錢新明

（南通市如東縣曹埠畜牧獸醫(yī)站，江蘇南通 226402）

淺談豬乙型腦炎的診斷與防治

錢新明

（南通市如東縣曹埠畜牧獸醫(yī)站，江蘇南通 226402）

隨著我國經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，豬肉己經(jīng)成為人們?nèi)粘Ｒ玫闹饕馐称分?，因此，豬肉的質(zhì)量問題逐漸被人們愈加關(guān)注。豬乙型腦炎是一種極為危險的傳染疾病，其主要通過蚊蟲進(jìn)行傳染，不僅會給豬造成死亡現(xiàn)象，更會對人們的生命財產(chǎn)安全造成嚴(yán)中的威脅。本文簡單的闡述了豬乙型腦炎的診斷方法與防治措施，找出一套可以科學(xué)、合理的診斷方法與防治措施。

豬乙型腦炎；診斷；防治

目前，人們生活水平的不斷提高，農(nóng)牧業(yè)獲得了高速發(fā)展，而高速發(fā)展背后難免存在著或多或少的問題，對于食品安全問題，我國雖然不斷的進(jìn)行加強檢測，但對其本源還不能進(jìn)行有效的防治。豬乙型腦炎作為一種可以人畜共患的傳染性疾病，急需要政府有關(guān)部門的防治，對養(yǎng)殖人員普及豬乙型腦炎的診斷方法，全面推廣豬乙型腦炎的防治措施，是加強豬乙型腦炎的根本性問題。

1 病原

豬乙型腦炎作為一種傳播性疾病，其擴(kuò)散速度極快，一旦病原體產(chǎn)生，便會迅速的傳染周圍生物，而蚊蟲作為該病毒主要傳播途徑之一，該病毒的吸附性極強，蚊蟲感染病毒便會終生攜帶病毒，蚊蟲繁殖的后代同樣也會攜帶病毒。豬乙型腦炎是一種季節(jié)性傳染疾病，秋天是其主要的活躍時間，其他時間便會潛伏在病原體與蚊蟲體內(nèi)，這種病毒對溫度的抵抗能力較低，溫度與藥品對其有著極大的傷害，但是，病毒的病原體基數(shù)較多、傳染迅速，使病毒的數(shù)量不斷的增加，在病原體與蚊蟲的雙重傳播下，豬乙型腦炎對豬的健康狀況造成的極大的威脅，更對人們的生命財產(chǎn)安全造成了嚴(yán)重的影響。

2 臨床癥狀

性別與年齡不同的豬，感染豬乙型腦炎后的臨床反應(yīng)也各不相同。

（1）豬乙型腦炎再傳染豬仔后，豬仔會出現(xiàn)無目的的沖撞與轉(zhuǎn)圈，還有出現(xiàn)抽搐與口吐白沫等現(xiàn)象，更有甚者會出現(xiàn)四肢無力、關(guān)節(jié)腫大與倒地不起等現(xiàn)象，在豬仔感染豬乙型腦炎后，飼養(yǎng)人員很難及時的發(fā)現(xiàn)與診治，導(dǎo)致豬大多會在一到兩天內(nèi)死亡。

（2）妊娠母豬感染乙腦后，臨床沒有明顯的癥狀，主要表現(xiàn)為流產(chǎn)或者是分娩后會見到木乃伊胎、死胎、畸形胎等。染病后的母豬，產(chǎn)后胎兒大小、病變有著很大的區(qū)別。在大小上，有的小如拇指、有的大如正常胎兒。早產(chǎn)仔豬多為死胎，此胎大小不一，黑褐色，有的干縮而硬固，中等大的茶褐色、暗褐色。

（3）公豬感染乙腦后，主要表現(xiàn)為單側(cè)或雙側(cè)睪丸炎，有的會出現(xiàn)腫脹。初期腫脹時，觸診為熱疼病，幾日后可消炎，但是睪丸有萎縮癥狀，導(dǎo)致公豬性欲減退，精液質(zhì)量下降，多會因無配種能力而被淘汰。

3 病理學(xué)變化

將2頭流產(chǎn)死亡母豬和5頭病死仔豬進(jìn)行解剖發(fā)現(xiàn)，流產(chǎn)母豬子宮內(nèi)膜出現(xiàn)嚴(yán)重的水腫病變，有粘稠的分泌物附著在黏膜上，有 1 頭母豬的子宮內(nèi)膜上可以觀察到小的散狀出血點，粘膜下組織存在水腫病變，胎盤呈現(xiàn)炎性軍潤。病死仔豬后驅(qū)體皮下存在彌散性水腫，全身呈現(xiàn)粉紅色，有 8 頭仔豬腦膜和脊髓硬膜存在出血點，所有病死仔豬胸腔和心包存在積液，實質(zhì)器官呈現(xiàn)濁腫及散發(fā)小出血點等癥狀。

