沈一唯，鄢 寒，黃月英，石曉晴，卞 ?。?.解放軍第411醫(yī)院藥學(xué)科，上海 200434；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌 330004）

HPLC法測(cè)定洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量

沈一唯1，2＊，鄢 寒1，2，黃月英1，2，石曉晴1，2，卞 俊1#（1.解放軍第411醫(yī)院藥學(xué)科，上海 200434；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌 330004）

目的：建立測(cè)定洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀含量的方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Diamonsil C18，流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（55∶45∶0.1∶0.1，V/V/V/V），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長為223 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果：洛索洛芬銀檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為6.53～130.7 μg/mL（r＝0.999 9）；定量限為0.253 μg/mL，檢測(cè)限為0.076 μg/mL；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜2%；加樣回收率為96.79%～103.68%（RSD＝2.23%，n＝9）。結(jié)論：該方法操作方便、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量測(cè)定。

洛索洛芬銀乳膏；洛索洛芬銀；高效液相色譜法；含量測(cè)定

燒傷是戰(zhàn)時(shí)及日常生活中常見的機(jī)體損傷，是由于物理、化學(xué)、放射性等因素造成的復(fù)雜的外傷性疾患[1]。目前，外用藥在燒傷中占有十分突出的作用，臨床上常用磺胺嘧啶銀霜治療燒傷患者[2-4]，具有良好的抗菌消炎作用，但該藥品的收斂作用較弱，更沒有止痛作用[5-6]。解放軍第411醫(yī)院（以下簡稱“我院”）自制的洛索洛芬銀乳膏，具有洛索洛芬的鎮(zhèn)痛、消炎、解熱作用[7-8]和銀離子的抗菌消炎、收斂、減少滲出液的作用[9-11]；在控制燒傷感染的同時(shí)，又能消炎、鎮(zhèn)痛、解熱，控制燒傷患者創(chuàng)傷的惡化，達(dá)到更有效治療燒傷的目的。鑒于目前該制劑還未建立其含量測(cè)定方法，為更好地控制該制劑的質(zhì)量，達(dá)到用藥有效、安全的目的，筆者參照《日本藥典》[12]中洛索洛芬鈉及相關(guān)文獻(xiàn)[13-14]中洛索洛芬鈉制劑的測(cè)定方法，建立了高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定該制劑中洛索洛芬銀含量的方法，以期為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1525型HPLC儀，包括2487型紫外檢測(cè)器、Breeze色譜工作站（美國Waters公司）；AB104-N型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；SE-3001F型電子天平（美國Ohaus公司）；HWS-12型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

洛索洛芬銀乳膏（解放軍第411醫(yī)院自制，批號(hào)：20160629、20160630、20160701，規(guī)格：1%）；洛索洛芬鈉對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100638-200401，純度：100%）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（150 mm×6.0 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（55∶45∶0.1∶0.1，V/V/V/ V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：223 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取干燥至恒重的洛索洛芬鈉對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加5 mL 5%的氨水振搖，使溶解，加甲醇定容，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。取上述對(duì)照品貯備液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度為20 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約1.0 g，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加甲醇約20 mL，在60℃下水浴加熱10 min，趁熱加入5 mL 5%的氨水，振搖使樣品完全溶解，加甲醇定容，搖勻，置于冰?。胁粩嗉颖┲欣鋮s4 h，取出，放至室溫（25℃），作為供試品貯備液。精密量取上述貯備液5 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按樣品的制備工藝和處方比例制備不含洛索洛芬銀的陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，洛索洛芬銀能達(dá)到基線分離（分離度＞1.5）；理論板數(shù)以洛索洛芬銀計(jì)≥3 000，保留時(shí)間為12.5 min。結(jié)果表明，其他成分對(duì)測(cè)定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，加甲醇制成洛索洛芬鈉質(zhì)量濃度分別為5、10、20、40、60、80、100 μg/mL的系列對(duì)照品溶液。取上述對(duì)照品溶液各20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得洛索洛芬鈉的回歸方程為y＝38 190x－6 343（r＝0.999 9），洛索洛芬鈉檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為4.96～99.2 μg/mL。通過洛索洛芬銀與洛索洛芬鈉的相對(duì)分子質(zhì)量比[Mr（Ag）∶Mr（Na）＝353∶268]，換算得洛索洛芬銀的回歸方程為y＝28 994x－6 343（r＝0.999 9），洛索洛芬銀檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為6.53～130.7 μg/mL。

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得定量限（LOQ）；當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得檢測(cè)限（LOD）。結(jié)果，經(jīng)換算，洛索洛芬銀的LOQ為0.253 μg/mL，LOD為0.076 μg/mL。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，經(jīng)換算，洛索洛芬銀峰面積的RSD＝0.19%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20160629）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，洛索洛芬銀峰面積的RSD＝0.74%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20160629）適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，洛索洛芬銀峰面積的RSD＝1.67%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：20160629）適量，共9份，每份約0.05 g，精密稱定，各置于25 mL量瓶中，分別加入一定質(zhì)量的洛索洛芬鈉對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備濃度為80%、100%、120%的供試品溶液，每個(gè)濃度各3份。取上述供試品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)：20160629、20160630、20160701）各適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算洛索洛芬銀的含量。結(jié)果，3批樣品的含量分別為98.21%、101.02%、101.82%（n＝3）。

