袁蓮蓮, 王耀鋒, 劉相甫, 靳志偉, 張 靜, 李 偉,董石飛, 趙存孝, 黃明迪, 王鳳龍, 楊金廣*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所,國(guó)家煙草行業(yè)煙草病蟲(chóng)害監(jiān)測(cè)與綜合治理重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室, 青島 266101;2. 甘肅省煙草公司慶陽(yáng)市公司, 慶陽(yáng) 745000; 3. 中國(guó)煙葉公司, 北京 100055; 4. 甘肅省煙草公司, 蘭州 741306;5. 紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司, 昆明 650231; 6. 甘肅省煙草公司隴南市公司, 隴南 746000)

蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)煙草漂浮育苗中TMV的鈍化效果

袁蓮蓮1, 王耀鋒2, 劉相甫3, 靳志偉4, 張 靜5, 李 偉5,董石飛5, 趙存孝2, 黃明迪6, 王鳳龍1, 楊金廣1*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所,國(guó)家煙草行業(yè)煙草病蟲(chóng)害監(jiān)測(cè)與綜合治理重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室, 青島 266101;2. 甘肅省煙草公司慶陽(yáng)市公司, 慶陽(yáng) 745000; 3. 中國(guó)煙葉公司, 北京 100055; 4. 甘肅省煙草公司, 蘭州 741306;5. 紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司, 昆明 650231; 6. 甘肅省煙草公司隴南市公司, 隴南 746000)

選用對(duì)煙草花葉病毒Tobaccomosaicvirus(TMV)具有顯著拮抗活性的蒙氏假單胞菌Pseudomonasmonteilii3A菌株對(duì)煙草漂浮育苗過(guò)程中被TMV污染的育苗棚、育苗盤(pán)、基質(zhì)及剪葉機(jī)械等進(jìn)行生物鈍化,并利用real-time RT-PCR對(duì)污染基質(zhì)中TMV的含量進(jìn)行了定量檢測(cè)。結(jié)果顯示,200、400倍及600倍P.monteilii3A菌懸液稀釋液均可顯著鈍化病苗殘留干葉及干根中的TMV;剪葉機(jī)械經(jīng)不同稀釋倍數(shù)的P.monteilii3A菌懸液處理后,在一定程度上抑制了TMV的發(fā)生,相對(duì)防效達(dá)51.42%～100%;基質(zhì)經(jīng)不同稀釋倍數(shù)的P.monteilii3A菌懸液處理后,其中TMV的含量也下降了72.73%～88.46%,對(duì)TMV的相對(duì)防效達(dá)61.56%～87.46%。其中,200倍P.monteilii3A稀釋液處理育苗棚、育苗盤(pán)20 min以上,浸泡剪葉機(jī)械1 min以上對(duì)TMV鈍化效果最好。

