張霞，曾日彬，霍金龍*，王配，陳園園，王淑燕

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省版納微型豬近交系重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明 650201）

版納微型豬近交系RNF4基因克隆、多組織qPCR表達(dá)及功能生物信息學(xué)分析

張霞1,2，曾日彬1,2，霍金龍1,2*，王配1,2，陳園園1,2，王淑燕1,2

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省版納微型豬近交系重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650201；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明 650201）

RNF4基因調(diào)節(jié)精細(xì)胞分化和增殖過程，文章以GenBank下載的豬及近緣物種RNF4mRNA序列為參考序列，設(shè)計(jì)特異引物擴(kuò)增版納微型豬近交系（BMI）RNF4基因。應(yīng)用qPCR分析15個(gè)重要組織mRNA表達(dá)譜，并對蛋白質(zhì)序列作功能生物信息學(xué)分析，構(gòu)建多物種系統(tǒng)進(jìn)化樹。研究獲得BMI RNF4 573 bp編碼區(qū)序列（GenBank登錄號：KU705638，對應(yīng)氨基酸登錄號：AOC89056），編碼190個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量（Mw）為21.43 ku，等電點(diǎn)（pI）為6.95。多組織熒光定量表達(dá)分析表明RNF4基因在尿道球腺、睪丸、肝、肺中高水平表達(dá)；在其他11個(gè)組織中呈中低水平表達(dá)。功能生物信息學(xué)分析表明RNF4蛋白質(zhì)存在1個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，無跨膜結(jié)構(gòu)，無信號肽序列；N末端疏水，C末端疏水；有4類功能活性位點(diǎn)，位于細(xì)胞核概率為94.1%。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，BMI與狗親緣關(guān)系最近。結(jié)果為研究RNF4基因在豬精細(xì)胞分化和增殖方面作用奠定基礎(chǔ)。

RING指環(huán)；版納微型豬近交系；組織表達(dá)；生物信息學(xué)

RNF4（指環(huán)蛋白）亦稱SNURF，是一種核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子[1]。通過酵母雙雜交法發(fā)現(xiàn)，鼠RNF4可與雄激素受體（AR）DNA連接蛋白相互作用[2-4]。研究表明，RNF4與一些核蛋白類固醇激素信號蛋白激活或抑制和染色體建模等有關(guān)[5-7]。Pero等證明，RNF4基因在小鼠睪丸及不同日齡成年小鼠生殖細(xì)胞中高水平表達(dá)，但在精子形成過程中各階段表達(dá)量不同[8]，體細(xì)胞中低水平表達(dá)[9-10]。Yin等研究表明，RNF4是一種高度保守的小泛素類調(diào)節(jié)物，對DNA損傷細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)及同源重組起關(guān)鍵作用[11]。RNF4基因主要在精細(xì)胞分化和增殖過程起調(diào)節(jié)作用[8]。

版納微型豬近交系（Banna Mini-pig inbred line, BMI）是世界上首個(gè)培育成功的豬近交系，其基因高度純合、遺傳背景清楚，生理生化、解剖和疾病發(fā)生機(jī)理等與人類相似，可為新藥臨床應(yīng)用前的安全性評價(jià)、豬基因組計(jì)劃中功能基因研究、人類疾病動(dòng)物模型制作和人類異種器官移植等提供良好器官供體，具有重要科研價(jià)值和應(yīng)用前景[12-15]。隨公豬遺傳改良、配種等生殖性能方面需求提升，版納微型豬近交系部分亞系公豬雄性不育成為重要研究方向。本研究通過克隆BMI RNF4基因，分析其核酸序列特征；mRNA多組織熒光定量表達(dá)譜確定其發(fā)揮功能重要組織；功能生物信息學(xué)分析預(yù)測其蛋白質(zhì)功能，為今后深入研究指環(huán)蛋白（RNF4）基因在公豬雄性生殖中的作用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品與試劑

1.1.1 樣品

屠宰BMI耳號為0847成年公豬，取心臟、肝、脾、肺、腎、胃、腦、肌肉、十二指腸（代表小腸）、結(jié)腸（代表大腸）等常規(guī)組織，以及副性腺（前列腺、精囊腺、尿道球腺）和性腺（睪丸、附睪）等15種重要組織樣品。

1.1.2 試劑

RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、SYBR熒光定量等試劑及試劑盒均購自TaKaRa寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 RNA提取和cDNA合成

利用RNA提取試劑盒提取各組織總RNA，分別用紫外分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA濃度及純度、完整性，反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。

