高娟，王添印,韓茹，李淑岷(1山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，濟南250002；2山東省職業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病防治研究院;山東省衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)療管理服務(wù)指導(dǎo)中心)

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MMP-9、TIMP-1在肺纖維化中作用的研究進展

高娟1，2，王添印3,韓茹1，2，李淑岷1，2
(1山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，濟南250002；2山東省職業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病防治研究院;3山東省衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)療管理服務(wù)指導(dǎo)中心)

肺纖維化是一種慢性進行性的肺間質(zhì)疾病，其特征是細胞外基質(zhì)(主要是膠原纖維)在肺間質(zhì)過度積聚?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和其組織抑制因子(TIMPs)在肺發(fā)育、肺損傷和肺纖維化等病理生理過程中發(fā)揮重要作用，兩者比例失衡是肺纖維化的發(fā)病機制之一。

肺纖維化；基質(zhì)金屬蛋白酶9；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1

肺纖維化是一種慢性進行性的肺間質(zhì)疾病，是呼吸衰竭的病理基礎(chǔ)之一，其病理特征為肺部炎癥引起細胞外基質(zhì)(ECM)損壞、修復(fù)、重建、沉積及肺泡持續(xù)性損傷[1]?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是由結(jié)締組織分泌、參與細胞外基質(zhì)降解的Zn2+依賴性蛋白酶家族。MMP-9為MMPs家族成員之一?；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMPs)是一種內(nèi)源性的分布廣泛的MMPs天然抑制劑。TIMP-1為TIMPs按作用靶點不同分出的一種。肺纖維化的發(fā)病機制中包括有MMP-9與TIMP-1的失衡。本研究就MMP-9與TIMP-1在肺纖維化中的作用作一綜述。

1 MMP-9與肺纖維化的關(guān)系

MMP-9是一種金屬離子依賴的蛋白酶，通過多種途徑參與肺纖維化的發(fā)病機制。大量研究顯示，在肺纖維化患者的肺泡上皮細胞、中性粒細胞和肺泡上皮細胞內(nèi)都可以檢測到MMP-9表達。正常肺組織中僅少量表達MMP-9，但當受到不同的外界刺激時，在支氣管上皮細胞、Clara細胞、肺泡Ⅱ型上皮細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞和內(nèi)皮細胞中表達MMP-9[2]。在肺纖維化的患者和動物模型中,均可以看到MMP-9基因和蛋白表達[2，3]。與正常人的成纖維細胞和肺泡巨噬細胞相比，肺纖維化患者的這些細胞中MMP-9的表達量增加[3]。在肺纖維化患者的支氣管肺泡灌洗液(BALF)中，MMP-9水平和活性均顯著增高[4]。特發(fā)性肺纖維化(IPF)是一種破壞性疾病，主要特征為上皮細胞活化、成纖維細胞/肌成纖維細胞在肺泡間隔和肺泡腔數(shù)量增加，進而出現(xiàn)ECM的異常沉積。MMP-9的作用底物主要是Ⅳ型膠原，而Ⅳ型膠原是肺泡的主要基膜成分。根據(jù)肺纖維化發(fā)生發(fā)展的特點和MMP-9的生物學(xué)特性，可以肯定它們之間存在一定的聯(lián)系。MMP-9在肺纖維化中的表達及活性增加，可以降解破壞基膜，損傷肺泡上皮與毛細血管內(nèi)皮細胞，導(dǎo)致肺泡細胞微環(huán)境的改變。這種微環(huán)境的改變，一方面可以刺激肌纖維膜母細胞與Ⅱ型上皮細胞等ECM生成細胞的活化；另一方面，纖維細胞由斷裂基膜與損傷上皮間隙進入肺泡，生成膠原，引起肺泡纖維化[5]。

在肺來源的成纖維細胞中，轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)可以通過Smad7信號抑制MMP-9表達[6]。肺內(nèi)TGF-β1含量增高可抑制MMP-9表達，進而減弱MMP對ECM的降解，增加膠原、纖維蛋白和彈性蛋白等ECM的沉淀，導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)的重建，進而形成肺纖維化[7]。TNF-α和IL-1β均能刺激多種細胞產(chǎn)生MMP-9，MMP-9也能降解IL-1β前體[8]。TNF-α能激活p38 MAPK從而誘導(dǎo)MMP-9酶原從嗜酸性粒細胞快速釋放[9]。IL-8能刺激中性粒細胞釋放儲存的MMP-9，而MMP-9能增強IL-8活性[10]。IL-13可通過多種受體亞型誘導(dǎo)MMP-9表達，MMP-9可以通過活化TGF-β1促進IL-13，進而導(dǎo)致肺纖維化，而MMP-9基因敲除的小鼠BALF和肺組織中IL-13增加[11]，說明MMP-9可抑制IL-13表達。研究結(jié)果表明，肺纖維化患者的BALF和肺組織中MMP-9水平增高及肺纖維化動物模型的肺組織中的MMP-9含量增加，均提示MMP-9與肺纖維化相關(guān)，并且MMP-9可以通過多種途徑參與肺纖維化的進展，促進肺纖維化的發(fā)生。

