王 樂(lè)

（遼寧省朝陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 122000）

淺談接種疫苗動(dòng)物和感染動(dòng)物的區(qū)分

王 樂(lè)

（遼寧省朝陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 122000）

1 關(guān)于口蹄疫的基本情況

關(guān)于疑似口蹄疫的最早描述是由意大利修道士希羅尼穆斯弗拉卡斯于1514年在威尼斯提出。患病的動(dòng)物拒絕飲食，口腔黏膜呈紅色，在口腔及腳上有水泡，而且大多數(shù)患病動(dòng)物最終能夠康復(fù)。這500多年前的描述與目前流行的口蹄疫具有很強(qiáng)的相似性。口蹄疫是影響偶蹄動(dòng)物最重要的疾病之一，涉及到的動(dòng)物包括牛、水牛、豬、綿羊、山羊等大約70種左右的野生動(dòng)物[1]。這種疾病幾乎在世界上每一個(gè)養(yǎng)殖家畜的地方都有存在。全世界超過(guò)100個(gè)國(guó)家仍然受口蹄疫疾病的影響。一些經(jīng)濟(jì)比較發(fā)達(dá)的國(guó)家已經(jīng)根除了這種疾病。然而，一些無(wú)疫病的國(guó)家一旦遭受口蹄疫的入侵，將會(huì)引發(fā)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2 口蹄疫癥狀及其感染

口蹄疫是一種發(fā)病和傳播都極為迅速的傳染病,主要臨床表現(xiàn)包括口炎、心肌炎、心機(jī)功能衰退、口腔及腳上有水泡或者腐爛等，在我國(guó)被列為一類動(dòng)物疫病，目前采取注射口蹄疫疫苗的方式來(lái)預(yù)防豬群感染。對(duì)于無(wú)口蹄疫和口蹄疫零星爆發(fā)的國(guó)家檢測(cè)已感染FMDV的動(dòng)物是極其重要的。以前感染過(guò)口蹄疫病毒的動(dòng)物和接種疫苗的動(dòng)物血清中都存在相應(yīng)血清型的血清中和抗體，在貿(mào)易動(dòng)物的流通中，區(qū)分以前受FMDV感染的動(dòng)物和剛剛接種疫苗的動(dòng)物十分關(guān)鍵[2]。這些動(dòng)物的口咽部在感染后28天仍然攜帶著具有傳染性的病毒。這些感染動(dòng)物雖然在臨床癥狀上是正常的，但是可能長(zhǎng)期攜帶病毒，對(duì)于牛來(lái)說(shuō)，可能繼續(xù)攜帶病毒2～3年，這樣的動(dòng)物將成為一個(gè)傳染源，將病毒傳染給其他動(dòng)物。事實(shí)上，這一過(guò)程已在非洲水牛身上得到證實(shí)，但在單獨(dú)對(duì)黃牛進(jìn)行的試驗(yàn)中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)上述過(guò)程。動(dòng)物感染病毒后，會(huì)產(chǎn)生具有免疫原性的結(jié)構(gòu)蛋白(SP)和非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP)。由純化滅活病毒146S作為疫苗誘導(dǎo)的抗體幾乎完全是針對(duì)病毒的SP。因此，關(guān)于如何區(qū)分感染動(dòng)物和接種疫苗的動(dòng)物的問(wèn)題，可以通過(guò)對(duì)NSP抗體的檢測(cè)進(jìn)行解決。

3 關(guān)于NSP抗體的檢測(cè)

檢測(cè)NSP抗體可以區(qū)分感染和免疫動(dòng)物以及另外一些已報(bào)道的使用蛋白質(zhì)包括單個(gè)蛋白2C或3ABC。早期檢測(cè)使用放射免疫沉淀和酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印跡分析技術(shù)檢測(cè)NSP抗體。但是，面對(duì)大量血清樣品時(shí)，放射免疫沉淀和酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印跡分析技術(shù)無(wú)法進(jìn)行快速檢測(cè)，因此酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)作為一種替代技術(shù)被開(kāi)發(fā)。目前，已經(jīng)建立了一些檢測(cè)FMDV NSP抗體的ELISA。然而，這些ELISA實(shí)驗(yàn)中使用了具有特異性的結(jié)合物，為同時(shí)檢測(cè)來(lái)自不同物種的血清造成了困難。利用桿狀病毒表達(dá)FMDV NSP作為抗原，將豚鼠體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的多克隆抗體作為捕獲和檢測(cè)抗原的結(jié)合物，從而，開(kāi)發(fā)了具有獨(dú)立性的阻斷ELISA。后來(lái)多克隆抗體被替換為高通量的單克隆抗體。

4 NSP抗體檢測(cè)的局限性

由于NSP抗體的長(zhǎng)期存在[3]，陽(yáng)性動(dòng)物可能是病毒的攜帶者，但是不一定仍然處于感染狀態(tài)。然而，檢測(cè)NSP抗體并不能用于檢測(cè)動(dòng)物是否攜帶病毒，因?yàn)橐恍┏掷m(xù)感染動(dòng)物的血清沒(méi)有對(duì)NSP的抗體[4]。在以前接種過(guò)疫苗的動(dòng)物體內(nèi)可能存在較少病毒的復(fù)制，使得動(dòng)物處于帶毒狀態(tài)。目前，沒(méi)有血清學(xué)試驗(yàn)是可以區(qū)分口蹄疫病毒攜帶者和具有血清學(xué)反應(yīng)的動(dòng)物。此外，如果疫苗來(lái)自沒(méi)有純化的細(xì)胞培養(yǎng)上清液和/或含有不同程度病毒NSP蛋白的污染，尤其是多種疫苗重復(fù)接種時(shí)，很難區(qū)分疫苗接種和先前感染的動(dòng)物。

[1] 盧曾軍, 劉在新. 口蹄疫病毒研究概況[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科技, 2003(2): 69-74.

[2] 吉艷紅, 劉艷紅. 用口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白鑒別感染動(dòng)物與疫苗免疫接種動(dòng)物[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009, 30(10):101-104.

[3] Paton DJ, Ferris NP, Hutchings GH,.2009. Investigations into the cause of foot-and-mouth disease virus seropositive small ruminants in Cyprus during[J]. Transbound Emerg Dis, 2007, 56: 321–328.

[4] Brocchi E, Bergmann I, Dekker A, et al. Comparative evaluation of six ELISAs for the detection of antibodies to the non-structural proteins of foot-and-mouth disease virus[J]. Vaccine, 2006. 24: 6966–6979.

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