張穎 王金穎/天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

豬偽狂犬病的防控

張穎 王金穎/天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）又稱Aujeszky氏病，是由豬偽狂犬病毒引起的豬、牛、羊等多種家畜和野生動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢（除豬以外）及腦脊髓炎為主要癥狀的一種急性傳染病，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。

在我國(guó)，1947年劉永純首次報(bào)道偽狂犬病例以來(lái)，目前已擴(kuò)大到全國(guó)20多個(gè)省市，并呈暴發(fā)流行，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)報(bào)道，2006年我國(guó)豬“無(wú)名高熱”（高致病性藍(lán)耳?。┮才c偽狂犬病緊密相關(guān)。

一、病原學(xué)

由于PRV蛋白序列與牛皰疹病毒、馬皰疹病毒、水痘病毒同源性很高，因而歸屬于皰疹病毒科甲皰疹病毒亞科。

PRV具有皰疹病毒的典型結(jié)構(gòu)，呈球形或橢球形，直徑介于150～180 nm之間，有囊膜，囊膜表面由長(zhǎng)約8～10 nm呈放射狀的纖突。

PRV只有一種血清型，但不同毒株在毒力和生物學(xué)特性等方面存在差異。PRV基因組為線狀雙鏈DNA，由長(zhǎng)獨(dú)特區(qū)（Unique long region，UL）、短獨(dú)特區(qū)（Unique short region，US）以及位于US兩側(cè)的末端重復(fù)序列（Terminal repeat，TR）與內(nèi)部重復(fù)序列（Internal repeat，IR）組成。對(duì)PRV基因組序列測(cè)定發(fā)現(xiàn)由72個(gè)閱讀框組成，可編碼70種蛋白，目前已發(fā)現(xiàn)和命名的有g(shù)B、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM、gN 11種糖蛋白。編碼gC、gE、gG、gI、gM、和gN的基因?yàn)椴《緩?fù)制非必需的，gB、gC、gD、gE和gI與病毒的毒力有關(guān)。此外，胸苷激酶（Thymidine kinase，TK）、核苷酸還原酶（Ribonucleotide reductase，RR）、蛋白激酶（Protein kinase，PK）、堿性核酸外切酶（Alkaline exonuclease，AN）和脫氧尿苷三磷酸激酶（Deoxyuridine triphosphokinase，dUTPase）等幾種酶也與病毒的毒力密切相關(guān)，其中TK是PRV最主要的毒力基因，其作用是可催化脫氧胸腺嘧啶核苷磷酸化成dIMP，并進(jìn)一步磷酸化為dTTP，成為DNA分子的基本成分。糖蛋白gB、gC、gD在免疫方面最為重要。PR尚沒(méi)有特效的治療方法，疫苗接種則是防制乃至根除該病的主要手段之一。

二、流行病學(xué)

PRV可引起豬、牛、羊、犬、貓、兔、鼠等多種動(dòng)物發(fā)病，其中豬和鼠類是自然界中病毒的主要貯存宿主。該病毒可通過(guò)空氣傳播，健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本??；污染的飼料、飲水、乳汁、帶毒的鼠等通過(guò)消化道可傳播本病；通過(guò)配種接觸污染的陰道粘膜和精液進(jìn)行傳播；感染PR的母豬通過(guò)胎盤垂直傳播給胎兒，由于母豬免疫球蛋白不能通過(guò)胎盤屏障，所以PRV對(duì)胎兒的感染性是致命的。

當(dāng)前臨床上多見(jiàn)豬偽狂犬病與圓環(huán)病毒、藍(lán)耳病病毒、豬瘟病毒、流感病毒及流行性腹瀉病毒等混合感染，使病情更加復(fù)雜，增大了發(fā)病率和死亡率，且多發(fā)生于免疫過(guò)PR疫苗的豬群，據(jù)陳煥春院士分析，這是由于PRV的抗原性發(fā)生重大變異且沒(méi)有出現(xiàn)毒力增強(qiáng)，現(xiàn)用的疫苗免疫不能產(chǎn)生足夠交叉保護(hù)，使得免疫的豬群中出現(xiàn)流產(chǎn)、弱仔或產(chǎn)下仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀后死亡等癥狀。

三、臨床癥狀

PR的臨診表現(xiàn)主要取決于感染病毒的毒力、感染量、感染途徑、豬只的年齡及動(dòng)物的免疫情況，以幼齡豬的病情最嚴(yán)重。

新生仔豬感染PRV后，通常表現(xiàn)出口吐白沫、角弓反張等不同的神經(jīng)癥狀，嗜睡、鳴叫、嘔吐、拉稀，1～2 d內(nèi)死亡，發(fā)病率和死亡率可達(dá)到100%。