煙草普通花葉病毒(TMV); 蒙氏假單胞菌3A菌株; 漂浮育苗

煙草花葉病毒Tobaccomosaicvirus(TMV)引起的病毒病可嚴(yán)重危害農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)。TMV在農(nóng)作物上主要通過(guò)農(nóng)事操作進(jìn)行傳播,煙草育苗過(guò)程中被TMV污染的育苗棚、育苗盤(pán)、基質(zhì)及剪葉機(jī)械等是TMV的重要初侵染源[1]。由于TMV擁有較高的侵染稀釋限點(diǎn),極微量的病毒粒體就可以傳播,且TMV的抗逆性較強(qiáng),其病毒粒體在基質(zhì)中殘留10年仍具有較強(qiáng)的侵染活性[2-3];此外,生產(chǎn)上常用的育苗盤(pán)一般多孔,不易進(jìn)行清洗和消毒,且經(jīng)常會(huì)有一些煙苗殘?bào)w黏附在苗盤(pán)上,TMV可在干的煙苗殘?bào)w中存活數(shù)年[4];再者,煙草育苗期需進(jìn)行多次剪葉,且育苗集中度高,一旦存在毒源則容易大面積傳播[5]。為了能夠更有效地控制TMV侵染帶來(lái)的危害,應(yīng)從根本上減少其初侵染源,切斷其傳播途徑[6]。近些年,實(shí)際生產(chǎn)中主要通過(guò)噴施抗病毒藥劑對(duì)TMV進(jìn)行防治,但效果并不理想,且存在著嚴(yán)重的農(nóng)藥殘留問(wèn)題,導(dǎo)致農(nóng)作物和環(huán)境被嚴(yán)重污染。1925年,有研究發(fā)現(xiàn)被細(xì)菌污染的植物病毒提取液?jiǎn)适Я饲秩灸芰?這為利用微生物及其代謝產(chǎn)物防治植物病毒病提供了新的思路[7]。微生物農(nóng)藥為無(wú)公害生物制劑,具有安全可靠、對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn),應(yīng)用其防治TMV可避免環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留[8]。因此,篩選有效、安全的生物制劑對(duì)煙草育苗過(guò)程中TMV的防控具有重要意義。

研究者曾對(duì)育苗過(guò)程中剪葉機(jī)械的消毒劑進(jìn)行了篩選[9-11],分析了蒸汽、部分藥劑對(duì)舊漂浮盤(pán)殘留物中TMV的鈍化效果[11-12],但少有噴施有效的生物制劑鈍化育苗棚、育苗盤(pán)中病苗殘留物(根、葉)、基質(zhì)及剪葉機(jī)械中TMV的研究報(bào)道,而生物制劑如能同時(shí)用于育苗棚、苗盤(pán)、基質(zhì)及剪葉機(jī)械等鈍化TMV,在實(shí)際生產(chǎn)上將更為經(jīng)濟(jì)方便。結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況,本研究選用對(duì)TMV具有較強(qiáng)拮抗活性的蒙氏假單胞菌Pseudomonasmonteilii3A菌液噴施于育苗棚、剪葉機(jī)械、基質(zhì)及育苗盤(pán),比較幾種常用濃度菌液鈍化TMV的效果,以期為煙草育苗過(guò)程中鈍化TMV的生物制劑的選擇和科學(xué)使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試煙草品種為‘NC89’,在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所試驗(yàn)基地培育至4～6葉期健康煙苗供試。TMV毒源系及P.monteilii3A菌株均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所分離純化和鑒定,TMV經(jīng)過(guò)枯斑寄主三生煙單斑分離3次后接種于‘NC89’幼苗上,于25～28℃防蟲(chóng)條件下保存?zhèn)溆?P.monteilii3A在-70℃條件下于甘油中保存。抗TMV藥劑對(duì)照為8%寧南霉素水劑,由德強(qiáng)生物股份有限公司提供。

1.2 蒙氏假單胞菌3A菌液對(duì)TMV體外抑制效果測(cè)定

將甘油中保存的P.monteilii3A菌株,在LB固體培養(yǎng)基上畫(huà)線培養(yǎng),挑取單菌落接種于3 mL LB液體培養(yǎng)基中,于28℃擴(kuò)大培養(yǎng)48 h,取純化好的菌株涂片,進(jìn)行革蘭氏染色及運(yùn)動(dòng)力檢測(cè)。純化好的菌株進(jìn)行生理生化測(cè)定,經(jīng)菌株鑒定為P.monteilii3A后,以1∶100比例接種于LB液體培養(yǎng)基中,進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng),最后用無(wú)菌水稀釋成1×108cfu/mL作為菌液備用。