1.2.2 引物設(shè)計(jì)及合成

根據(jù)GenBank下載人（HSU95140）、綿羊（XM_ 004010018）、牦牛（XM_005894426）、馬（XM_ 008528091）等物種RNF4mRNA序列，結(jié)合豬表達(dá)序列標(biāo)簽EST序列（BI181237和BP157988），參照GenBank下載豬RNF4 mRNA標(biāo)準(zhǔn)序列（XM_005 666484），利用Oligo7引物軟件設(shè)計(jì)F1/R1特異引物擴(kuò)增RNF4基因全長CDS序列及部分UTR序列，設(shè)計(jì)F2/R2特異引物并以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參作多組織mRNA熒光定量表達(dá)分析，引物信息見表1。

表1 RNF4和GAPDH引物信息Table 1 Prim er information of RNF 4 and GAPDH genes

1.2.3 PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系及程序

PCR反應(yīng)總體系25μL，包括：17.75μLRNA free H2O，2.5μL 10×Ex Taq Buffer，2μL dNTP，1.5μL 50 ng·μL-1睪丸cDNA模板，各0.5μL 10 μmol·L-1上、下游引物，0.25μL 5 U·μL-1Ex Taq酶。運(yùn)行程序：95℃3min；95℃30 s，60℃40 s，72℃80 s，循環(huán)30次；72℃延伸5min結(jié)束。產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測正確后測序。

1.2.4 多組織熒光定量表達(dá)分析

以各組織cDNA為模板，GAPDH為內(nèi)參基因，F(xiàn)2/R2為特異引物，利用Eppendorf的Mastercycler ep realplex4熒光定量PCR儀qPCR擴(kuò)增。首先以睪丸cDNA作模板，以50 ng·uL-1為起始濃度，5倍倍比稀釋獲得7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，同時(shí)設(shè)置陰性對照NTC和3個(gè)重復(fù)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。以15個(gè)組織樣品cDNA為模板以GAPDH為內(nèi)參作qPCR擴(kuò)增。擴(kuò)增體系為20μL：10μL 2×SYBR試劑，6.8μL ddH2O，2μL cDNA模板，各0.6μL 10μmol·L-1上、下游引物F2/R2。運(yùn)行程序：95℃30 s；95℃5 s；56℃30 s；72℃30 s,循環(huán)40次；添加熔解曲線，95℃15 s，60℃15 s，采集熒光信號20 min，95℃15 s結(jié)束程序。

1.2.5 序列確定和數(shù)據(jù)分析

利用DNAstar軟件比對校正測序結(jié)果并作序列拼接，確定RNF4編碼序列并推導(dǎo)其氨基酸序列。2-ΔΔCt法計(jì)算各組織mRNA相對表達(dá)水平。作RNF4蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析，構(gòu)建多物種系統(tǒng)進(jìn)化樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 RNF4基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

以睪丸cDNA為模板，采用F1/R1引物作PCR擴(kuò)增，電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物長度與設(shè)計(jì)引物時(shí)預(yù)期片段一致，長度為1 302 bp，見圖1。

圖1 RNF4基因反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 RT-PCR resu lt of RNF4 gene

2.2 RNF4基因序列及其編碼氨基酸序列

利用F1/R1擴(kuò)增產(chǎn)物測序BMI RNF4全長編碼序列573 bp，獲得GenBank數(shù)據(jù)庫認(rèn)證，mRNA登錄號為KU705638，其對應(yīng)氨基酸登錄號為AOC 89056。編碼190個(gè)氨基酸，含有1個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，見圖2。

圖2 RNF4基因編碼區(qū)全長序列與翻譯的氨基酸序列Fig.2 Full length coding sequenceand am ino acidssequenceof RNF4

2.3 多組織熒光定量表達(dá)分析

以GAPDH為內(nèi)參基因，利用睪丸cDNA制作RNF4標(biāo)準(zhǔn)曲線，為y＝-3.238x+27。擴(kuò)增效率E＝103%，相關(guān)系數(shù)R2＝0.993。利用qPCR檢測RNF4基因在BMI 15種組織中表達(dá)量，ΔCtmax為肌肉組織，ΔCtmin為尿道球腺組織。根據(jù)計(jì)算結(jié)果用2-ΔΔCt法分析各組織qPCR相對表達(dá)水平繪制柱狀圖，結(jié)果表明RNF4基因mRNA在尿道球腺、肝、睪丸、肺中高表達(dá)（由高到低）；在十二指腸、前列腺、精囊腺中呈中度表達(dá)（由高到低）；在脾、腎、結(jié)腸、腦、附睪、心臟中低表達(dá)（由高到低）；在肌肉、胃中不表達(dá)，見圖3。