斷奶仔豬臨床癥狀與新生仔豬相似，發(fā)熱（41℃～42℃），精神倦怠，厭食，一般都會(huì)出現(xiàn)呼吸道癥狀，易并發(fā)細(xì)菌感染，當(dāng)出現(xiàn)中樞神經(jīng)癥狀時(shí)，易發(fā)生死亡，死亡率可達(dá)50%。

生長(zhǎng)豬、育肥豬、成年母豬、公豬PR最常見(jiàn)為呼吸道癥狀。懷孕的母豬無(wú)論是頭胎還是經(jīng)產(chǎn)都發(fā)病，并通過(guò)胎盤屏障感染胎兒，發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎兒或死胎。另外，PR會(huì)引起種豬不育癥，母豬配不上種，返情率高，公豬睪丸腫脹、萎縮，喪失種用能力。據(jù)近年來(lái)的報(bào)道，以往在豬罕見(jiàn)的奇癢癥狀，目前常可看到。

四、病理變化

PRV感染一般無(wú)特征性病變，可見(jiàn)上呼吸道黏膜、扁桃體出血、水腫，肺水腫并有散在性小葉性壞死、出血，肺炎等。肝、脾等實(shí)質(zhì)臟器?？梢?jiàn)灰白色壞死病灶，胃腸粘膜呈卡他性或出血性炎癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀明顯時(shí)，可見(jiàn)腦膜明顯充血，腦脊髓液增多。

五、診斷

PR僅根據(jù)臨床癥狀及流行病學(xué)特點(diǎn)很難做出診斷，確診需借助實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。目前，常用的方法有病毒分離、免疫熒光抗體試驗(yàn)、血清中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、核酸探針技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)等。

（一）病毒分離鑒定

病毒的分離是診斷PR的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”，以腦組織、扁桃體含毒量最高，將分離到的病毒用標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清做中和試驗(yàn)以確診本病。

（二）血清學(xué)試驗(yàn)

應(yīng)用最廣泛的有中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、乳膠凝集試驗(yàn)(LAT)、間接免疫熒光技術(shù)等。其中，中和試驗(yàn)作為病毒檢測(cè)的經(jīng)典方法，特異性、敏感性最好，是世界上多數(shù)國(guó)家檢測(cè)PR的法定方法之一，并被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定的診斷方法，但由于技術(shù)條件高、時(shí)間長(zhǎng)，難以在臨床應(yīng)用，而ELISA不但具有中和試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)外，3～4 h可出試驗(yàn)結(jié)果，敏感度高于中和試驗(yàn)，豬偽狂犬gE抗體ELISA試劑盒為PR的根除創(chuàng)造了條件，豬群血清gE抗體的監(jiān)測(cè)成為免疫-根除計(jì)劃有效的手段，另外該抗體的檢測(cè)可用于評(píng)價(jià)豬群中PR野毒感染程度，從而有利于對(duì)該病的防控。乳膠凝集試驗(yàn)簡(jiǎn)單快速、敏感性高、特異性強(qiáng)，適合于基層現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大面積普查，其檢測(cè)結(jié)果與中和試驗(yàn)無(wú)顯著差異。美國(guó)已經(jīng)有商品化的LAT試劑盒供臨床使用，我國(guó)華中農(nóng)大也于國(guó)內(nèi)率先研制成功LAT試劑盒。

（三）分子生物學(xué)診斷

1.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。PCR在病毒診斷中的優(yōu)勢(shì)在于其速度快，1d內(nèi)完成初步診斷，但因?yàn)镻CR的特異性，很多環(huán)節(jié)需要謹(jǐn)慎操作，以免樣品污染了外源DNA。

2.核酸探針技術(shù)。DNA探針特異性強(qiáng)、敏感性高，廣泛用于PR的診斷。該技術(shù)即可檢測(cè)血清學(xué)陽(yáng)性的病料，也可檢測(cè)呈潛伏感染狀態(tài)的病毒DNA。

六、防控

（一）疫苗預(yù)防

目前，國(guó)內(nèi)已研制成功豬偽狂犬病的常規(guī)弱毒疫苗、滅活疫苗、基因缺失弱毒疫苗等。其中基因缺失疫苗已在生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用，注射基因缺失疫苗后，動(dòng)物不產(chǎn)生針對(duì)缺失蛋白的抗體，因而可應(yīng)用相應(yīng)缺失蛋白建立的血清學(xué)方法將野毒感染與基因缺失疫苗免疫后豬群產(chǎn)生的抗體區(qū)分開(kāi)來(lái)，這也是實(shí)施偽狂犬病根除計(jì)劃的重要措施之一。在美國(guó)和歐洲一些發(fā)達(dá)國(guó)家的PR根除計(jì)劃中，此類疫苗功不可沒(méi)。

