李誠(chéng)叢 高香奇* 周 星

海南省藥物研究所，海南 ?？?570311

黎藥復(fù)體力湯抗疲勞和增強(qiáng)免疫力功能研究

李誠(chéng)叢1高香奇1*周 星2

海南省藥物研究所，海南 ?？?570311

目的：研究海南黎藥復(fù)體力湯對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠抗疲勞和增強(qiáng)免疫力作用，為藥物開(kāi)發(fā)提參考依據(jù)。方法：使用小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行海南黎藥復(fù)體力湯抗疲勞和增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)。結(jié)果：抗疲勞試驗(yàn)中，高劑量組(30g/kg·bw)小鼠游泳至力竭的時(shí)間、小鼠肝組織中SOD的活性與對(duì)照組比較，均有明顯延長(zhǎng)或增加(P<0.05)， MDA濃度顯著減少(P<0.01)；增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)中，高劑量組(30g/kg·bw)能極顯著提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、conA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、碳廓清能力和巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力(P<0.01)。結(jié)論：海南黎藥復(fù)體力湯具有抗疲勞和增強(qiáng)免疫力的效果。

海南黎藥；復(fù)體力湯；抗疲勞功能；增強(qiáng)免疫力功能

黎藥是黎族人民傳統(tǒng)使用的民間藥物的簡(jiǎn)稱(chēng)，是黎族用以保健、預(yù)防和治療疾病的物質(zhì)[1]。黎藥復(fù)體力湯是將多種黎藥藥材搭配做成的湯劑，處方主要由雞血藤、杜仲、千斤拔、七葉蓮、散血丹、牛大力等組成。前期對(duì)黎藥復(fù)體力湯的提取工藝和安全性進(jìn)行研究評(píng)價(jià)顯示，黎藥復(fù)體力湯屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)，未顯示有急性、亞急性和遺傳毒性作用[2-3]。根據(jù)安全性研究結(jié)果，現(xiàn)進(jìn)行黎藥復(fù)體力湯的抗疲勞和增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)，為開(kāi)發(fā)具有抗疲勞和增強(qiáng)免疫力功能的海南黎藥復(fù)體力湯提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 3K-18超速離心機(jī)(美國(guó)SIGMA公司)；UV2550紫外分光光度計(jì)(日本SHIMADZU公司)；MOC-15二氧化碳培養(yǎng)箱(日本三洋)、ST-260酶標(biāo)儀(上?？迫A)、SW-CJ-2FD超凈工作臺(tái)(蘇州凈化)、Nikon 50i顯微鏡(日本尼康)、YSQ-LS-50SF高壓滅菌器(江陰濱江)、XM7E-8112恒溫水浴(上海精宏)、LRH-150L生化培養(yǎng)箱(上海一恒)、游標(biāo)卡尺(精密度0.02mm)(上海九量)、AUW220D電子分析天平(日本島津)。

1.2 藥物 ?；撬?500mg/片，批號(hào) 012022，美國(guó)GNC健安喜)。黎藥復(fù)體力湯由海南省五指山市黎族民間醫(yī)藥研究協(xié)會(huì)提供處方和藥材。取配方量的藥材，反復(fù)加水，煎煮3次，每次3h，合并三次濾液濃縮成所需濃度。

1.3 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠，由長(zhǎng)沙市開(kāi)福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2009-0012。飼養(yǎng)環(huán)境為屏障級(jí)。

2 方法

2.1 抗疲勞試驗(yàn) 選取檢疫合格小鼠50只，按體重隨機(jī)分為復(fù)體力湯高劑量組、中劑量組、低劑量組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組雌雄各半。高、中、低劑量組給藥劑量分別為生藥30g/kg、20g/kg、10g/kg(分別相當(dāng)于人體推薦劑量的15、10和5倍)，陰性對(duì)照組給予等體積純化水，陽(yáng)性對(duì)照組為800mg/kg?；撬幔渲瞥蓾舛?0mg/mL?；撬崛芤菏褂?，配制方法：取4片?；撬崞胙欣徰兴?，加入25mL氯化鈉注射液，混勻即得。各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)21d，灌胃體積均為0.1mL/10g體重。

2.2.1 小鼠5%負(fù)重游泳試驗(yàn)[4]末次給藥1h后，將小鼠置于游泳箱中，注水保持溫度于(25±2)℃(最適宜小鼠游泳溫度)，于尾部上方負(fù)重該小鼠體重5%重量的保險(xiǎn)絲，負(fù)重過(guò)程中不影響小鼠運(yùn)動(dòng)。放入水池后開(kāi)始記錄時(shí)間至小鼠沉入水池底部力竭為止。力竭標(biāo)準(zhǔn)：小鼠沉入水中超過(guò)10s，且放在平面上無(wú)法完成翻整反射。記錄游泳開(kāi)始到小鼠力竭的時(shí)間。