2 TIMP-1與肺纖維化的關(guān)系

TIMPs是一組低分子量糖蛋白，廣泛分布于組織和體液中，可由成纖維細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生和分泌。TIMPs還是多功能分子，不僅抑制MMPs活性，而且具有細胞生長因子樣作用，促進成纖維細胞增生及膠原合成，使細胞外基質(zhì)沉積并抑制其降解。TIMPs反映了氣道的修復(fù)過程，是氣道纖維化的標志[12～14]。TIMP-1由結(jié)締組織細胞與巨噬細胞產(chǎn)生，廣泛存在于組織、體液中，可以被多種細胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生。TIMP-1過量表達被認為與纖維化加速及ECM沉積有關(guān)[15]。TIMP-1在整個纖維化過程中一直呈上升趨勢并維持在一個較高水平。王媛媛等[16]發(fā)現(xiàn)，肺纖維化模型大鼠TIMP-1陽性細胞明顯增多。肺纖維化形成中一個核心環(huán)節(jié)是新生血管增多[17]。IPF患者肺內(nèi)MMPs/TIMPs動態(tài)改變與該病肺組織早期微血管密度升高而后期減少是吻合的。

3 MMP-9與TIMP-1的相互作用

TIMP-1是MMP-9的天然抑制劑，能夠與MMP-9以共價鍵的形式結(jié)合形成酶原復(fù)合物，從而特異性抑制MMP-9的活性，被認為在肺纖維化中發(fā)揮重要作用。MMPs作為參與ECM降解的主要酶家族，幾乎可以降解除多糖外的全部ECM，TIMP-1抑制MMPs的活性就會造成ECM的沉積。目前認為，TIMP-1對MMPs的抑制作用主要表現(xiàn)為兩個方面：一是能阻止MMPs酶原活化，二是可以抑制已活化的MMPs的活性[18]。TIMPs能夠與MMPs以1∶1形式形成復(fù)合體MMPs-TIMPs，從而抑制MMPs的活性。博萊霉素致大鼠肺纖維化模型研究表明，TIMPs在纖維化的肺組織中表達明顯增高。分析表明在早期肺泡炎性階段，中性粒細胞、淋巴細胞、單核-巨嗜細胞等以釋放MMPs為主；隨著病情進展，炎性細胞逐漸減少，MMPs分泌減少，成纖維細胞逐漸增多，分泌TIMPs增多，肺部表現(xiàn)為以纖維增生樣改變?yōu)橹?；最終導(dǎo)致MMPs/TIMPs比例平衡失衡，ECM代謝紊亂、膠原沉積增加，致使肺間質(zhì)纖維化過程逐步加速。譚善忠等[19]也發(fā)現(xiàn)博萊霉素誘導(dǎo)的肺間質(zhì)纖維化在炎癥早期MMP-9蛋白的表達增加，其活性增高，導(dǎo)致Ⅳ型膠原的降解增加，從而參與調(diào)節(jié)肺結(jié)構(gòu)的重塑。同時，也可能通過破壞基底膜的機制使纖維母細胞侵入肺泡腔促進肺間質(zhì)纖維化而起作用，而在此期TIMP-1則緩慢增加。在肺纖維化期，TIMP-1表達明顯增多，雖然MMP-9的表達也在增加，但其活性顯著較肺泡炎癥階段降低，說明TIMP-1通過抑制MMP-9的活性，從而抑制ECM的降解，參與肺纖維化的形成。正常生理情況下MMPs與TIMPs處于相對平衡狀態(tài)，如果MMPs/TIMPs比值升高，表明肺組織中以炎癥反應(yīng)為主，反之則表明以修復(fù)反應(yīng)為主。研究[20]證明，在纖維化的病理改變中相較于MMPs，TIMPs占主要地位，也顯示出TIMPs在肺間質(zhì)纖維化進程中的重要作用。

4 結(jié)語

肺纖維化過程是緩慢而持續(xù)性進行的，其機制相當復(fù)雜，包括多種細胞綜合作用與ECM的相互作用。MMP-9與TIMP-1作為酶類可以對ECM的平衡進行調(diào)節(jié)，總體上MMPs/TIMPs的平衡在肺纖維化過程以及與細胞因子的相互作用、促進肌成纖維細胞的生成方面起著重要作用。對MMP-9與TIMP-1更深入的研究有助于為肺纖維化的診治提供參考。

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山東省青年基金項目(ZR2011HL062)。

王添印(E-mail: 18660106658@163.com)

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2017-03-01)