利用局部枯斑法測(cè)定P.monteilii3A菌液對(duì)TMV的抑制效果[13]。稱(chēng)取2 g新鮮TMV病葉加100 mL 滅菌磷酸緩沖液研磨成勻漿,用滅菌紗布過(guò)濾后取上清液作為接種液;P.monteilii3A菌液用無(wú)菌水稀釋200、400倍和600倍。分別將不同濃度的3A菌液稀釋液與TMV接種液等量混合,室溫下分別靜置10、20 min后摩擦接種,接種前葉片表面噴灑適量金剛砂。左半葉接種磷酸緩沖液處理的TMV接種液(對(duì)照),右半葉接種P.monteilii3A菌液與TMV接種液的混合液,每半片葉接種200 μL。接種后用清水進(jìn)行葉面沖洗,3次重復(fù)。接種3 d左右后進(jìn)行枯斑數(shù)統(tǒng)計(jì),并計(jì)算抑制率。

抑制率(%)=[1-(處理平均枯斑數(shù)/對(duì)照平均枯斑數(shù))]×100。

1.3 病苗殘留干葉、干根的蒙氏假單胞菌3A菌液浸泡處理

選用稀釋200、400、600倍的P.monteilii3A菌液來(lái)模擬舊育苗盤(pán)、育苗棚的處理。將感染TMV的煙苗的細(xì)干根及干葉放置于燒杯中,分別加入20倍材料體積的不同稀釋倍數(shù)的菌液浸泡20 min,倒去菌液,用塑料薄膜密封燒杯口,室溫下放置2 d,隨后加入20倍材料體積的去離子水研磨,過(guò)濾后取上清液進(jìn)行接種;以LB液體培養(yǎng)液浸泡感病組織作為對(duì)照。采用局部枯斑法測(cè)定,接種3 d后統(tǒng)計(jì)枯斑數(shù)。

1.4 蒙氏假單胞菌3A菌液對(duì)TMV污染剪葉機(jī)械的浸泡處理

取新鮮TMV病葉3～5片,用剪刀反復(fù)多次剪切病葉,然后將感染TMV的剪刀分別在稀釋200、400、600倍的P.monteilii3A菌液中浸泡10 s、1 min和5 min,清水沖洗后剪葉,另設(shè)清水對(duì)照。每個(gè)處理6株煙苗,每株剪3片煙葉,重復(fù)3次,剪葉后每個(gè)處理分開(kāi)單獨(dú)培養(yǎng)。30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病率、病情指數(shù)。

發(fā)病率(%)=100×發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù);

病情指數(shù)=100×(∑各級(jí)病株數(shù)×該病級(jí)值)/(調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)值);

控制效果(%)=100×(對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/對(duì)照區(qū)病情指數(shù)。

1.5 蒙氏假單胞菌3A菌液對(duì)TMV污染基質(zhì)中TMV的鈍化效果

10 g 新鮮TMV病葉加100 mL 磷酸緩沖液研磨成勻漿,按照1∶5 (mL/g)比例澆灌基質(zhì)。然后用不同濃度的3A菌液分別按照1∶5 (mL/g)比例處理病毒汁液澆灌過(guò)的基質(zhì),室溫靜置15 d,以此基質(zhì)種植4葉期‘NC89’幼苗。以0.16 μg/mL寧南霉素水劑按照1∶5(mL/g)比例處理病毒汁液澆灌過(guò)的基質(zhì)為藥劑對(duì)照,無(wú)菌水處理為空白對(duì)照。30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病率、病情指數(shù),并再采集各處理的基質(zhì)利用real-time RT-PCR測(cè)定其TMV相對(duì)含量。

1.6 Real-time RT-PCR

采集被TMV污染的基質(zhì),依據(jù)McGrath等的方法進(jìn)行離心處理[14],后利用PowerSoilTM RNA Extraction Kit (MoBio, USA)進(jìn)行總RNA提取,提取方法參照試劑和說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,每個(gè)樣品進(jìn)行3次重復(fù)提取。

