牛步月，邢桂玲，查安東，高曉雯，狄生偉，王希彪

（東北農業(yè)大學動物科學技術學院，哈爾濱 150030）

豬腫瘤壞死因子α基因5'側翼區(qū)域多態(tài)性分析

牛步月，邢桂玲，查安東，高曉雯，狄生偉，王希彪

（東北農業(yè)大學動物科學技術學院，哈爾濱 150030）

利用直接測序法研究豬腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor,TNF-α）基因5'側翼區(qū)域多態(tài)性，并作多態(tài)位點與仔豬腹瀉和生長性狀關聯(lián)分析。發(fā)現(xiàn)在TNF-α基因5'側翼區(qū)域存在6個SNPs位點，建立針對SNP：-1048T/C和SNP：-1016A/G的Hha IPCR-RFLP和Taq IPCR-RFLP分型技術。Hha IPCR-RFLP研究發(fā)現(xiàn)，在民豬群體中存在TC和CC兩種基因型，在長白豬群體中存在TT、TC和CC三種基因型。Taq IPCR-RFLP研究發(fā)現(xiàn)，在民豬和長白豬群體中僅存在AG和GG兩種基因型。性狀關聯(lián)分析結果表明，TC比CC基因型民豬具有較高的35日齡斷奶重（P＜0.05）和日增重（P＜0.05）；TT基因型長白豬腹瀉指數(shù)高于TC基因型個體（P=0.06）和CC個體（P=0.06）；TT基因型長白豬出生重顯著高于TC和CC基因型長白豬（P＜0.05）。結果表明，豬TNF-α基因對仔豬腹瀉和生長性狀有一定影響，但Hha I位點能否作為新遺傳標記有待進一步研究。

TNFA基因；豬；5'側翼區(qū)域；多態(tài)性

在現(xiàn)代集約化飼養(yǎng)方式下，仔豬疾病是制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展主因。從遺傳角度提高豬群抗病力是育種技術的主要方向之一。豬抗病性狀是受微效多基因控制的數(shù)量性狀，尋找控制抗病性狀的主基因或數(shù)量性狀基因座（Quantitative trait locus, QTL），篩選相關遺傳標記并應用于育種實踐，是分子抗病育種主要手段。

腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor,TNF-α）是由單核細胞、巨噬細胞對細菌感染或其他免疫源反應分泌的一類細胞因子，是機體炎癥及免疫反應主要介導者[1]。編碼TNF-α的基因位于人類主要組織相容性復合體（Major histocompatibility complex，MHC）Ⅲ區(qū)，是研究不同疾病易感性的重要候選基因。

TNF-α基因mRNA表達受啟動子區(qū)域及轉錄后調控，如miRNA-125b可負調控TNF-α基因表達[2]。目前對TNF-α基因遺傳變異研究主要集中在啟動子區(qū)域。曹倩等將TNF-α作為炎癥性腸炎（IBD）候選基因，分析TNF-α基因啟動子區(qū)域的6個SNP與潰瘍性結腸炎患者遺傳易感性，發(fā)現(xiàn)SNP：-308G/A可能與漢族潰瘍性結腸炎遺傳易感性相關[3]。田國保等對TNF-α基因啟動子區(qū)域5個SNP與人類乙型肝炎病毒（HBV）感染宿主易感性作薈萃（Meta）分析，發(fā)現(xiàn)TNF-α基因SNP：-308G/A位點多態(tài)性可能與感染HBV后的清除有關，SNP：-238G/A位點多態(tài)性與HBV持續(xù)感染有關[4]。但目前豬TNF-α基因啟動子區(qū)域多態(tài)性與疫病相關性研究較少。

Szydlowsk等利用直接測序，在豬TNF-α基因ATG上游-791區(qū)域檢測到一個SNP（SNP:-719C/T），建立針對該SNP的PCR-SSCP分型技術，性狀關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)該位點與大白豬脂肪性狀相關[5]。孫麗等利用熒光定量PCR技術，在大白斷奶仔豬群體中分析該位點不同基因型個體mRNA表達量，發(fā)現(xiàn)TNF-α基因mRNA在斷奶仔豬脾臟、肺臟、胸腺和淋巴結等免疫器官中表達量均較高，而且TT基因型個體TNF-α表達量在肌肉、十二指腸和空腸組織中顯著高于CC基因型仔豬（P＜0.05）[6]。TNF-α基因SNP：-719C/T突變可能影響TNF-α基因mRNA表達量，但能否作為仔豬腸道病原菌抗性遺傳標記有待進一步研究。