2.1.2 小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD/MDA測(cè)定試驗(yàn)[5]在小鼠5%負(fù)重游泳試驗(yàn)計(jì)時(shí)結(jié)束后，將力竭小鼠眼球取血，加入離心管中，1500rpm離心10min，備用。SOD/MDA的測(cè)定按南京建成生物工程研究所提供的試劑盒給出的方法進(jìn)行。

2.2 增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)[6]選取體重18～22g的KM小鼠200 只，雄性，每40 只小鼠1 個(gè)大組，共分5 個(gè)大組。分別進(jìn)行碳廓清試驗(yàn)(免疫Ⅰ組)，ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、NK細(xì)胞的活性試驗(yàn)(免疫Ⅱ組)，臟體比值測(cè)定、半數(shù)溶血值(HC50)的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定(免疫Ⅲ組)，遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)(免疫Ⅳ組)，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)(免疫Ⅴ組) 。每大組40 只小鼠按照體重隨機(jī)分為4 個(gè)小組，分別為對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。高、中、低劑量同抗疲勞試驗(yàn)，對(duì)照組給予等體積純化水。各組灌胃給藥，每日1次，連續(xù)30d，灌胃體積均為0.1mL/10g體重[7]。連續(xù)灌胃30d后測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，包括細(xì)胞免疫功能指標(biāo)、體液免疫功能指標(biāo)、單核-巨噬細(xì)胞吞噬指標(biāo)及NK細(xì)胞活性測(cè)定。

3 結(jié)果

3.1 抗疲勞試驗(yàn)

3.1.1 小鼠5%負(fù)重游泳試驗(yàn) 與陰性對(duì)照組比較，高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；陽(yáng)性對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；其余劑量組分別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠5%負(fù)重游泳時(shí)間的影響±s)

注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.1.2 小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD/MDA測(cè)定試驗(yàn) 高劑量組小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD測(cè)定值有明顯提高、MDA測(cè)定值顯著下降，兩者分別與對(duì)照組比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)；中、低劑量組分別與對(duì)照組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠力竭運(yùn)動(dòng)后血清中SOD/MDA的影響

注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2 增強(qiáng)免疫力試驗(yàn)

3.2.1 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響 高劑量組小鼠足跖腫脹度和淋巴細(xì)胞增殖能力均明顯分別高于對(duì)照組(P<0.01)，表明受試物可提供小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力和小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。見(jiàn)表3。

表3 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響±s)

注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2.2 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠體液免疫功能的影響 各劑量組小鼠溶血空斑數(shù)、半數(shù)溶血值分別與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠的體液免疫功能的影響±s)

3.2.3 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響

3.2.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力 各劑量組小鼠吞噬率平方根反正弦轉(zhuǎn)換值、吞噬指數(shù)與陰性對(duì)照組比較，高劑量組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，低劑量組和中劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

表5 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響 ±s)

注：同陰性對(duì)照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2.3.2 碳廓清試驗(yàn) 各劑量組吞噬指數(shù)與對(duì)照組的比較，高劑量組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；低劑量組和中劑量組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

表6 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠單核—巨噬細(xì)胞碳廓清的影響 ±s)

注：同陰性對(duì)照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2.4 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響 各劑量組小鼠的NK細(xì)胞活性同對(duì)照組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表7。

表7 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響 ±s)

3.2.5 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠體重的影響和臟器比值的測(cè)定

3.2.5.1 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠體重的影響各劑量組試驗(yàn)前、試驗(yàn)中期、試驗(yàn)?zāi)┢谛∈篌w重與對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

3.2.5.2 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠免疫器官臟器比值的影響 各劑量組小鼠脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與對(duì)照組的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表8。