參考試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA,利用PerlPrimer軟件設(shè)計(jì)TMV的特異性引物,引物由寶生物工程(大連)有限公司(TaKaRa)合成,煙草內(nèi)參基因qActinF:5′-CAAGGAAATCACCGCTTTGG-3′;qActinR:5′-AAGGGATGCGAGGATGGA-3′;qTMV5:5′-ATTAGACCCGCTAGTCACAGCAC-3′,qTMV3:5′-GTGGGGTTCGCCTGATTTT-3′[15]。根據(jù)SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(Perfect real time)的說(shuō)明書(shū)設(shè)定PCR反應(yīng)體系及條件,設(shè)置5個(gè)cDNA濃度梯度,10、102、103、104、105,每個(gè)梯度各3次重復(fù),利用 ABI 7500 Real-Time PCR system (ABI,USA)自帶的SDS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,生成標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。同時(shí),通過(guò)Real-Time PCR檢測(cè)TMV基因的積累量[16]。

1.7 數(shù)據(jù)分析

所得數(shù)據(jù)均用Excel 2010軟件處理,同時(shí)利用SPSS(version 14.0)統(tǒng)計(jì)軟件中單樣本t-test對(duì)不同處理的差異顯著性進(jìn)行分析。

2 結(jié)果分析

2.1 蒙氏假單胞菌3A菌液對(duì)新鮮病葉中TMV的防控作用

不同稀釋倍數(shù)的P.monteilii3A菌液與TMV接種液等量混合并分別靜置10 min、20 min后接種‘NC89’,以測(cè)試P.monteilii3A對(duì)TMV的鈍化效果。從表1中可看出,P.monteilii3A菌液稀釋液對(duì)TMV的抑制率與混合后靜置的時(shí)間呈正相關(guān),混合液靜置10 min后進(jìn)行接種,其200、400、600倍稀釋液對(duì)TMV的抑制率分別為100.00%、76.34%、72.68%;混合液靜置20 min后接種,對(duì)TMV的抑制率分別為100.00%、82.77%、77.43%,表明P.monteilii3A菌液可顯著鈍化新鮮病葉中的TMV,鈍化效率高達(dá)72.68%～100.00%,對(duì)TMV的鈍化效果隨混合液靜置時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng),但均隨菌液濃度的降低而下降,采用200倍P.monteilii3A菌液,與TMV接種液的接觸時(shí)間不少于10 min時(shí)抑制效果最佳。

2.2 蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)病苗殘留干葉、干根中TMV的鈍化作用

選用稀釋200、400、600倍的P.monteilii3A菌液浸泡感染TMV的煙苗殘留干葉及干根后接種健康煙苗測(cè)定P.monteilii3A菌液對(duì)TMV的鈍化作用。結(jié)果表明,以LB液體培養(yǎng)基浸泡后的感病組織作為毒源接種健康煙苗,接種葉片上出現(xiàn)較多枯斑,而經(jīng)不同倍數(shù)P.monteilii3A菌液浸泡后的感病組織浸提液接種的葉片枯斑數(shù)量較少或者沒(méi)有。表明不同濃度的P.monteilii3A菌液均可顯著鈍化病苗殘留干葉及干根中的TMV,200倍P.monteilii3A菌液的鈍化效果最佳。

表1 不同濃度蒙氏假單胞菌3A菌液對(duì)新鮮病葉中TMV的鈍化效果

Table 1 Prevention effects ofPseudomonasmonteilii3A bacterial liquid on TMV in fresh tobacco diseased leaves

處理Treatment稀釋倍數(shù)/倍Dilutionmultiple接觸10min的枯斑數(shù)/個(gè)No.oflocalnecroticlesionsaftercontactfor10min對(duì)照CK處理Treatment抑制率/%Inhibitionrate接觸20min的枯斑數(shù)/個(gè)No.oflocalnecroticlesionsaftercontactfor20min對(duì)照CK處理Treatment抑制率/%Inhibitionrate蒙氏假單胞菌P.monteilii3A20055.300100.0077.300100.0040035.508.4076.3438.306.6082.77600142.4038.9072.68133.8030.2077.43