民豬是我國地方品種，繁殖力強、肉質優(yōu)良且抗逆性強。近年，民豬抗病能力研究受到關注。王希彪等研究民豬及長白豬哺乳仔豬腹瀉發(fā)生時間和程度，發(fā)現(xiàn)兩品種仔豬均在14日齡出現(xiàn)腹瀉高峰，長白仔豬較民豬仔豬腹瀉高峰期提前。整個哺乳期，民豬仔豬腹瀉指標低于長白仔豬，成活率高于長白仔豬[7-8]。但目前民豬高抗病力分子基礎尚不清晰。

本研究選擇TNF-α作為豬抗病育種候選基因，分別構建民豬和長白豬腹瀉和健康DNA池，通過直接測序深入挖掘TNF-α基因5'側翼區(qū)域遺傳變異，建立針對SNP的快速、簡捷分型技術，并在民豬和長白豬群體中作多態(tài)位點與仔豬腹瀉等性狀關聯(lián)分析，以期為深入研究TNF-α基因抗病功能、民豬抗病性狀的遺傳機理奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物

黑龍江省蘭西縣種豬場，同期出生296頭民豬和177頭長白哺乳仔豬，常規(guī)飼養(yǎng)管理。仔豬35日齡斷奶，每天6:00和14:00逐頭檢查肛門有無紅腫和糞便污染以及豬圈內仔豬糞便狀況，記錄仔豬腹瀉評分，標準如下：糞便外觀呈條狀或粒狀，為正常腹瀉，評分0；糞便外觀呈軟便、成形，為輕度腹瀉，評分1；糞便外觀呈稠狀糞水無分離、稀便，為中度腹瀉，評分2；糞便外觀呈液體、不成形、糞水分離，粘液便或膿便，為重度腹瀉，評分3。計算腹瀉指數(shù)，腹瀉指數(shù)為仔豬出生至35日齡糞便狀況評分之和。

試驗期間，稱量仔豬初生重、7日齡重、14日齡重、21日齡重、28日齡重和35日齡斷奶重，計算日增重，日增重=（35日齡斷奶重-初生重）/35。采仔豬耳組織約0.5 g置于含70%乙醇Ep管中，-20℃保存，提取基因組DNA。

1.1.2 試驗試劑

Premix TaqTM、DNA maker DL2000、pMD18-T載體、HhaⅠ和TaqⅠ內切酶均購自TaKaRa公司；DNA提取試劑盒和凝膠回收試劑盒購自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.1.3 主要儀器和設備

-80℃低溫冰箱（購自美國Thermo Electron Corporation公司）；制冰機AF100（購自意大利SCOTS-MAN公司）；高壓濕熱全自動滅菌鍋（購自日本SANYO公司）；電子天平BP301S（購自德國塞多利斯公司）；電子天平BL610（購自德國塞多利斯公司）；微量移液器（購自德國eppendorf公司）；PCR儀（購自美國PE公司）；凝膠成像系統(tǒng)（購自美國UVP公司）；電泳槽、電泳儀（購自北京市六一儀器廠）；電子恒溫水浴鍋DK98-1（購自天津市泰特斯儀器有限公司）；離心機（購自上海安亭科學儀器廠）；DPH-9022培養(yǎng)箱（購自天津市順諾儀器科技有限公司）；生物安全柜（購自沈陽瑞豐精細化學品有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 引物設計與合成

NCBI數(shù)據(jù)庫下載豬TNFA基因序列（Genebank: NM_214022.1），利用ENSEMBL數(shù)據(jù)庫（Sscrofa10）定位豬TNFA基因染色體，將查詢序列向5'側翼區(qū)步移2 000 bp后下載序列。以下載序列為模板，利用Primer 5.0軟件設計兩對引物T1和T2，分別作啟動子區(qū)域和exon1區(qū)域擴增，其中T1和T2擴增目的片段存在部分重疊。所有引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

按照DNA提取試劑盒說明書提取基因組DNA，用1.0%瓊脂糖凝膠電泳驗證DNA完整性，紫外分光光度計檢測濃度后，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 序列擴增

利用引物T1和T2，以豬基因組DNA為模板作PCR擴增。PCR反應總體系為25μL，其中模板DNA為1μL，上下游引物各0.5μL，PCRmix 12.5μL（寶生物），加去離子水至總體積25μL。PCR擴增條件：94℃4 min；94℃45 s,56或58℃45 s,72℃45 s，擴增35個循環(huán)；72℃延伸10min，4℃保存。

