金 華,劉志軍,張秋菊,顏春魯,劉峰林,陳 麗,徐厚謙,胡繼宏,竇榮海,溫鑫洋,曹 強(qiáng),蘇莉莉

·論著·

·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·

鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠酪酪肽表達(dá)的影響

金 華1,2*,劉志軍1,張秋菊1,顏春魯1,劉峰林1,陳 麗1,徐厚謙1,胡繼宏1,竇榮海1,溫鑫洋1,曹 強(qiáng)1,蘇莉莉1

目的 探討鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)酪酪肽(PYY)表達(dá)的影響。方法 2012年6月—2015年4月選取14周齡雄性SHR 75只，隨機(jī)分為模型組(n=15)、貝那普利組(鹽酸貝那普利灌服0.90 mg·kg-1·d-1，n=15)、鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低、中、高劑量組(鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯分別灌服15、30、60 g·kg-1·d-1，n=15)，以WKY大鼠15只作為WKY組，模型組及WKY組每日灌服同體積的蒸餾水。干預(yù)8周后，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中WKY組大鼠死亡6只，模型組大鼠死亡6只，貝那普利組大鼠死亡7只，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組大鼠死亡6只，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯中劑量組大鼠死亡6只，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低劑量組大鼠死亡6只應(yīng)用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)各組大鼠血清PYY水平，采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸組織PYY水平，RT-PCR法檢測(cè)結(jié)腸組織PYY mRNA水平。結(jié)果 模型組血清PYY水平高于WKY組(P<0.05)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組血清PYY水平低于模型組(P<0.05)。模型組結(jié)腸組織PYY 水平高于WKY組(P<0.05)；貝那普利組和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高、中、低劑量組結(jié)腸組織PYY水平低于模型組(P<0.05)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組結(jié)腸組織PYY水平低于貝那普利組(P<0.05)。模型組結(jié)腸組織PYY mRNA水平高于WKY組(P<0.05)；貝那普利組和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高、中劑量組結(jié)腸組織PYY mRNA水平低于模型組(P<0.05)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組結(jié)腸組織PYY mRNA水平低于貝那普利組(P<0.05)。結(jié)論 SHR結(jié)腸組織PYY調(diào)節(jié)失衡，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯可能通過(guò)調(diào)節(jié)PYY的表達(dá)而達(dá)到降壓目的。

大鼠，近交SHR；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯；酪酪肽

金華,劉志軍,張秋菊，等.鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠酪酪肽表達(dá)的影響[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2017，20(9)：1093-1097.[www.chinagp.net]

JIN H,LIU Z J,ZHANG Q J,et al.Influence of Zhengan Xifeng decoction on the expression of peptide tyrosine tyrosine in spontaneously hypertensive rats[J].Chinese General Practice，2017，20(9)：1093-1097.

近年來(lái)，胃腸激素與血壓調(diào)控的關(guān)系受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注[1-2]。酪酪肽(PYY)是由36個(gè)氨基酸組成的小分子多肽，由分布在腸道遠(yuǎn)端的內(nèi)分泌L-細(xì)胞分泌，是一種重要的胃腸激素類腦腸肽，而有關(guān)PYY在高血壓發(fā)病過(guò)程中的表達(dá)及鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對(duì)其的影響目前尚缺乏相關(guān)研究。前期研究顯示，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯可明顯降低自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓[3]，本實(shí)驗(yàn)旨在繼續(xù)探討鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對(duì)SHR PYY水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2012年6月—2015年4月選取14周齡雄性SHR 75只，SPF級(jí)，體質(zhì)量(350±20)g，同源雄性WKY大鼠15只，SPF級(jí)，體質(zhì)量(335±15)g，均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001；均飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，恒溫(22±2)℃，恒濕(55±5)%，人工光照明暗各12 h。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)方法 75只SHR常規(guī)飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分為5組：模型組，貝那普利組，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低、中、高劑量組，每組15只；同時(shí)以WKY大鼠15只作為WKY組。以蒸餾水為溶劑配制鹽酸貝那普利混懸液(蒸餾水和鹽酸貝那普利的比例為10 ml∶9 mg)，貝那普利組灌服鹽酸貝那普利混懸液0.90 mg·kg-1·d-1；參照文獻(xiàn)[4]，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低、中、高劑量組分別灌服鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯15、30、60 g·kg-1·d-1。模型組及WKY組灌服蒸餾水10 ml·kg-1·d-1。各組均干預(yù)8周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中WKY組大鼠死亡6只，模型組大鼠死亡6只，貝那普利組大鼠死亡7只，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組大鼠死亡6只，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯中劑量組大鼠死亡6只，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低劑量組大鼠死亡6只。