圖1 不同稀釋倍數(shù)的蒙氏假單胞菌3A菌株菌懸液對(duì)TMV的鈍化作用Fig.1 Passivation of Pseudomonas monteilii 3A on TMV at different concentrations of bacterial suspension

2.3 蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)被污染剪葉機(jī)械上TMV的鈍化效果

表2列出了蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)被污染剪刀中TMV的鈍化效果。從表中可看出,剪刀經(jīng)清水浸泡處理的對(duì)照,TMV發(fā)病率為34%左右,而剪刀經(jīng)過(guò)不同稀釋倍數(shù)的P.monteilii3A菌懸液處理后,在一定程度上抑制了煙草普通花葉病的發(fā)生,相對(duì)防效達(dá)51.42%～100%。隨著P.monteilii3A菌懸液處理濃度升高,或處理時(shí)間延長(zhǎng),TMV發(fā)病率顯著下降,防治效果明顯增加。剪刀經(jīng)稀釋200倍的P.monteilii3A菌懸液浸泡不少于1 min時(shí)對(duì)TMV的鈍化效果最好,防治效果達(dá)100%。

表2 蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)污染剪刀中TMV的鈍化效果1)

Table 2 Passivation effect ofPseudomonasmonteilii3A on TMV in clipping tools

處理Treatment稀釋倍數(shù)/倍Dilutionmultiple發(fā)病率/%Diseaseincidence10s1min5min相對(duì)防效/%Relativecontroleffect10s1min5min蒙氏假單胞菌P.monteilii3A200(7.28±0.04)dA(0.00±0.00)dB(0.00±0.00)dB(77.30±0.07)aB(100.00±0.00)aA(100.00±0.00)aA400(11.24±0.03)cA(5.59±0.07)cB(1.24±0.04)cC(65.43±0.03)bC(86.34±0.02)bB(91.32±0.10)bA600(18.34±0.10)bA(11.56±0.09)bB(4.64±0.09)bC(51.42±0.12)cC(65.24±0.11)cB(88.05±0.12)cA無(wú)菌水Sterilewater0(34.24±0.17)aA(34.65±0.10)aA(34.42±0.22)aA---

1) 同行數(shù)據(jù)后具有不同大寫(xiě)字母者表示在0.05水平差異顯著;同列數(shù)據(jù)后具有不同小寫(xiě)字母者表示在0.05水平差異顯著。 The data in the same row followed by different capital letters are significantly different (P<0.05); the data in the same column followed by different lowercase letters are significantly different (P<0.05).

2.4 蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)TMV污染的植煙土壤中TMV的鈍化效果

經(jīng)AB7500 Real-time PCR system自帶的SDS軟件分析Real-time PCR檢測(cè)所得的數(shù)據(jù),可生成TMV和Actin基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,經(jīng)稀釋10～1055個(gè)梯度處理的cDNA起始模板量和循環(huán)閾值Ct的線性關(guān)系曲線。TMV基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=-3.867 5x+33.5,R2=0.996 0;Actin的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=-2.402 1x+30.931,R2=0.9972。R2均達(dá)0.98以上,熔解曲線峰單一,無(wú)非特異性擴(kuò)增,定量準(zhǔn)確,符合實(shí)時(shí)熒光定量PCR要求。

表3顯示了蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)TMV污染基質(zhì)中TMV的鈍化效果?？煽闯?與無(wú)菌水處理相比,經(jīng)不同稀釋倍數(shù)P.monteilii3A菌懸液處理后,基質(zhì)中TMV的含量顯著降低,TMV的發(fā)病率也顯著下降,相對(duì)防效達(dá)61.56%～87.46%。隨著P.monteilii3A菌懸液濃度的升高,TMV發(fā)病率顯著下降,防治效果明顯增強(qiáng),其中,400倍P.monteilii3A菌懸液處理對(duì)基質(zhì)中TMV的鈍化效果與寧南霉素相近,相對(duì)防效在75%左右。處理后基質(zhì)中TMV的含量下降了72.73%～88.46%,表明P.monteilii3A菌懸液可明顯減少植煙基質(zhì)中TMV的含量。200倍P.monteilii3A菌懸液對(duì)TMV的鈍化作用最佳。

