霍燕燕，和 玉，鄭艷金

（西安文理學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，陜西西安710065）

分析測(cè)試

牛奶中雙甲脒殘留量氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定方法研究*

霍燕燕，和 玉，鄭艷金

（西安文理學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，陜西西安710065）

研究了牛奶中雙甲脒的氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在酸性條件下，牛奶試樣中的雙甲脒水解生成2,4-二甲基苯胺，得到的產(chǎn)物加入堿性溶液NaOH（4 mol·L-1）后用適量正己烷萃取，過(guò)濾后供氣相色譜質(zhì)譜測(cè)定。在10～150μg·L-1濃度范圍內(nèi)，2,4-二甲基苯胺的濃度與其測(cè)得的峰面積有較好的線性關(guān)系，線性方程Y＝39942Χ（μg·L-1）-223586，r=0.9988，檢出限為3.0 ng·mL-1。在空白牛奶樣品中，添加雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液，做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明平均回收率為104.1%～106.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.77%和3.08%。實(shí)驗(yàn)證明該方法快速，分離度較好，適用于牛奶中雙甲脒含量的檢測(cè)。

雙甲脒；2,4-二甲基苯胺；氣相色譜-質(zhì)譜

雙甲脒，含中等毒性的殺螨劑，一般常用于果樹(shù)、蔬菜、茶葉、棉花等作物的螨害防治。它含有多種類型的毒殺機(jī)理，不僅如此，雙甲脒可以利用食物鏈的傳遞，一層一層滲透或者會(huì)通過(guò)皮膚的接觸、吸收后會(huì)引起中毒，對(duì)人體具有潛在的危害。雙甲脒價(jià)格低廉，獲得途徑較為容易，所以曾經(jīng)在全國(guó)內(nèi)以及國(guó)外被農(nóng)民大量使用，然而經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其代謝產(chǎn)物2,4-二甲基苯胺具有致癌作用，因此我國(guó)農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部根據(jù)最新發(fā)布的《農(nóng)藥安全使用規(guī)定》嚴(yán)格規(guī)定要禁止使用該殺螨劑。食品中農(nóng)藥殘留物已廣泛引起人們的關(guān)注，但對(duì)雙甲脒殘留物研究較少[1]。

迄今為止，牛奶中雙甲脒殘留量檢測(cè)方法有氣相色譜法[2-4]、液相色譜法[5]等。傳統(tǒng)測(cè)定雙甲脒方法是氣相色譜法，它將牛奶中殘留的雙甲脒分解為2,4-二甲基苯胺，然后用七氟丁酸酐衍生之后，用電子捕獲檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。一方面，此方法加入衍生化試劑操作較復(fù)雜；另一方面，七氟丁酸酐屬于劇毒試劑，對(duì)操作人員身體傷害較大。若以液相色譜法直接測(cè)定雙甲脒含量，忽視了雙甲脒在酸性條件下會(huì)水解為2,4-二甲基苯胺的特性，只測(cè)定雙甲脒母體含量作為雙甲脒的總殘留量是不準(zhǔn)確的，所以液相色譜法有一定的缺陷。

本文將牛奶中的雙甲脒在酸性條件下水解為2,4-二甲基苯胺，其為堿性化合物，且在堿性條件下，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑。水解后，加入堿性溶液再加入正己烷萃取。用0.45μm的有機(jī)相濾膜過(guò)濾后，再用氣相色譜-質(zhì)譜進(jìn)行定性、定量，結(jié)果是雙甲脒和其代謝物的總殘留量。該方法簡(jiǎn)單、快捷，用于檢測(cè)牛奶中的雙甲脒殘留能得到令人滿意的效果，且檢出限遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的雙甲脒最大殘留量0.05mg·kg-1。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)品純度≥95.0%（D-86199 Augsburg,Germany）;2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)品純度≥95.0%（D-86199 Augsburg,Germany）；

雙甲脒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100mg·L-1）：準(zhǔn)確稱取10.0mg雙甲脒，用正己烷稀釋溶解并定容至100mL容量瓶中，儲(chǔ)存在冰箱中備用；

2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100mg·L-1）：準(zhǔn)確稱取10.0mg 2,4-二甲基苯胺，用正己烷稀釋溶解并定容至100mL容量瓶中，儲(chǔ)存在冰箱中備用。

1mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確移取雙甲脒和2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1mL放到兩個(gè)100mL容量瓶中，再用正己烷稀釋定容至100mL，得到濃度為1 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液；

4mol·L-1NaOH（優(yōu)級(jí)純）；1mol·L-1HCl（優(yōu)級(jí)純）；無(wú)水Na2SO4(優(yōu)級(jí)純)；正己烷（色譜純）。