PCR擴增產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，膠回收試劑盒回收目的片段（參見試劑盒說明書），回收純化后PCR產物直接測序，或者與pMD18-T載體連接，轉化E.coli DH 5α感受態(tài)細胞，經藍白斑篩選陽性克隆，利用M13引物作菌落PCR鑒定，挑選陽性菌液測序。測序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

表1 豬TNF-α基因5'側翼區(qū)域擴增引物Tab le1 Primer pairsused in theam plicationof the5'flanking region of porcine TNF-αgene

1.2.3 序列比對分析

從民豬群體中選擇高腹瀉指數(shù)和健康個體，分別構建民豬腹瀉DNA池和健康DNA池。長白豬腹瀉DNA池和健康DNA池構建方法同上。以DNA池基因組為模板，分別用T1和T2引物作PCR擴增和測序，分析測序峰圖，結合DNAMAN軟件序列比對分析測序結果，尋找突變位點。

通過分析測序峰圖，結合比對結果發(fā)現(xiàn)，測序峰圖存在套峰。在此基礎上，進一步利用特異引物，分別以10頭民豬和長白豬個體基因組DNA為模板，PCR擴增和測序，利用DNAMAN軟件序列比對分析測序結果，尋找突變位點，并用Primer5.0軟件分析突變是否引起特異限制性內切酶位點變化。

1.2.4 PCR-RFLP檢測

利用T2引物作PCR擴增，取PCR產物8.5μL、 HhaⅠ限制性內切酶0.5μL和10×Buffer 1μL，組成總體積為10μL的Hha IPCR-RFLP反應體系。混合液在37℃循環(huán)式水浴鍋中水浴4 h。酶切產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳后，UVP凝膠成像系統(tǒng)分析擴增產物酶切結果，判定基因型。利用T2引物作PCR擴增，取PCR產物8.5μL、TaqⅠ限制性內切酶0.5μL和10×Buffer 1μL，組成總體積為10μL的Taq IPCR-RFLP反應體系?；旌弦涸?5℃水浴鍋中水浴4 h，酶切產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳后，UVP凝膠成像系統(tǒng)分析擴增產物酶切結果，判定基因型。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

根據(jù)群體遺傳學理論計算得基因型和等位基因頻率。采用SAS統(tǒng)計軟件（SAS Institute Inc,Version 8.0）GLM程序作單標記方差分析，模型為：

其中Yij為性狀表型值，μ為平均值，Gi為基因型效應；eij為殘差效應。

2 結果與分析

2.1 豬TNF-α基因5'側翼區(qū)域序列擴增

利用引物T1和T2，以豬基因組DNA為模板作PCR擴增，PCR產物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，經UVP凝膠成像系統(tǒng)拍照。

發(fā)現(xiàn)T1引物PCR擴增片段為804 bp（見圖1A），T2引物PCR擴增片段為1 158 bp（見圖1B），兩對引物擴增片段均條帶清晰、無非特異條帶，可用于PCR產物測序。

A-T1引物擴增結果；B-T2引物擴增結果；M-DNA markerDL2000A-Amplification ofprimerpair T1;B-Amplification ofprimerpair T2;M-DNAmarker DL2000

2.2 豬TNF-α基因5'側翼區(qū)域序列比對

根據(jù)腹瀉記錄構建民豬和長白豬健康和腹瀉DNA池，以其基因組DNA為模板作PCR擴增，回收、純化、克隆和測序PCR產物，根據(jù)測序峰圖并結合DNAMAN軟件作序列比對分析，發(fā)現(xiàn)T1引物擴增序列無堿基突變，T2引物擴增片段存在堿基突變。

在此基礎上，分別選擇高腹瀉指數(shù)及健康民豬、長白豬各10頭，以其基因組DNA為模板作PCR擴增，將PCR產物分別回收、純化和測序。利用DNAMAN軟件作序列比對分析，發(fā)現(xiàn)T2引物擴增序列共存在6處SNP，分別位于ATG上游-791（T/C），-947（A/G），-1013（G/A），-1016（A/ G），-1 048（T/C）和-1 239（G/A）。其中位于ATG上游-1 048 bp處SNP：-1 048 T/C可引起HhaⅠ限制性內切酶位點（GCGC）改變（圖2A）。位于-1 016 bp處SNP：-1 016A/G引起TaqⅠ限制性內切酶位點（TCGA）改變（圖2B）。