1.滅活疫苗。安全性高，無(wú)散毒及潛伏感染危險(xiǎn)，但滅活疫苗不能將內(nèi)源性蛋白抗原提呈給免疫系統(tǒng)，因而不能誘導(dǎo)細(xì)胞毒T細(xì)胞反應(yīng)，且免疫劑量大，偶爾出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，故在當(dāng)前防治中起輔助性預(yù)防作用。

2.自然基因缺失弱毒疫苗。目前使用較多的是Bartha、Buk毒株。Bartha株是1961年匈牙利學(xué)者Bartha分離，通過(guò)雞胚細(xì)胞傳代使強(qiáng)毒株丟失很多基因片段而致弱，但由于毒力基因TK沒(méi)有缺失，存在毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)，另外，該毒株自牛分離而來(lái)，對(duì)豬的免疫原性差。BUK株是將Bucharest株通過(guò)雞胚成纖維細(xì)胞繼代培養(yǎng)800代以上獲得，經(jīng)分析，該毒株在US區(qū)的gE基因缺失。由于弱毒疫苗存在毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)，會(huì)導(dǎo)致疾病的流行，且沒(méi)有充分致弱或過(guò)度致弱的疫苗株不僅不能誘導(dǎo)足夠的免疫保護(hù)反應(yīng)，反而可能引起疾病或免疫抑制。因此，使用受限。

3.基因工程疫苗。利用基因工程方法缺失PRV的主要毒力基因——胸苷激酶（TK）和與病毒增殖無(wú)關(guān)的糖蛋白基因gE或gG而得，缺失TK使得本病的毒力、潛伏感染的能力和返強(qiáng)的可能性大大降低，較為安全，但TK基因?qū)儆诿傅鞍谆?，不能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因此不能利用血清學(xué)將疫苗毒和感染野毒區(qū)分開(kāi)來(lái)，鑒于此，在缺失TK基因的基礎(chǔ)上又缺失了相應(yīng)的糖蛋白或插入一個(gè)報(bào)告基因，使所得到的突變株不能產(chǎn)生被缺失的糖蛋白，免疫動(dòng)物就不能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并可利用血清學(xué)將疫苗毒和感染野毒區(qū)分開(kāi)來(lái)，從而建立健康豬群，為以后根除和消滅本病打好基礎(chǔ)。華中農(nóng)大研制的豬偽狂犬病毒鄂A株TK-/gE-和TK-/gG-兩種雙基因缺失疫苗和相應(yīng)的鑒別診斷試劑，已廣泛用于生產(chǎn)，該疫苗是國(guó)內(nèi)最早應(yīng)用的PR基因缺失疫苗，可誘導(dǎo)全面的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，安全性好，保護(hù)率高。

4.亞單位疫苗。在已發(fā)現(xiàn)的11種糖蛋白中，gB、gC、gD均能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，因此該三種糖蛋白是研制PRV亞單位疫苗的首選蛋白。該疫苗安全性高，不含任何病原微生物，接種后不會(huì)發(fā)生急性、持續(xù)或潛伏感染，并可將產(chǎn)生的免疫應(yīng)答與野毒感染所產(chǎn)生的應(yīng)答區(qū)分。但由于產(chǎn)品開(kāi)發(fā)費(fèi)用高，免疫原性差，難以推廣。

5.核酸疫苗。核酸疫苗既能誘導(dǎo)體液免疫，又可產(chǎn)生細(xì)胞免疫，并能有效誘導(dǎo)專一性T殺傷細(xì)胞的能力且沒(méi)有副作用，具有較大的開(kāi)發(fā)潛力。

6.載體重組疫苗。由于PRV基因組較大，可供外源基因插入或替代的非必需基因較多，因此，可制備成多價(jià)活疫苗，大大減少了疫苗注射對(duì)豬只的刺激。

在我國(guó)，陳煥春等曾提出我國(guó)的偽狂犬病根除計(jì)劃，根據(jù)國(guó)情，種豬建議使用gE基因缺失滅活疫苗，育肥用的仔豬和架子豬可以使用雙基因缺失的弱毒疫苗，具有明顯的預(yù)防效果。

（二）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

提高飼養(yǎng)管理水平，搞好環(huán)境衛(wèi)生，實(shí)施全進(jìn)全出，并積極開(kāi)展防鼠滅鼠工作。

（三）加強(qiáng)檢驗(yàn)檢疫

PR在我國(guó)之所以廣泛流行，危害巨大，與種豬頻繁交換有直接關(guān)系，必須嚴(yán)把豬場(chǎng)引種關(guān)，嚴(yán)禁從疫區(qū)引種，提倡自繁自養(yǎng)。

（略）