1.3 藥物、試劑和儀器

1.3.1 藥物 鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯按張錫純《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》藥物組成和劑量制備(1兩=30 g,1錢=3 g)，由牛膝30.0 g、代赭石30.0 g、龍骨15.0 g、牡蠣15.0 g、龜甲15.0 g、(杭)白芍15.0 g、玄參15.0 g、天冬15.0 g、川楝子6.0 g、麥芽6.0 g、茵陳6.0 g、甘草4.5 g組成，藥物由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院提供。代赭石、龍骨、牡蠣、龜甲先煎2 h，然后與其他藥物混合用8倍蒸餾水常規(guī)煎煮3次，過(guò)濾，濃縮，置于4 ℃冰箱中保存，備用。鹽酸貝那普利(洛汀新，10 mg,北京諾華制藥有限公司，批號(hào)X1936)。

1.3.2 試劑 PYY 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定試劑盒(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)20130402B)。PYY一抗，批號(hào)ab15879，批次(Lot)：147843-1；山羊抗兔IgG(H+L)〔Goat anti-Rabbit IgG(H+L)〕，ab6702；均購(gòu)于美國(guó)Abcam公司。免疫組化染色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)，RNA提取試劑盒(QIAGEN公司，批號(hào)74104)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光染料(Roche公司)，PCR引物由金唯智生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成。

1.3.3 儀器 全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀(Bio-Rad公司，型號(hào)iMark)，熒光PCR儀(Bio-Rad公司，型號(hào)CFX96)，凝膠掃描成像系統(tǒng)(Bio-Rad公司)，電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)FA2004N)，醫(yī)用低速離心機(jī)(金壇市恒豐儀器廠，型號(hào)LX-820)等。

1.4 取血 末次給藥24 h后，并禁食10 h(過(guò)夜)，次日測(cè)量所有大鼠的體質(zhì)量，隨后腹腔注射10%水合氯醛(1.5 ml/100 g)麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血5 ml，注入試管內(nèi)，4 ℃下3 500 r/min離心15 min(離心半徑7 cm)，分離血清，-20 ℃保存，待用。

1.5 血清PYY水平的檢測(cè) ELISA法檢測(cè)血清PYY水平，嚴(yán)格按照ELISA測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作。批內(nèi)變異系數(shù)為8.5%，批間變異系數(shù)為13.5%。

1.6 免疫組化法測(cè)定結(jié)腸組織PYY表達(dá) 取部分結(jié)腸組織，適當(dāng)修整后放入4%多聚甲醛中固定。(1)石蠟切片：40 ℃過(guò)夜,60 ℃烤片1 h；(2)石蠟切片脫蠟至水；(3)抗原修復(fù)：枸櫞酸緩沖液(pH值6.0，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)逐漸加熱至95～98 ℃恒溫保持，放入玻片，恒溫維持60 min；室溫放置自然冷卻，PBS沖洗5 min×3次；(4)滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)50 μl，避光室溫孵育10 min；PBS沖洗5 min×3次；(5)封閉：滴加正常山羊血清(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)30 μl，37 ℃孵育15 min，甩干不洗；(6)滴加稀釋5-羥色胺(5-HT)抗體(美國(guó)abcam公司)30 μl，然后4 ℃過(guò)夜。用PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，在冰箱4 ℃孵育12～16 h；次日取出，室溫放置10 min，PBS沖洗5 min×3次；(7)滴加二抗工作液(美國(guó)Abcam公司)50 μl，37 ℃孵育30 min ；PBS沖洗5 min×3次；(8)滴加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)50 μl，37 ℃孵育15 min；PBS沖洗5 min×3次；(9)DAB顯色：DAB(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)K132429A)按試劑說(shuō)明書(shū)配置，光鏡下觀察，至目的組織出現(xiàn)陽(yáng)性顆粒而周圍組織無(wú)非特異顯色時(shí)，蒸餾水沖洗10 min；(10)蘇木素復(fù)染細(xì)胞核1～2 min，1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，鏡下控制(在×400物鏡下，每張切片檢測(cè)10個(gè)視野，用平均積分光密度代表PYY相對(duì)水平)，自來(lái)水沖洗返藍(lán)10 min；脫水、透明、封固。