4 實驗室檢驗

收集豬乙型腦炎感染導(dǎo)致死亡的豬仔腦組織，建立設(shè)備完善的實驗室，配備專業(yè)的檢測人員，對豬乙型腦炎使用RT-PCR檢測措施，對其進(jìn)行全面、細(xì)致的檢測工作。

4.1 RNA的抽提

用異硫氰酸胍-酚-氯仿一步方法提取基因組RNA。具體步驟如下：加入550μlTrizol劇烈震動蕩5min，室溫放置10min，加入200μl氯仿，劇烈震蕩5min，室溫放置10min后，4℃ 12000轉(zhuǎn)/min離心 10min，將上層上清液轉(zhuǎn)入新的離心管中，加入等體積的異丙醇，-20℃靜置1～2h，4℃12000轉(zhuǎn)/min離心10min，加入700μlDEPC水，4℃12000轉(zhuǎn)/min離心15min，將沉淀自然風(fēng)干，溶于適量無核酸酶的水中，用于立即反轉(zhuǎn)錄或者放于-80℃度備用。

4.2 RNA反轉(zhuǎn)錄

在新的EP管依次中加入8μlRNA模板，1微升Oligo（dt），1μlDNTP，65℃水浴5min，迅速冰浴3min，再向管中依次加入dd H20 4.5 μl，5×Buffer 4μl，反轉(zhuǎn)錄酶1μl，RNA抑制劑0.5μl，42℃水浴1h，70℃水浴15min。所得溶液立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

4.3 豬乙腦病毒基因片段的PCR擴(kuò)增

PCR反應(yīng)體系：c DNA模板4μl，10×PCRBuffer 2.5μl，dNTP3 μl，上下游引物各1μl，Taq酶1μl，ddH2O12.5μl，總體積為25μl。反應(yīng)條件：94℃，3min，94℃，30s，55℃，30s，72℃，30s，30個循環(huán)后72℃，5min。取PCR產(chǎn)物 7μl，加入Loading Buffer 1μl，在含有1.5%EB的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳檢測，紫外線燈下觀察結(jié)果。電泳結(jié)果顯示，待檢樣品擴(kuò)增到一條與陽性對照片段大小（820bp）相同的特異性條帶，說明待檢樣品乙型腦炎病毒呈陽性。

5 診斷

針對豬乙型腦炎的診斷主要有兩種方法，分為實驗室診斷與臨床診斷。而實驗室診斷又分為三種診斷措施，分別是血清學(xué)、病毒分離鑒定與分子生物學(xué)等方法。

5.1 臨床診斷

豬乙型腦炎臨床上可根據(jù)以下臨床表現(xiàn)進(jìn)行診斷：該病有嚴(yán)格的季節(jié)性，呈散在性發(fā)生，感染該病的懷孕母豬會突發(fā)性流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等，感染幼豬有明顯的腦炎癥狀，死后多出現(xiàn)腦水腫、體腔水腫等，公豬發(fā)生睪丸炎、睪丸腫大等癥狀。

5.2 血清學(xué)方法

血清學(xué)方法中有血凝抑制試驗（HI）、補體結(jié)合試驗（CT）、中和試驗（NT）、酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）、膠體金法等。

5.3 病毒分離鑒定方法

病毒分離培養(yǎng)時，可取病死豬的腦、肝臟、脾臟、腎臟等組織樣品，進(jìn)行乳鼠腦組織接種和 BHK、C6/6、Vero 等細(xì)胞分離，通過分離培養(yǎng)取得毒株，再進(jìn)行分子生物學(xué)等鑒定。

5.4 分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)方法診斷主要的檢測方法有PCR－ELISA微板雜交法、RT－PCR、套式 PCR、半套式 PCR、實時熒光 PCR 和基因芯片方法等。

6 預(yù)防

現(xiàn)在，對于豬乙型腦炎的治療并沒有有效的藥品，因此，對于豬乙型腦炎的控制，還需要養(yǎng)殖人員實施大量的防治工作，作為一種傳播迅速的病毒，我們需要找到其傳播的局限性。豬乙型腦炎對熱量與消毒藥劑有著極低的抵抗能力，所以，對于防治工作，養(yǎng)殖人員要定期的對豬群生活環(huán)境進(jìn)行清掃與消毒、及時的對豬群注入疫苗，更需要養(yǎng)殖人員制定與完善出科學(xué)的養(yǎng)殖管理制度。全面的病毒預(yù)防，保障豬健康的成長與人們的生命財產(chǎn)安全。