圖2 TNF-α基因部分序列測序結果Fig.2 Partialsequence of the TNF-αgene

2.3 PCR-RFLP檢測

利用引物T2，以豬基因組DNA為模板作PCR擴增，PCR產物經HhaⅠ酶切后產生TT、TC和CC三種基因型（圖3A）。當SNP：-1 048 T/C多態(tài)位點為T時，由于該片段存在固有HhaⅠ位點，PCR產物經酶切消化后產生2個片段（682 bp+476 bp），記作等位基因T；多態(tài)位點為C時，HhaⅠ酶切后存在3個片段（352 bp+330 bp+476 bp），記為等位基因C。

T2引物PCR產物經TaqⅠ酶切后，產生AA、AG和GG三種基因型（圖3B）。當SNP：-1016A/G多態(tài)位點為A時，PCR產物酶切消化后產生1個片段（1 158bp），記作等位基因A；多態(tài)位點為G時，TaqⅠ酶切后存在2個片段（505+653bp），記為等位基因G。

A-Hha I位點；B-Taq I位點A-Genotyping resultsby Hha IPCR-RFLP;B-Genotyping resultsby Taq IPCR-RFLP.

2.3 豬TNF-α基因型頻率和基因頻率分析

利用Hha I和Taq IPCR-RFLP技術分析民豬和長白豬群體中SNP：-1048T/C和SNP：-1016A/G基因頻率和基因型頻率。

由表2可知，民豬群體HhaⅠ位點未發(fā)現(xiàn)TT基因型個體，僅存在TC和CC兩種基因型，基因型頻率分別為0.07和0.93，C、T等位基因頻率分別為0.97、0.03；長白豬群體中存在3種基因型，TT、TC和CC基因型頻率分別為0.03、0.59和0.38，C、T等位基因頻率為0.68、0.32。對于TaqⅠ位點，民豬群體未發(fā)現(xiàn)AA基因型個體，僅檢測到AG和GG兩種基因型，基因型頻率分別為0.26、0.74，G、A等位基因頻率0.89、0.11；長白群體中也未檢測到AA基因型個體，且僅1個為AG基因型，其他均為GG基因型，G、A等位基因頻率為1、0。

2.4 性狀關聯(lián)分析

根據(jù)群體遺傳學分析結果，在長白豬和民豬群體中作SNP:-1048 T/C與仔豬腹瀉指數(shù)和生長性狀關聯(lián)分析（見表3）。

表2 豬TNF-α基因的基因型頻率和等位基因頻率Table2 Genotypesand allelic frequency ofporcine TNF-αgene

表3 Hha I位點與民豬仔豬腹瀉指數(shù)和生產性狀關聯(lián)分析Tab le3 Association analysisof Hha I locuswith pigletdiarrhea index and per formance traitsin M in pigs

由表3可知，該位點與民豬仔豬腹瀉指數(shù)不相關，與仔豬35日齡斷奶重和日增重相關。Hha I基因型不同時，TC型個體35日齡斷奶體重比CC型仔豬高0.68 kg（P＜0.05），TC型個體日增重比CC型仔豬高0.01 kg（P＜0.05）。

由表4可知，在長白豬群體中，TT基因型個體腹瀉指數(shù)高于TC（P=0.06）和CC基因型個體（P=0.1）。

TT型個體出生重比TC型個體高0.34 kg（P＜0.05），比CC基因型個體高0.21 kg（P＜0.05）。

表4 Hha I位點與長白豬仔豬腹瀉指數(shù)和生產性狀的關聯(lián)分析Table 4 Association analysisof Hha I locusw ith piglet diar rhea index and performance traits in Landrace

3 討論與結論

現(xiàn)代集約化養(yǎng)豬生產中，腹瀉是仔豬生長緩慢和高死亡率主因之一。雖然加強飼養(yǎng)管理、合理使用藥物在一定程度上緩解，但無法從根本上解決問題。不同個體對腹瀉抗性（或易感性）存在差異，主要受遺傳基因控制。因此，尋找控制腹瀉主效基因，培育高抗腹瀉能力品系（或品種），對養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展尤為重要。