表8 黎藥復(fù)體力湯對(duì)小鼠免疫器官臟器比值的影響

4 結(jié)論與討論

隨著社會(huì)節(jié)奏的加快，社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)日益激烈，疲勞已成為威脅人類(lèi)健康的重要因素。因而延緩疲勞的發(fā)生和促進(jìn)疲勞的恢復(fù)成為營(yíng)養(yǎng)衛(wèi)生學(xué)、航天醫(yī)學(xué)、軍事醫(yī)學(xué)、運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)、保健醫(yī)學(xué)、康復(fù)醫(yī)學(xué)等學(xué)科的研究重點(diǎn)。近年來(lái)，在民間醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，不少學(xué)者在中藥抗疲勞方面做了大量的工作，取得了一定成效。海南黎藥復(fù)體力湯是海南黎族民間長(zhǎng)期使用且具有良好效果的經(jīng)驗(yàn)方，該方對(duì)于身體虛弱者可以增強(qiáng)體力，緩解體力疲勞，解除人體亞健康狀態(tài)。?；撬峋哂写龠M(jìn)有機(jī)體免疫力的增強(qiáng)和抗疲勞的作用，是臨床上用于抗疲勞的常用藥物之一，本課題通過(guò)與?；撬岬目蛊谛Ч容^，顯示黎藥復(fù)體力湯抗疲勞效果與?；撬嵯喈?dāng)，但?；撬徇^(guò)多使用會(huì)增加人體血壓和心率，影響心臟功能，但黎藥復(fù)體力湯由多種中草藥組成，具有延緩并消除疲勞、改善激素分泌，無(wú)明顯不良發(fā)應(yīng)，且黎藥復(fù)體力湯還具有增強(qiáng)免疫力的功能。

經(jīng)過(guò)21d連續(xù)灌胃海南黎藥復(fù)體力湯，高劑量組(30g/kg)和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的力竭游泳時(shí)間比陰性對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P<0.05，P<0.01)，能顯著提高小鼠肝組織中SOD的活性(P<0.05，P<0.01)、降低MDA濃度(P<0.01)，表明該方可阻止細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，有利于運(yùn)動(dòng)耐力的提高，減少有氧代謝產(chǎn)物的生成，從而降低體內(nèi)能源物資的消耗，延緩疲勞的發(fā)生，有明顯的抗疲勞和抗氧化功能。中、低劑量組的力竭游泳時(shí)間、SOD活性和MDA濃度與陰性對(duì)照組比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，高劑量組的與?；撬彡?yáng)性對(duì)照組抗疲勞作用效果相當(dāng)，提示該方具有開(kāi)發(fā)意義。

經(jīng)口灌胃給予小鼠10、20、30g/kg·bw劑量的復(fù)體力湯30d后，與對(duì)照組比較，高劑量組(30g/kg·bw)能提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、conA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、碳廓清能力和巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力(P<0.01)；各劑量復(fù)體力湯對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、半數(shù)溶血值、抗體細(xì)胞生成數(shù)和NK細(xì)胞活性均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版) 中增強(qiáng)免疫力功能的判斷標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞免疫功能和單核巨噬細(xì)胞功能結(jié)果均為陽(yáng)性，表明復(fù)體力湯具有增強(qiáng)免疫力的功能。

[1]鄭才成.黎族藥物是海南民族醫(yī)學(xué)和民間用藥的傳統(tǒng)特色[J].海南首屆黎族藥物學(xué)術(shù)交流會(huì)論文，2008.

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[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).鼠傷寒沙門(mén)氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體酶試驗(yàn)[S].GB15193.4-2003.

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Study on the Anti-Fatigue and Immunity-Enhancing Effect of Recovery Physical Decoction from Hainan Li-Nationality Herbal

LI Chengcong1GAO Xiangqi1*ZHOU Xing2

PharmaceuticalInstitute of Hainan Province,Hainan, 570311,China

Objective To study the anti-fatigue and immunity-enhancing effect of recovery physical decoction from Hainan Li-nationality herbal in mice, and to provide references for drug development.Methods The anti - fatigue and immunity - enhancing test of recovery physical decoction from Hainan Li-nationality herbal were performed in mice.Results In the anti-fatigue test, as compared with the control group, Hainan Li-nationality herbal at dose of 30g/kg·bw could significantly prolong time that the mice spent in trying to swim to exhaust and significantly increase the activity of SOD in the liver tissue (P<0.05), could significantly decrease the concentration of MDA(P<0.01).In the enhanced immunity test, as compared with the control group, Hainan Li-nationality herbal at dose of 30g/kg·bw could markedly enhance the DTH in mice, the lymphocyte transformation capacity induced by conA in mice, the carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken red blood cell capacity(P<0.01).Conclusion In our test condition, the anti-fatigue effect of recovery physical decoction from Hainan Li-nationality herbal is very significant,and it could enhance the immune function in mice.

Hainan Li-nationality Herbal ; Recovery Physical Decoction ; Anti-Fatigue Effect; Immune Function

海南省中藥現(xiàn)代化專(zhuān)項(xiàng)(瓊科函[2011]261號(hào))。

李誠(chéng)叢(1987-)，男，漢族，本科，實(shí)習(xí)研究員，研究方向?yàn)樗幚矶纠砗退幮W(xué)。E-mail:176009938@qq.com

高香奇(1988-)，女，漢族，本科，實(shí)習(xí)研究員，研究方向?yàn)樗幚矶纠砗退幮W(xué)。E-mail:419357272@qq.com

R96

A

1007-8517(2017)05-0060-03

2016-12-29 編輯：程鵬飛)