2.4 RNF4蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)信息

ProtParam tool程序預(yù)測BMIRNF4蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)信息和理化性質(zhì)見表2。

2.5 RNF4蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)

SOPMA程序預(yù)測的BMIRNF4蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)為：38.95%無規(guī)則卷曲（含74個(gè)氨基酸），28.95% α-螺旋（含55個(gè)氨基酸），20%延伸鏈結(jié)構(gòu)（含38個(gè)氨基酸），12.11%β-轉(zhuǎn)角（含23個(gè)氨基酸），見圖4。

圖3 RNF4基因熒光定量多組織表達(dá)譜Fig.3 M ulti-tissuesqPCR expression profileof RNF4 gene

表2 RNF4蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)信息Table 2 Primary structu re information of RNF4 protein

圖4 RNF4蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)Fig.4 The secondary structureofRNF4 protein

2.6 RNF4蛋白質(zhì)功能域

SMART程序預(yù)測BMIRNF4蛋白質(zhì)功能域，發(fā)現(xiàn)其在132-180 AA是蛋白功能域，見圖5。

圖5 RNF4蛋白質(zhì)功能域Fig.5 Protein function dom ain of RNF4 protein

2.7 RNF4蛋白質(zhì)疏水性

ProtScale程序預(yù)測BMIRNF4蛋白質(zhì)疏水性，N和C末端均疏水，在氨基酸第132位置有最大疏水值1.344，在第75位置有最小疏水值-3.844，見圖6。

2.8 RNF4蛋白質(zhì)功能位點(diǎn)分析

Prosite程序預(yù)測BMIRNF4蛋白質(zhì)功能位點(diǎn)，BMIRNF4蛋白質(zhì)含有4類功能活性位點(diǎn)，包括N-糖基化位點(diǎn)、蛋白酶C、酪蛋白激酶II等磷酸化位點(diǎn)和N-十四?；稽c(diǎn)，見表3。

2.9 RNF4蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽及在細(xì)胞中定位位置分析

TMHMM 2.0程序預(yù)測BMIRNF4蛋白質(zhì)跨膜區(qū)，結(jié)果顯示BMIRNF4蛋白質(zhì)不存在跨膜螺旋；SignalP 4.1程序預(yù)測信號肽，顯示該蛋白質(zhì)無信號肽序列；PSORTⅡ程序進(jìn)行蛋白質(zhì)在細(xì)胞中定位位置分析，顯示該蛋白質(zhì)可能位于細(xì)胞核概率為94.1%。

圖6 RNF4蛋白質(zhì)疏水性分析Fig.6 Hydropathy analysis resultof RNF4 protein

表3 RNF4蛋白質(zhì)功能活性位點(diǎn)Tab le3 Functionalactive siteofRNF4 protein

2.10 RNF4蛋白質(zhì)序列多物種系統(tǒng)進(jìn)化分析

利用DNAstar、ClusterX1.83和MEGA7.0等生物學(xué)軟件將BMIRNF4蛋白質(zhì)序列與狗（XP_853 173）、人（NP_002929）、黑猩猩（XP_008963739）、牛（NP_001040054）、羊（XP_012035821）等5個(gè)物種蛋白質(zhì)序列作比對并計(jì)算相似度，相似度分別為：95.3%、93.7%、93.7%、91.4%、90.5%。構(gòu)建6個(gè)物種分子系統(tǒng)進(jìn)化樹，見圖7。

圖7 6個(gè)物種RNF4蛋白質(zhì)序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.7 Phylogenetic tree RNF4 protein sequencesof six species

3 討論

隨著RNF4基因結(jié)構(gòu)與功能研究深入，RNF4基因突變可導(dǎo)致細(xì)胞及DNA損傷[17]。目前RNF4基因已在大鼠、小鼠[8]及人類[10]中被分離并試驗(yàn)鑒定。本研究根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中下載人、牛、羊、馬等物種RNF4mRNA序列比對，設(shè)計(jì)特異性引物，首次獲得BMI的RNF4基因CDS序列，并分析多種組織表達(dá)圖譜。

以GAPDH為內(nèi)參對照校正的qPCR多組織表達(dá)譜分析表明RNF4基因在BMI豬性腺睪丸、副性腺尿道球腺中高表達(dá)，在其他組織肝、肺中表達(dá)水平較高，且各被檢組織中表達(dá)差異顯著，Pero等發(fā)現(xiàn)RNF4基因主要在小鼠睪丸中高表達(dá)[8]，但未檢測尿道球腺、肝臟和肺臟樣品表達(dá)情況。該基因在各組織間表達(dá)差異可能與其組織功能差異有關(guān)，由此推斷該基因主要在豬睪丸和尿道球腺中發(fā)揮重要功能，今后可深入探索該基因在肝臟和肺臟中功能。