抗病性狀是由微效多基因控制數(shù)量性狀，王希彪等選擇pIgR基因作豬抗病育種候選基因，采用PCR-SSCP結合測序方法，在pIgR基因外顯子1發(fā)現(xiàn)錯義突變位點，與民豬仔豬腹瀉指數(shù)和腹瀉致死率相關（P＜0.05）[9]。Yang等選擇SLA-DRA作仔豬腹瀉抗性（或易感性）候選基因，分析其遺傳變異，構建不同單倍型，性狀關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)單倍型Hap9是仔豬腹瀉抗性單倍型[10]。楊巧麗等在SLA-DRA基因第2外顯子發(fā)現(xiàn)2個突變位點，性狀關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)該位點與仔豬腹瀉顯著相關[11]。

利用候選基因等方法已發(fā)現(xiàn)一些控制抗病候選基因和分子標記，但仍無法滿足分子抗病育種需要。TNF-α是一種重要細胞因子，主要通過免疫級聯(lián)反應調控其他細胞因子水平，引發(fā)炎癥反應，提高機體抗病能力[12]，是研究人類傳染性疾病和炎癥性疾病易感性重要候選基因[13]。馮麗麗等研究發(fā)現(xiàn)，脂多糖可誘導豬肺泡巨噬細胞分泌TNF-α，具有劑量和時間依賴性[14]。陳逢等利用Realtime PCR技術分析TNF-α基因在斷奶仔豬不同組織表達模式，發(fā)現(xiàn)其在脾臟表達量最高，其次為淋巴結和回腸組織，在下丘腦、垂體、腎上腺、腓腸肌、肝臟和空腸等組織表達量相對較低[15]。因此，TNF-α可作為仔豬腹瀉抗病育種候選基因。

目前關于豬TNF-α基因與抗病性狀關聯(lián)分析研究較少，本研究利用直接測序法，在豬TNF-α基因5'側翼區(qū)域發(fā)現(xiàn)6個SNP，其中位于ATG上游-791bp處的SNP:-719C/T與Szydlowsk等報道一致，該SNP與大白豬脂肪性狀相關[5]，影響TNF-α基因mRNA表達量[6]。本研究進一步建立針對SNP：-1048T/C和SNP：-1016A/G的Hha IPCR-RFLP和Taq IPCR-RFLP分型技術。但PCR-RFLP發(fā)現(xiàn)，Taq I位點在民豬和長白豬群體中僅存在AG和GG兩種基因型，表明Taq I位點多態(tài)信息含量不豐富，非理想標記位點。Hha I位點在民豬群體中存在TC和CC兩種基因型，但在長白豬群體中存在TT、TC和CC三種基因型。性狀關聯(lián)分析表明，TT基因型長白仔豬腹瀉指數(shù)高于TC（P=0.06）和CC基因型個體（P=0.1）。此外，TT基因型長白仔豬雖具有較高出生重，但35日齡斷奶重和日增重并未顯著高于其他基因型，推測可能是TT型個體抗腹瀉能力差，日增重較低，影響斷奶重。民豬抗腹瀉能力優(yōu)于長白豬，但民豬群體中未發(fā)現(xiàn)TT型個體，推測由于TT型個體抗腹瀉能力差，長期自然選擇中逐漸被淘汰。綜上所述，TNF-α基因Hha I位點對長白豬仔豬腹瀉存在一定影響，但能否作為新遺傳標記，仍需后續(xù)大樣本量群體或不同品種、世代驗證。

[1]Bradley JR.TNF-mediated inflammatory disease[J].Journal of Pathology,2008,214(2):149-160.

[2]Huang H C,Yu H R,Huang L T,et al.miRNA-125b regulates TNF-αproduction in CD14+neonatalmonocytes via post-transcriptional regulation.[J].Journal of Leukocyte Biology,2012,92 (1):171-182.

[3]曹倩,高歌,周剛,等.腫瘤壞死因子基因多態(tài)性與潰瘍性結腸炎相關性研究[J].中華消化雜志,2006,26(7):460-463.

[4]田國保,曾爭,陸海英,等.腫瘤壞死因子a基因啟動子區(qū)多態(tài)性與乙型肝炎病毒感染相關性的薈萃分析[J].世界華人消化雜志,2007,15(6):580-584.

[5]Szydlowski M,Buszka A,Mackowski M,et al.Polymorphism of genes encoding cytokines IL6 and TNF is associated with pig fatness[J].Livestock Science,2011,136(2-3):150-156.