表3 蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)基質(zhì)中TMV的鈍化作用1)

Table 3 Passivation effect ofPseudomonasmonteilii3A on TMV in matrix

處理Treatment發(fā)病率/%Diseaseincidence相對(duì)防效/%Relativecontroleffect基質(zhì)中TMV拷貝數(shù)/個(gè)·g-1AmountofTMVinmatrix1∶200P.monteilii3A(7.08±0.01)d(87.46±0.04)a(2864.02±5.02)d1∶400P.monteilii3A(16.26±0.04)c(76.59±0.09)b(4573.12±7.13)c1∶600P.monteilii3A(28.68±0.07)b(61.56±0.08)c(6747.34±8.03)b寧南霉素(陽(yáng)性對(duì)照)Ningnanmycin(positivecontrol)(17.33±0.02)c(74.46±0.14)b(4457.26±7.52)c無(wú)菌水(空白對(duì)照)Sterilewater(negativecontrol)(53.24±0.10)a-(24745.64±10.82)a

1) 基質(zhì)中TMV拷貝數(shù)為6個(gè)采樣點(diǎn)的平均值;同列數(shù)據(jù)后具有不同小寫(xiě)字母者表示在0.05水平差異顯著。 The TMV copies in matrix are means of six sampling sites. The data in the same column followed by different lowercase letters are significantly different (P<0.05).

3 討論與結(jié)論

煙草生產(chǎn)過(guò)程中易受到多種病毒的危害,比較不同病毒的體外保毒期、鈍化溫度、稀釋限點(diǎn)及傳播方式等可看出,TMV抗逆性最強(qiáng)、最易通過(guò)育苗過(guò)程傳播,且煙苗一旦被TMV侵染,則無(wú)法進(jìn)行有效防治[5]。因此,本研究測(cè)定生防菌株蒙氏假單胞菌3A菌株對(duì)煙草漂浮育苗中TMV的鈍化效果,通過(guò)消滅初侵染源和切斷傳播途徑來(lái)進(jìn)行防治,同時(shí),對(duì)生產(chǎn)上利用生物制劑防治煙草漂浮育苗過(guò)程中其他病毒具有指導(dǎo)意義。

本研究選用對(duì)TMV具有顯著拮抗活性的生防菌株蒙氏假單胞菌3A菌株,對(duì)煙草漂浮育苗過(guò)程中被TMV污染的育苗棚、育苗盤(pán)、基質(zhì)及剪葉機(jī)械等進(jìn)行生物鈍化,并利用real-time RT-PCR對(duì)污染基質(zhì)中TMV的含量進(jìn)行了定量檢測(cè)。結(jié)果顯示,不同倍數(shù)P.monteilii3A菌懸液均可顯著鈍化感病煙苗殘留干葉及干根中的TMV;剪葉機(jī)械經(jīng)不同稀釋倍數(shù)的P.monteilii3A菌液處理后,在一定程度上可抑制TMV的發(fā)生,相對(duì)防效達(dá)51.42%～100%;基質(zhì)經(jīng)不同稀釋倍數(shù)的P.monteilii3A菌液處理后,其中TMV的含量也下降了72.73%～88.46%,對(duì)TMV的相對(duì)防效61.56%～87.46%?？傮w來(lái)說(shuō),P.monteilii3A對(duì)煙草漂浮育苗中TMV的鈍化效果顯著。