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能間存在相關(guān)性[18]。功能生物信息學(xué)分析顯示，BMIRNF4蛋白含有較多無規(guī)則卷曲螺旋，無規(guī)卷曲經(jīng)常構(gòu)成酶活性部位和其他蛋白質(zhì)特異功能部位[18]。RNF4蛋白有一個(gè)RING結(jié)構(gòu)域[9]，Pero等研究發(fā)現(xiàn)，指環(huán)蛋白與腫瘤發(fā)生有關(guān)，RNF4基因抑制生殖細(xì)胞腫瘤干細(xì)胞生長[10]。BMIRNF4蛋白不包含信號肽序列，屬于非分泌性蛋白，在游離核糖體上合成后無需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體分泌途徑修飾，可直接釋放到細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。RNF4蛋白無跨膜螺旋說明其屬于非跨膜蛋白。糖基化和磷酸化是蛋白質(zhì)化學(xué)修飾兩種主要方式，RNF4蛋白糖基化和磷酸化位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)，可為后續(xù)RNF4蛋白在精細(xì)胞分化和增殖過程中功能研究奠定基礎(chǔ)。

BMIRNF4蛋白質(zhì)序列與人、黑猩猩、狗、牛及羊等5個(gè)物種的RNF4蛋白質(zhì)序列相似性比對分析表明，相似性均在90%以上，說明RNF4基因在進(jìn)化中高度保守。通過體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該蛋白不會(huì)隨體外培養(yǎng)時(shí)間增加而功能下調(diào)，可能與控制蛋白降解機(jī)制有關(guān)，說明該蛋白穩(wěn)定性較好[8]。6個(gè)物種RNF4蛋白質(zhì)序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹表明人和黑猩猩聚為一小類，再與狗聚為一類，最后與豬聚為一大類，人和黑猩猩均屬于靈長目，狗為犬科動(dòng)物，豬為豬科動(dòng)物，均為哺乳綱動(dòng)物，豬和狗是重要的家養(yǎng)馴化動(dòng)物；牛和羊聚為一類，均屬于?？疲笾Х诸惥舷到y(tǒng)進(jìn)化分類標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究利用RT-PCR方法成功分離BMI RNF4基因全長編碼序列，采用qPCR確定其在BMI 15種組織中表達(dá)情況，進(jìn)一步對其編碼蛋白質(zhì)作功能生物信息學(xué)分析，包括基本信息、結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)、多物種比對及相似性，研究結(jié)果可為深入研究豬RNF4基因功能奠定基礎(chǔ)。

[1]Poukka H,Aarnisalo P,SanttiH,etal.Coregulator small nuclear RING finger protein(SNURF)enhances Sp1-and steroid receptor-mediated transcription by differentmechanisms[J].The Journalof Biological Chemistry,2000,275(1):571-579.

[2]Moilanen A M,Poukka H,Karvonen U,etal.Identification of a novelRING finger protein asa coregulator in steroid receptor-mediated gene transcription[J].Molecular and Cellular Biology, 1998,18(9):5128-5139.

[3]HakliM,Karvonen U,Janne O A,et al.The RING finger protein SNURF isa bifunctionalprotein possessing DNA binding activity[J]. The Journal of Biological Chemistry,2001,276(26):23653-23660.

[4]PeroR,Lembo F,PalmieriEA,etal.PATZattenuates theRNF4-mediated enhancementofandrogen receptor-dependent transcription[J].The Journal of Biological Chemistry,2002,277(5):3280-3285.

[5]Fedele M,Benvenuto G,Pero R,et al.A novelmember of the BTB/POZ family,PATZ,associates with the RNF4 RING finger protein and acts as a transcriptional repressor[J].The Journal of BiologicalChemistry,2000,275(11):7894-7901.

[6]Lyngs?C,Bouteiller G,Damgaard CK,etal.Interaction between the transcription factor SPBP and the positive cofactor RNF4.An interplay between protein binding zinc fingers[J].The Journal of Biological Chemistry,2000,275(34):26144-26149.

[7]Galili N,Nayak S,Epstein JA,et al.Rnf4,a RING protein expressed in the developing nervous and reproductive systems,interacts with Gscl,a gene within the DiGeorge critical region[J]. DevelopmentDynamics,2000,218(1):102-111.

[8]Pero R,Lembo F,Chieffi P,et al.Translational regulation of a novel testis-specific RNF4 transcript[J].Molecular Reproduction and Development,2003,66(1):1-7.