1.7 RT-RCR法測(cè)定結(jié)腸組織PYY mRNA水平 (1)總RNA的提?。喝?0 mg結(jié)腸組織提取總RNA，液氮速凍后碾磨組織，加入600 μl RLT裂解液裂解組織，將所得溶液于4 ℃下12 000 r/min離心3 min(離心半徑7 cm)；加入70%乙醇600 μl后，立即轉(zhuǎn)移700 μl溶液(包括沉淀)至柱子上，離心15 s(12 000 r/min，離心半徑7 cm)，完全濾過(guò)溶液；分別加入700 μl Buffer RW1、500 μl Buffer RPE，于4 ℃下離心15 s(12 000 r/min，離心半徑7 cm)，棄濾液，加入500 μl Buffer RPE離心2 min(12 000 r/min，離心半徑7 cm)，棄濾液；將柱子移入至新的2 ml試管中，離心1 min(12 000 r/min，離心半徑7 cm)，干燥濾膜，將柱子移入新的1.5 ml試管中加入30～50 μl無(wú)酶水，離心1 min(12 000 r/min，離心半徑7 cm)得到RNA；同時(shí)取2 μl RNA樣品稀釋50倍后測(cè)定樣品在260 nm和280 nm的吸光度(OD)值，OD260/OD280在1.8～2.0之間視為提取的總RNA質(zhì)量純度較好。(2)反轉(zhuǎn)錄獲得第一鏈cDNA：使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Roche公司，0489686-6001)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄總mRNA，合成第一鏈cDNA，反應(yīng)產(chǎn)物在-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。引物設(shè)計(jì)與合成：β-actin正向引物為5′-AGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，反向引物為5′-CGCTCATTGCCGATAGTG-3′；PYY正向引物為5′-CTGCGCCACTACCTCAAVVT-3′，反引向引物為5′-TCTCGCTGTCGTCTGTGAAGA-3′。(3)cDNA的PCR擴(kuò)增：使用FastStart Universal SYBR Green MASTER(ROX)，實(shí)驗(yàn)步驟參照說(shuō)明書(shū)，采用總體積50 μl反應(yīng)體系，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性10 s，55 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，45個(gè)循環(huán)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。所得數(shù)據(jù)使用PCR儀自帶軟件算出CT值并用2-ΔΔCT法做相對(duì)定量分析。

2 結(jié)果

2.1 血清PYY水平 各組血清PYY水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組血清PYY水平高于WKY組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組血清PYY水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

2.2 結(jié)腸組織PYY水平 各組結(jié)腸組織PYY水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組結(jié)腸組織PYY水平高于WKY組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；貝那普利組和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高、中、低劑量組結(jié)腸組織PYY水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組結(jié)腸組織PYY水平低于貝那普利組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。免疫組化結(jié)果顯示，WKY組黏膜下腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)中PYY不表達(dá)；模型組靠近黏膜下層的腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中PYY高表達(dá)，尤其在靠近黏膜下層腺體中表達(dá)尤為明顯；貝那普利組黏膜下腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)中PYY中度表達(dá)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低劑量組黏膜下腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)中PYY中度表達(dá)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯中劑量組黏膜下腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)中PYY弱表達(dá)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組黏膜下腺體上皮細(xì)胞胞質(zhì)中PYY弱表達(dá)(見(jiàn)圖1，本文圖1彩圖見(jiàn)本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應(yīng)文章附件)。

表1 各組大鼠血清PYY水平比較

注：與WKY組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；PYY=酪酪肽

表2 各組大鼠結(jié)腸組織PYY水平比較

注：與WKY組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與貝那普利組比較，cP<0.05

2.3 結(jié)腸組織PYY mRN水平 各組結(jié)腸組織PYY mRNA水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組結(jié)腸組織PYY mRNA水平高于WKY組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；貝那普利組和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高、中劑量組結(jié)腸組織PYY mRNA水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組結(jié)腸組織PYY mRNA水平低于貝那普利組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

注：A為WKY組，B為模型組，C為貝那普利組，D為鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組，E為鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯中劑量組，F(xiàn)為鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯低劑量組

圖1 各組大鼠結(jié)腸組織PYY表達(dá)(免疫組化染色，×400)