本研究中使用的TMV濃度較高,在實(shí)際生產(chǎn)上剪葉機(jī)械、苗盤(pán)、基質(zhì)和人為操作等的帶毒濃度遠(yuǎn)比試驗(yàn)濃度低,因此,試驗(yàn)中確定的最佳濃度和使用時(shí)間同樣可應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示,200倍P.monteilii3A菌液對(duì)TMV鈍化效果最好,與育苗棚、育苗盤(pán)的接觸時(shí)間應(yīng)不少于20 min,剪葉機(jī)械應(yīng)浸泡1 min以上。與其他化學(xué)抗病毒制劑或消毒劑相比,P.monteilii3A菌液主要表現(xiàn)為具有活性的生防菌,安全、持續(xù)、無(wú)污染和低碳。這就為當(dāng)前有機(jī)無(wú)公害生態(tài)農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)提供了必要的條件,值得推廣應(yīng)用。

國(guó)內(nèi)外已有很多有關(guān)假單胞菌作為生防菌的研究,結(jié)果表明,P.monteilii可以胞外分泌酯酶[17]。徐麗等的研究顯示P.monteilii可作為五味子植株根內(nèi)生菌抑制五味子莖基腐病菌、穿山龍黑斑病菌及人參銹腐病菌的活性[18]。翟熙倫的研究表明,蒙氏假單胞菌4A1菌株發(fā)酵液中的活性物質(zhì)可破壞TMV粒體,對(duì)病毒產(chǎn)生鈍化作用,破壞病毒蛋白亞基之間的作用力,使病毒粒體缺乏完整性,從而無(wú)法在寄主體內(nèi)增殖,降低病毒的侵染能力[19]。本研究的3A菌株為蒙氏假單胞菌,對(duì)煙草漂浮育苗中TMV的鈍化效果顯著,對(duì)植物病毒病的防治有潛在的應(yīng)用價(jià)值,但是其與TMV在煙草植株內(nèi)的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。

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(責(zé)任編輯：田 喆)

Passivation effect ofPseudomonasmonteilii3A onTobaccomosaicvirusin tobacco float seedlings

Yuan Lianlian1, Wang Yaofeng2, Liu Xiangfu3, Jin Zhiwei4, Zhang Jing5, Li Wei5,Dong Shifei5, Zhao Cunxiao2, Huang Mingdi6, Wang Fenglong1, Yang Jinguang1

(1.TobaccoResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences,KeyLaboratoryofTobaccoPestMonitoring,Controlling&IntegratedManagement,Qingdao266101,China; 2.QingyangTobaccoCompany,GansuTobaccoCooperation,Qingyang745000,China; 3.ChinaNationalLeafTobaccoCorporation,Beijing100055,China; 4.GansuTobaccoCooperation,Lanzhou741306,China; 5.HongyunandHongheTobacco(Group)Co.,Ltd.,Kunming650231,China;6.LongnanTobaccoCompany,GansuTobaccoCooperation,Longnan746000,China)

Pseudomonasmonteilii3A strain was selected to evaluate the passivation effect onTobaccomosaicvirus(TMV) in tobacco seedlings by real-time RT-PCR, combined with the incidence and disease index of the virus disease. The results showed thatP.monteilii3A bacterial liquid with different concentration gradients (200, 400 and 600×) had significant passivation effects on TMV in the residual dry roots and leaves of the old seedling sheds and trays. Meanwhile, using the clipping tool treated withP.monteilii3A bacterial liquid could reduce the incidence and disease index of the virus disease, and the relative control effect was 51.42%-100%.P.monteilii3A bacterial liquid could reduce the amount of TMV in the matrix polluted with TMV through bio-passivation by 72.73%-88.46%, and the relative control effect on the virus disease was 61.56%-87.46%. The best dilution ofP.monteilii3A bacterial liquid was 1∶200, and the optimum contact time on old seedling sheds and trays was no less than 20 min. Meanwhile, the clipping tools should be treated more than 1 min.

Tobaccomosaicvirus(TMV);Pseudomonasmonteilii3A; float seedling

2016-03-24

2016-06-07

甘肅省煙草公司科技項(xiàng)目(2015-08)

S 435.72

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2017.02.006

* 通信作者 E-mail:jinguangyang@126.com