主要用于濕溫、暑濕，胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動(dòng)不安[1]。黃芩配方顆粒的功能主治與黃芩一致，用于臨床配方，因攜帶和服用方便，深受患者歡迎，如何控制產(chǎn)品質(zhì)量、確保產(chǎn)品療效至關(guān)重要。目前，通常以黃芩苷為指標(biāo)性成分用薄層色譜法、高效液相色譜(HPLC)法等方法測(cè)定[2]，但不能全面控制產(chǎn)品質(zhì)量。中藥配方顆粒近年來發(fā)展迅速，檢測(cè)手段日益提高，通過紅外光譜、高效液相色譜法等建立指紋圖譜，全面控制產(chǎn)品質(zhì)量是發(fā)展趨勢(shì)[3－15]。黃芩主要含有黃芩苷等黃酮類化合物、揮發(fā)油、萜類物質(zhì)、多糖多種成分[16－17]，其中黃酮類是其主要化學(xué)成分和活性成分。因此，本研究中以黃芩苷為參照，建立全面反映各成分信息的指紋圖譜，望能科學(xué)地控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀及其化學(xué)工作站，Waters 2998型PDA檢測(cè)器，四元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器均由美國沃特世公司提供，UP超純水機(jī)(四川優(yōu)普超純科技有限公司)；Hangping FA2104V型電子天平(上海精密儀器儀表有限公司)；BP211D型十萬分之一電子天平(德國賽多利斯公司)；KQ－300DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，磷酸、乙醇等其他試劑均為分析純；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)為110715－201318，純度93.3%），購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用；黃芩配方顆粒（仲景宛西制藥股份有限公司，批號(hào)分別為150701，150801，150901，151001，151002，151003）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈為流動(dòng)相A，0.5%磷酸溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫見表1；檢測(cè)波長：280 nm；柱溫：40℃；流速1.0 mL／min。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。

供試品溶液：取裝量差異項(xiàng)下本品，混勻，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

表1 流動(dòng)相梯度表

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別吸取黃芩苷對(duì)照品溶液和上述供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，在擬訂色譜條件下，供試品溶液色譜在與黃芩苷對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，經(jīng)PDA檢測(cè)器峰純度測(cè)試，二者一致，理論板數(shù)大于2 500，各色譜峰均達(dá)到基線分離。結(jié)果見圖1。

2.4 指紋圖譜方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn)：取本品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果見圖2、表2、表3。按中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算相似度，有較高的相似度，精密度良好。

圖1 黃芩苷高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取本品，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見圖3、表4、表5，有較高的相似度，說明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取本品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見圖4、表6、表7，有較高的相似度，重復(fù)性良好。

2.5 指紋圖譜的確定

取本品6批，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。將6批樣品的測(cè)定結(jié)果以cdf的數(shù)據(jù)格式導(dǎo)出，導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012年，130723版本），以中位數(shù)作為模板，計(jì)算各樣品的整體相似度，結(jié)果見圖5。以中位數(shù)法生成對(duì)照?qǐng)D譜。

表2 黃芩配方顆粒指紋圖譜精密度試驗(yàn)匹配結(jié)果

表3 黃芩配方顆粒指紋圖譜精密度試驗(yàn)相似度

圖3 黃芩配方顆粒穩(wěn)定性指紋圖譜測(cè)定結(jié)果

表4 黃芩配方顆粒指紋圖譜穩(wěn)定性試驗(yàn)匹配結(jié)果

3 討論

3.1 提取方法選擇

取裝量差異項(xiàng)下本品，混勻，研細(xì)，取1 g，2份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，分別超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min和加熱回流30 min，放冷，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果二者差異不大，因超聲簡便快捷，選擇超聲30 min即可。

表5 黃芩配方顆粒指紋圖譜穩(wěn)定性試驗(yàn)相似度

圖4 黃芩配方顆粒指紋圖譜重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

表6 黃芩配方顆粒指紋圖譜重復(fù)性試驗(yàn)匹配結(jié)果

表7 黃芩配方顆粒指紋圖譜重復(fù)性試驗(yàn)相似度

3.2 提取溶劑選擇

圖5 對(duì)照指紋圖譜（3號(hào)峰是黃芩苷）

取裝量差異項(xiàng)下本品，混勻，研細(xì)，取1 g，3份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入70%乙醇、甲醇、水各25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，用相應(yīng)的溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果用70%乙醇提取，色譜峰較多，含量較高，故選擇70%乙醇為提取溶劑。

3.3 流動(dòng)相選擇

Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈為流動(dòng)相A，分別以0.5%磷酸、0.5%冰乙酸溶液為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長為280 nm；柱溫為40℃；流速為1.0 mL／min。結(jié)果表明，0.5%磷酸溶液為流動(dòng)相，各特征峰分離度較好，故選擇0.5%磷酸溶液為流動(dòng)相B。

3.4 波長選擇

試驗(yàn)過程中共選擇了250，280，350 nm 3種波長，結(jié)果在280 nm波長下，各特征峰凸顯，故選擇280 nm作為檢測(cè)波長。

3.5 柱溫選擇

為了保持色譜分析的一致性，設(shè)定柱溫來控制不同試驗(yàn)環(huán)境下的色譜分析，試驗(yàn)過程中共選擇了30，35，40℃3種柱溫，結(jié)果在40℃下，分離效果較好。

3.6 色譜柱選擇

試驗(yàn)中考察了Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）、Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）、Welch Xtimate C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）3種色譜柱。結(jié)果表明，在相同色譜條件下，Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）得到的色譜圖，各峰的分離及峰形均最好。

建立黃芩配方顆粒指紋圖譜，有利于全面控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效。但配方顆粒水煎煮提取，脂溶性成分提取率低，其是否具有和飲片同等的藥效，有待進(jìn)一步研究。

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Study on the HPLC Fingerprint of Scutellaria Baicalensis Dispensing Granules

Zhou Lixin，Lin Yanchao，Zhang Yundian，Chen Hongying

（Zhongjing Wanxi Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanyang，Henan，China474500）

ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthefingerprintdeterminationof ScutellariaBaicalensisDispensingGranules.MethodsThe samples were analyzed by HPLC with baicalin as the reference.Thermo BDS Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）chromatographic column was used for analysis with acetonitrile and 0.5%phosphoric acid solution as mobile phase in gradient elution manner，1.0 mL／min e flow rate，40℃column temperature，280 nm detection wavelength were adopted.ResultsBy analyzing the fingerprint，8 peaks existed including the peak of baicalin.The similarity of the samples was more than 0.90.ConclusionThe established HPLC fingerprint of Scutellaria Baicalensis Dispensing Granules is simple and dependable.The method can provide scientific basis for the quality control of Scutellaria Baicalensis Dispensing Granules.

Scutellaria Baicalensis；dispensing granules；HPLC；baicalin；fingerprint

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)02－0027－05

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.008

2016－10－18；

2016－11－28)

周里欣（1964－），女，工程師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┵|(zhì)量控制，（電子信箱）wxzlx891005＠163.com。