注：與WKY組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與貝那普利組比較，cP<0.05

3 討論

高血壓的發(fā)生與多重因素相互影響有關(guān)，目前普遍認(rèn)為高血壓是遺傳易感性和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，而在這一過(guò)程中胃腸激素可能起主要作用。胃腸激素調(diào)節(jié)異常可能是高血壓發(fā)病的重要因素，其可能通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)至下丘腦弓狀核，進(jìn)而參與食物攝入和能量消耗的調(diào)節(jié)[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)，胃腸激素是消化系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因子，可能影響高血壓的發(fā)生發(fā)展[7]。PYY是一種重要的胃腸激素，屬于胰多肽家族成員，分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周神經(jīng)系統(tǒng)。PYY作為一種調(diào)節(jié)肽，通過(guò)位于靶細(xì)胞的PYY受體向組織細(xì)胞內(nèi)傳遞信息[8]。MANNON[9]研究認(rèn)為，PYY在體內(nèi)與Y1受體結(jié)合后可能通過(guò)細(xì)胞膜蛋白激酶和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖。PYY與營(yíng)養(yǎng)、攝食、能量平衡有著重要的關(guān)系[10]，是一個(gè)調(diào)節(jié)攝食的飽感信號(hào)[11]。研究發(fā)現(xiàn)，胃腸激素除了經(jīng)典的內(nèi)分泌途徑外，還有通過(guò)血液循環(huán)或局部組織液擴(kuò)散的旁分泌途徑[12]，而PYY 3-36是PYY在血液循環(huán)中的主要存在形式[13]。而有關(guān)PYY與高血壓的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外相關(guān)基礎(chǔ)研究的文獻(xiàn)報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)從分子生物學(xué)角度初步闡明SHR PYY的變化。

鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯出自《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，專為“類中風(fēng)”而設(shè)，用以鎮(zhèn)肝熄風(fēng)，滋陰潛陽(yáng)。張錫純重視脾胃氣機(jī)升降，注重引血下行，強(qiáng)調(diào)“宜急治以降胃、鎮(zhèn)沖、平肝之劑，再以滋補(bǔ)真陰藥輔之，庶可轉(zhuǎn)上升之氣血下行”。研究認(rèn)為，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯可激活腦組織過(guò)氧化物酶增殖物激活受體-γ(PPARγ)mRNA的表達(dá)，減少腦組織中血管內(nèi)皮素(ET)的分泌，使腦血管擴(kuò)張，從而對(duì)SHR產(chǎn)生腦保護(hù)作用[14]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)ELISA法檢測(cè)血清PYY水平，結(jié)果顯示，模型組大鼠血清PYY水平較WKY組升高；而鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組血清PYY水平較模型組降低。由此推測(cè)，SHR血清PYY水平升高可能與血壓升高相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步以PYY在SHR結(jié)腸組織中的表達(dá)作為切入點(diǎn)，從分子生物學(xué)角度探索高血壓與PYY的關(guān)系，通過(guò)免疫組化法及RT-PCR法分別對(duì)各組大鼠結(jié)腸組織PYY及其mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，模型組結(jié)腸組織PYY及其mRNA水平高于WKY組；貝那普利組和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高、中劑量組結(jié)腸組織PYY及其mRNA水平低于模型組，而鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組結(jié)腸組織PYY及其mRNA水平低于貝那普利組，表明鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯可使SHR結(jié)腸組織PYY mRNA水平降低。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，貝那普利和鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯能抑制L細(xì)胞的分泌功能，而鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯高劑量組的抑制作用更強(qiáng)，使PYY在黏膜層底部細(xì)胞表達(dá)減弱，進(jìn)而降低結(jié)腸組織PYY水平。

綜上所述，SHR血清和結(jié)腸組織中存在PYY表達(dá)異常，鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯可以調(diào)節(jié)改善PYY水平，這可能是其降壓機(jī)制之一。

本研究創(chuàng)新點(diǎn)/不足：

(1)本研究以高血壓發(fā)病機(jī)制中，遺傳與環(huán)境因素可能通過(guò)胃腸激素途徑影響血壓調(diào)控為假說(shuō)，探索高相關(guān)胃腸激素類腦腸肽與高血壓的相關(guān)性，可能是對(duì)高血壓發(fā)病機(jī)制中的神經(jīng)、體液調(diào)節(jié)的一項(xiàng)重要補(bǔ)充，通過(guò)鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)胃腸激素調(diào)節(jié)的研究，初步闡明張錫純名方鎮(zhèn)肝熄風(fēng)湯體現(xiàn)脾胃學(xué)說(shuō)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及影響血壓調(diào)控的可能機(jī)制。