[9]Chiariotti L,BenvenutoG,Fedele M,etal.Identification and characterization of a novel RING-finger gene(RNF4)mapping at 4p16.3.[J].Genomics,1998,47(2):258-265.

[10]Pero R,Lembo F,DiVizio D,etal.RNF4 isagrowth inhibitorexpressed in germ cells but not in human testicular tumors[J].The American Journalof Pathology,2001,159(4):1225-1230.

[11]Yin Y,Seifert A,Chua JS,etal.SUMO-targeted ubiquitin E3 ligase RNF4 is required for the response of human cells to DNA damage[J].Genes&Development,2012,26(11):1196-1208.

[12]Yu P,Zhang L,Li S,etal.Screening and analysis of porcine endogenous retrovirus in Chinese Banna minipig inbred line[J]. TransplantProceedings,2004,36(8):2485-2487.

[13]Zeng R,Zeng Y Z.Molecular cloning and characterization of SLADR genes in the 133-family of the Bannamini-pig inbred line[J]. AnimalGenetics,2005,36(3):267-269.

[14]Huo JL,Wang P,Zhao Y,etal.Molecular cloning,mRNA expression and characterization of a novel FAIM1 gene from Chinese Bannamini-pig inbred line(BMI)[J].Journal of Animal and Veterinary Advances,2012,11(8):1080-1086.

[15]Wang P,Huo H L,Wang SY,etal.Cloning,sequence characterization,and expression patterns ofmembers of the porcine TSSK family[J].Genetics and Molecular Research,2015,14(4):14908-14919.

[16]孫彩霞,李明,喬瑞敏,等.豬EGFL6基因生物信息學(xué)分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,47(4):16-23.

[17]Maure J F,Moser SC,Jaffray E G,et al.Loss of ubiquitin E2 Ube2w rescueshypersensitivityofRnf4mutantcells toDNA damage[J].Scientific Reports,2016(6):26178.

[18]王鏡巖,朱圣庚,徐長法.生物化學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2002.

Cloning, muti- tissues qPCR expression and functional bioinformaticsanalysis of Banna mini-pig inbred line gene RNF4

ZHANG Xia1,2,ZENG Ribin1,2,HUO Jinlong1,2,WANG Pei1,2,CHEN Yuanyuan1,2,WANG Shuyan1,2
(1. Key Laboratory of Banna Mini-pig Inbred Line of Yunnan Province, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China; 2. School of Animal Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China)

RNF4 gene plays a regulater of sperm cell differentiation and proliferation process. The RNF4 mRNA sequence of pig and related species from GenBank was used as reference sequences, We designed specific primers and amplified Banna mini-pig inbred line (BMI) RNF4 gene. qPCR was applied to analysis the mRNA expression profiles of 15 important tissues. Protein sequence was used to carry out functional bioinformatics analysis and construct phylogenetic tree. A coding sequence of 573 bp (GenBank accession number: KU705638, the corresponding amino acid sequence accession number: AOC89056) ofBMI RNF4 was obtained, which encodes a protein of 190 amino acids, protein molecular weight 21.43 ku, and isoelectric point 6.95. Fluorescence quantitative expression indicated that RNF4 gene expressed highly in the antiprostate, testis, liver, lung, and low expression in the other 11 tissues. Functional bioinformatics analysis indicated that RNF4 protein contained one conserved domains, no transmembrane region, no signal peptide sequences; its N-terminal and C-terminal were hydrophobic; it has four kinds functional active sites and a percentage 94.1 to located in cell nucleus. Phylogenetic analysis demonstrated that BMI had the closest relationship with dog. The results of the study will lay a foundation for further study of the gene about its functions in pig sperm cell differentiation and proliferation.

RING finger;Bannam ini-pig inbred line(BMI);tissue expression;bioinform atics

Q78

A

1005-9369（2017）03-0024-07

時(shí)間2017-3-21 13:57:00[URL]http://kns.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20170321.1357.006.htm l

張霞,曾日彬,霍金龍,等.版納微型豬近交系RNF4基因克隆、多組織qPCR表達(dá)及功能生物信息學(xué)分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(3):24-30.

Zhang Xia, Zeng Ribin, Huo Jinlong, et al. Cloning, muti-tissues qPCR expression and functional bioinformatics analysis of Banna mini-pig inbred line gene RNF4[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2017, 48(3): 24-30. (in Chinese with English abstract)

2017-01-20

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31660637，31460580，31660650）

張霞（1990-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物分子遺傳學(xué)。E-mail:2574705914@qq.com

*通訊作者：霍金龍，副教授，博士，研究方向?yàn)閯?dòng)物分子遺傳學(xué)。E-mail:jinlonghuo973@163.com