3 討論

3.1 耐用性試驗(yàn)

筆者曾選用不同流動(dòng)相比例[甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（60∶40∶0.1∶0.1、65∶35∶0.1∶0.1，V/V/V/V）]，不同品牌色譜柱Diamonsil C18（150 mm×6.0 mm，5 μm）和Zorbax ODS（250 mm×6.0 mm，5 μm），又分別考察了柱溫變化（±5℃）、流速變化（±20%）時(shí)對(duì)其含量的影響[15]。結(jié)果表明，洛索洛芬銀峰面積的RSD均＜2.0%（n＝3），說明本方法在不同流動(dòng)相比例、不同型號(hào)的色譜柱、不同柱溫、不同流速下耐用性良好。

3.2 供試品溶液前處理

洛索洛芬銀是一種難溶性的藥物，只有在氨水、硝酸等極少數(shù)溶劑中溶解。本試驗(yàn)采用硝酸進(jìn)行溶解，但硝酸破乳效果差，不能使之較好分離；而處理乳膏樣品時(shí)加入5%的氨水溶液來溶解洛索洛芬銀，并在60℃水浴中加熱可使乳膏破乳，油水分離完全。因此，本試驗(yàn)選擇5%氨水進(jìn)行溶解。在處理時(shí)選用冰浴4 h是為了使乳膏基質(zhì)凝固，達(dá)到易于濾過的目的。洛索洛芬銀在長時(shí)間的光照下不穩(wěn)定，因此整個(gè)測(cè)定過程在具有避光條件的房間內(nèi)操作。

3.3 溶劑的選擇

該制劑為乳膏劑，為避免乳膏基質(zhì)對(duì)含量測(cè)定的影響，筆者曾選用蒸餾水、流動(dòng)相、甲醇、無水乙醇作為溶劑進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，選用甲醇作為溶劑時(shí)對(duì)乳膏基質(zhì)沒有影響，結(jié)果準(zhǔn)確，因此本試驗(yàn)選擇甲醇為溶劑。此外，在之后的水浴操作過程中需確保水浴加熱時(shí)間充分，如不充分會(huì)導(dǎo)致油水分離不完全，影響測(cè)定結(jié)果。

3.4 對(duì)照品的選擇

洛索洛芬銀是通過洛索洛芬鈉與硝酸銀合成的，目前市面上還沒有其對(duì)照品。本試驗(yàn)色譜圖中測(cè)定的是洛索洛芬酸母核，而洛索洛芬銀和洛索洛芬鈉均含有洛索洛芬酸同一母核，鈉離子和銀離子不干擾洛索洛芬酸的色譜測(cè)定，只是鈉和銀的原子量不同，經(jīng)過洛索洛芬鈉與洛索洛芬銀的相對(duì)分子質(zhì)量之比即能換算得洛索洛芬銀的量，為避免沒有洛索洛芬銀對(duì)照品的困難，故本試驗(yàn)選用洛索洛芬鈉作為對(duì)照品使用。在色譜圖中，對(duì)照品溶液中含有洛索洛芬酸和鈉離子，供試品溶液中含有洛索洛芬酸和銀離子，在HPLC圖譜中顯示的峰都是洛索洛芬酸，所以二者在同一個(gè)保留時(shí)間出峰。

綜上所述，本方法操作方便、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于洛索洛芬銀乳膏中洛索洛芬銀的含量測(cè)定。

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（編輯：劉 柳）

Content Determination of Loxoprofen Silver in Loxoprofen Silver Cream by HPLC

SHEN Yiwei1，2，YAN Han1，2，HUANG Yueying1，2，SHI Xiaoqing1，2，BIAN Jun1（1.Dept.of Pharmacy，No.411 Hospital of PLA，Shanghai 200434，China；2.College of Pharmacy，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of loxoprofen silver in Loxoprofen silver cream，and provide reference for the quality control of the preparation.METHODS：HPLC was performed on the column of Diamonsil C18with mobile phase of methanol-water-glacial acetic acid-triethylamine（55∶45∶0.1∶0.1，V/V/V/V）at a flow rate of 1.0 mL/min，detection wavelength was 223 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 20 μL.RESULTS：The linear range of loxoprofen silver was 6.53-130.7 μg/mL（r＝0.999 9）；the limit of quantitation was 0.253 μg/mL，limit of detection was 0.076 μg/mL；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2%；recovery was 96.79%-103.68%（RSD＝2.23%，n＝9）.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the content determination of Loxoprofen silver cream.

Loxoprofen silver cream；Loxoprofen silver；HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2017）06-0851-03

2016-09-16

2016-12-11）

＊碩士研究生。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。電話：021-65280289。E-mail：shenyiwei03@163.com

#通信作者：主任藥師，碩士。研究方向：新藥制劑開發(fā)與研究。電話：021-65280289。E-mail：Bianjun411@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.06.36