(2)本研究?jī)H通過(guò)酪酪肽(PYY)這一指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)研究，目前只能揭示高血壓與胃腸激素的某一相關(guān)性，尚不能完全闡明胃腸激素調(diào)節(jié)異常是否與高血壓發(fā)病機(jī)制相關(guān)，胃腸激素類腦腸肽與高血壓的發(fā)病機(jī)制仍需深入研究。

作者貢獻(xiàn)：金華負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、組織實(shí)施，撰寫(xiě)論文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；劉志軍、張秋菊、顏春魯、劉峰林、竇榮海、溫鑫洋、曹強(qiáng)、蘇莉莉負(fù)責(zé)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、指標(biāo)檢測(cè)和資料整理；陳麗、胡繼宏負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)；徐厚謙負(fù)責(zé)質(zhì)量控制及審校。

本文無(wú)利益沖突。

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(本文編輯：崔莎)

Influence of Zhengan Xifeng Decoction on the Expression of Peptide Tyrosine Tyrosine in Spontaneously Hypertensive Rats

JINHua1,2*,LIUZhi-jun1,ZHANGQiu-ju1,YANChun-lu1,LIUFeng-lin1,CHENLi1,XUHou-qian1,HUJi-hong1,DOURong-hai1,WENXin-yang1,CAOQiang1,SULi-li1

1.GansuUniversityofChineseMedicine,Lanzhou730000,China2.GansuProvinceKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicinePrescriptionExcavationandInnovationandTransformation,Lanzhou730000,China

Objective To investigate the influence of Zhengan Xifeng decoction on the expression of peptide tyrosine tyrosine(PYY) in spontaneously hypertensive rats(SHRs).Methods We randomly assigned 75 SHRs(14 weeks old,male) into model group(n=15),Benazepril group(n=15),Zhengan Xifeng decoction high,medium,and low dose groups(15 SHRs in each group),and set 15 WKY rats as the WKY group between June 2012 and April 2015.During the intervention period of 8 weeks,six rats died in model group,WKY group,Zhengan Xifeng decoction high, medium, and low dose group,seven rats died in Benazepril group.The rats in model group and WKY group were given the same volume of distilled water every day,Benazepril group were fed with Benazepril 0.90 mg·kg-1·d-1,Zhengan Xifeng decoction high,medium,and low dose groups were fed with Zhengan Xifeng decoction 15,30,60 g·kg-1·d-1,respectively.At the end of intervention,the level of PYY in serum was detected by ELISA,the expression of PYY and its mRNA in colon was detected by immunohistochemistry and RT-PCR.Results The serum PYY levels in model group were significant higher than those in WKY group(P<0.05).Zhengan Xifeng decoction high dose group had lower serum PYY levels than model group(P<0.05).Compared with the model group,the expression of PYY in colon was lower in the WKY group(P<0.05) as well as in Benazepril group,and Zhengan Xifeng decoction high,medium,and low dose groups(P<0.05).The expression of PYY in colon in Zhengan Xifeng decoction high dose group was lower than that in Benazepril group(P<0.05).WKY group had lower expression of PYY mRNA in colon than model group(P<0.05),likewise,Benazepril group,and Zhengan Xifeng decoction high,medium dose groups possessed lower expression of PYY mRNA in colon than model group(P<0.05).Zhengan Xifeng decoction high dose group displayed a lower expression of PYY mRNA in colon in comparison to Benazepril group(P<0.05).Conclusion SHRs have regulation disorder of PYY in colon.The antihypertensive effect of Zhengan Xifeng decoction may be realized by regulating the expression of PYY.

Rats,inbred SHR;Zhengan Xifeng decoction;Peptide tyrosine tyrosine

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160477)；甘肅省自然科學(xué)研究基金計(jì)劃(1107RJZA220)；甘肅省高等學(xué)?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)資助項(xiàng)目(2010-5)

R -332

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.09.014

2016-09-19；

2017-02-10)

1.730000甘肅省蘭州市，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

2.730000甘肅省蘭州市，甘肅省中醫(yī)方藥挖掘與創(chuàng)新轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

*通信作者：金華，教授；E-mail:lanzhoujinhua@126.com

*Correspondingauthor:JINHua,Professor;E-mail:lanzhoujinhua@126.com