6.1 保持養(yǎng)殖環(huán)境

豬乙型腦炎的產(chǎn)生主要是蚊蟲將病毒帶入養(yǎng)殖區(qū)域，攜帶病毒的蚊蟲對豬進(jìn)行叮咬，便會導(dǎo)致病毒的傳染，所以，想要防止豬乙型腦炎的產(chǎn)生，對于養(yǎng)殖區(qū)域的環(huán)境需要進(jìn)行定期的清掃與消毒。全面的了解蚊蟲的生活習(xí)慣，根據(jù)蚊蟲的生存需求，找到有效防止蚊蟲產(chǎn)生的對策。對豬的排泄物與其他垃圾，養(yǎng)殖人員需要頻繁的進(jìn)行清理，防止蚊蟲的滋生，必要時可以使用強效的殺蟲藥劑，對蚊蟲進(jìn)行全面的滅殺。在清掃工作結(jié)束后，養(yǎng)殖人員需要對養(yǎng)殖區(qū)域進(jìn)行消毒工作，因為，豬乙型腦炎對與消毒藥品的抵抗能力極低，消毒工作可以對病毒進(jìn)行有效的滅殺。

6.2 及時進(jìn)行疫苗接種

在滅蚊技術(shù)尚不完善及無有效療法的情況下，控制JE流行最有效的方法就是進(jìn)行疫苗接種。我國目前常用的豬用乙腦疫苗主要有滅活疫苗和活疫苗兩種，豬乙腦鼠腦滅活疫苗于1996年由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所研制，然后出現(xiàn)了以減毒株SA14-14-2 株為抗原制備的豬乙腦減毒活疫苗。為了提高豬群免疫力（尤其是頭胎青年母豬），一般在每年蚊蟲開始活動前的1～2個月進(jìn)行乙腦疫苗預(yù)防注射，并且在以后的每個生產(chǎn)周期也要注意定期進(jìn)行疫苗的免疫接種工作。

6.3 完善養(yǎng)殖管理制度

防治感染乙腦。豬是JEV傳播的一個主要宿主，預(yù)防乙腦應(yīng)加強宿主動物的管理。重點是管理好沒有經(jīng)過夏秋季（蚊蟲活動期）的幼齡豬和從非疫區(qū)引進(jìn)的種豬，因為這些豬是乙腦易感動物，一旦感染則產(chǎn)生病毒血癥，成為傳染源。要做到保持豬體清潔，維持良好體況，提高其自身抵抗力，避免人畜混居，加強動物疫病監(jiān)測等管理措施。減少蚊蟲的孳生，做好環(huán)境及畜舍衛(wèi)生，防止積水，同時對積水、污水撒放藥劑。為避免蚊對化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生高抗性，應(yīng)對驅(qū)蚊藥進(jìn)行輪用、混用或適時的停用。對流產(chǎn)死胎、胎衣等進(jìn)行無害化處理。對于種豬，在乙型腦炎流行季節(jié)飼喂高能量高蛋白飼料，保存豬體清潔，維持豬良好體況，提高其自身免疫力。加強動物疫病監(jiān)測，重點管理沒有經(jīng)歷夏季的幼齡動物和新引進(jìn)的動物。

7 總結(jié)

豬乙型腦炎對豬的健康有著極為嚴(yán)重的危害，而目前我國對于此種疾病的治療藥品并不能完全有效，特別是這種疾病對于人類同樣有著極高的威脅。因此，為了人們的生命財產(chǎn)安全，必須要對豬乙型腦炎的產(chǎn)生進(jìn)行有效的預(yù)防工作，防止病毒的產(chǎn)生，有關(guān)部門及時的普及預(yù)防知識，讓豬可以免受豬乙型腦炎的危害，從而，顯著的提高豬的產(chǎn)量與質(zhì)量，讓我國的農(nóng)牧業(yè)可以快速的發(fā)展，為人們?nèi)粘Ｉ钐峁┌踩?、健康的肉食品，保障人們的生命財產(chǎn)安全。

[1] 蔡雨函，朱玲，周遠(yuǎn)成，等.抗流行性乙型腦炎病毒藥物的研究進(jìn)展[J].中國人獸共患病學(xué)報，2015，31（1）：77-82.