[6]孫麗,夏日煒,劉穎,等.大白豬腫瘤壞死因子α基因啟動子區(qū)多態(tài)性及其對mRNA表達水平的影響[J].中國畜牧獸醫(yī), 2015,42(6):1518-1523.

[7]王希彪,李建敏,許愿,等.哺乳仔豬腹瀉發(fā)生時間和程度的品種間差異及對增重的影響[J].東北農業(yè)大學學報,2014,45(9): 79-83.

[8]王希彪,黃宣凱,崔世泉,等.民豬與長白豬哺乳仔豬腹瀉程度的差異及其對生產性能的影響[J].東北農業(yè)大學學報,2014, 45(7):79-82.

[9]王希彪,童縣偉,崔世泉,等.多聚免疫球蛋白受體(pIgR)基因多態(tài)性及其與仔豬腹瀉關系[J].東北農業(yè)大學學報,2016,47 (4):10-15.

[10]Yang QL,Zhao SG,Wang DW,etal.Association between genetic polymorphism in the swine leukocyte Antigen-DRA gene and piglet diarrhea in three chinese pig breeds[J].Asian Australasian Journalof AnimalSciences,2014,27(9):1228-1235.

[11]楊巧麗,孔晶晶,趙生國等.豬SLA-DRA基因外顯子2多態(tài)性及其與仔豬腹瀉的關聯(lián)分析[J].畜牧獸醫(yī)學報,2012,43(7): 1020-1027.

[12]Sariban E,Imamura K,Luebbers R,et al.Transcriptional and posttranscriptional regulation of tumornecrosis factorgene expression in human monocytes[J].Journal of Clinical Investigation, 1988,81(5):1506-1510.

[13]魏茂提,韓炎炎,何麗,等.TNF-α啟動子區(qū)基因多態(tài)性與SARS易感性及癥狀關系研究[J].武警醫(yī)學院學報,2009,18 (3):169-174.

[14]馮麗麗,張麗萍,張改平,等.脂多糖對豬肺泡巨噬細胞分泌IL-1β及TNF-α的影響[J].河南農業(yè)科學,2009,38(3):106-109.

[15]陳逢,劉玉蘭,李權,等.TLR4信號通路關鍵基因在斷奶仔豬不同組織中的mRNA表達[J].中國畜牧雜志,2013,49(17):53-

Polymorphism analysis in the 5' flanking region of porcine TNF- αgene

NIU Buyue,XING Guiling,ZHA Andong,GAO Xiaowen,D I Shengwei,WANG Xibiao
(School of Animal Science and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)

In this study, polymorphism in the 5' flangingregion of porcine tumor necrosis factor-α (TNF-α) gene was detected by direct sequence and association analysis between SNP locus and diarrhea orperformance traits were performed in Min pig and Landrace population. Six SNPs were found in the 5'flanking region of TNF-α gene. Then the Hha I/Taq I PCR-RFLP technique were established to detect theSNP: -1048T/C and SNP: -1016A/G, respectively. In Min pig population, there were TC and CC genotypes,and TT, TC and CC genotypes were found in Landrace breed. Both in Min pig and Landrace population, onlyAG and GG genotypes were found. Statistical analysis showed that, TC piglets had more weaning weight (P＜0.05) and average daily gain (P＜0.05) than CC piglets in Min pig; Diarrhea index was higher in TT pigs thanTC (P=0.06) and CC pigs (P=0.06) in Landrace breed; in addition, TT pigs had more birth weight than TCand CC piglets(P＜0.05). The results showed that TNF-α gene might affect the diarrhea or performance traits.However, more researches would needed to demonstrate whether Hha I locus might be usefulmarker.

TNF-α; pig; 5' flanking region; polymorphism

S858.28

A

1005-9369（2017）03-0017-07

時間2017-3-21 13:57:00[URL]http://kns.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20170321.1357.002.htm l

牛步月,邢桂玲,查安東,等.豬腫瘤壞死因子α基因5'側翼區(qū)域多態(tài)性分析[J].東北農業(yè)大學學報,2017,48(3):17-23.

Niu Buyue, Xing Guiling, Zha Andong, et al. Polymorphism analysis in the 5' flanking region of porcine TNF-α gene[J]. Journalof Northeast Agricultural University, 2017, 48(3): 17-23. (in Chinese with English abstract)

2017-02-20

國家自然科學基金（31301935）

牛步月（1980-），女，副教授，博士，碩士生導師，主要從事豬遺傳育種學研究。E-mail:niubuyue@163.com