Trace 1300-ISQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（賽默飛世爾有限公司）；DHG-9023A恒溫干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；TGL-16G離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；BS 224 S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；色譜柱：TG-5MS（15m× 0.25mm×0.25μm）（Thermo Scientific）；進(jìn)樣針：10μL（安捷倫科技有限公司）。

1.2 測(cè)試條件

1.2.1 氣相色譜條件色譜柱：TG-5MS（15m× 0.25mm×0.25μm）；載氣：He（純度99.99%）；采用恒流模式，柱流速：1mL·min-1；進(jìn)樣的模式：不分流進(jìn)樣，時(shí)間為1min；樣品進(jìn)樣量：1μL；進(jìn)樣口的溫度：260℃；柱溫：初始溫度50℃保持1min，以20℃·min-1升至250℃保持10min。

1.2.2 質(zhì)譜條件電離需要的能量（EI）：70 eV；離子源的溫度：300℃；傳輸線溫度：300℃；掃描方式：選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式，2,4-二甲基苯胺的定量離子為m/z121，參考特征離子為m/z120，m/z106。

1.3 牛奶樣品前處理

移取0.5mL牛奶樣品放于4mL離心管中→加入1 mol·L-1HCl溶液1mL→放到60℃恒溫干燥箱中靜置30min→冷卻至室溫→用10000 r·min-1離心機(jī)離心10min→取上清液于另一離心管中→加入1mL 4 mol·L-1NaOH溶液→2mL正己烷，混勻，靜置5min→放入10000r·min-1離心機(jī)中離心10min→取上層正己烷液并加入0.1g無(wú)水Na2SO4除去水分→用0.45μm的有機(jī)相濾膜過(guò)濾后，供氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.4 譜圖

采用全掃描的方式進(jìn)行檢測(cè)2,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg·L-1），掃描范圍：m/z 41-m/z350，得到其質(zhì)譜圖和色譜圖。利用2,4-二甲基苯胺的全掃描質(zhì)譜圖和保留時(shí)間，對(duì)2,4-二甲基苯胺的定性、定量特征目標(biāo)離子進(jìn)行選擇，2,4-二甲基苯胺的保留時(shí)間為：4.54，定量離子選?。?06，120，121。

圖12 ,4-二甲基苯胺色譜圖、質(zhì)譜圖（2,4-二甲基苯胺含量10-4μg）Fig.1 Chromatogram and Mass spectrogram of 2,4-dimethyl aniline

采用離子監(jiān)測(cè)模式對(duì)2,4-二甲基苯胺進(jìn)行定量檢測(cè)得到對(duì)應(yīng)的色譜圖和質(zhì)譜圖。100μg·L-1的2,4-二甲基苯胺色譜圖和質(zhì)譜圖（圖1）。

從圖1中可知，保留時(shí)間為：4.56min。濃度為100μg·L-1的2,4-二甲基苯胺的對(duì)應(yīng)的峰面積為4013590。

2 結(jié)果與討論

2.1 工作曲線與檢出限

準(zhǔn)確移取1 mg·L-1的2,4-二甲基苯胺適量，分別配制濃度為10、20、40、100、150μg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液，用氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定。根據(jù)所得數(shù)據(jù)繪制峰面積-濃度工作曲線見(jiàn)圖2。

圖22 ,4-二甲基苯胺標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Standard curve of 2,4-dimethyl aniline

由圖2可知，在10～150μg·L-1的濃度范圍內(nèi)，峰面積與2,4-二甲基苯胺的濃度有較好的線性關(guān)系。線性方程Y＝39942X－223586,r=0.9988,該方法的檢出限為3.0 ng·L-1。

2.2 牛奶樣品的檢測(cè)

按照上述的前處理方法，對(duì)不同品牌、不同批號(hào)的牛奶進(jìn)行水解、堿化，用正己烷萃取，用0.45μm的濾膜過(guò)濾后，用氣相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表（3.1）。上述對(duì)于不同品牌牛奶的檢測(cè)，均未能測(cè)出雙甲脒及其殘留量2,4-二甲基苯胺。

表1 牛奶樣品的檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Detection results of milk samples

2.3 回收率及精密度試驗(yàn)

取兩個(gè)空白牛奶樣品（銀橋原點(diǎn)牧場(chǎng)，生產(chǎn)批號(hào)20160101B062M45）各0.2mL，添加雙甲脒1mL，濃度分別為150μg·L-1和176μg·L-1，再用1mL正己烷萃取，結(jié)果見(jiàn)表2。在10～150μg·L-1的線性范圍內(nèi)，兩個(gè)添加濃度的雙甲脒的平均回收率分別為106.8%、104.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.08%、1.77%，回收率較好。

表2 加標(biāo)回收率的測(cè)定Tab.2 Determination of recoveries of spiked standard

3 結(jié)論

上述不同品牌、不同批號(hào)的牛奶中均未檢測(cè)出雙甲脒。原因分析：雙甲脒在低濃度下不穩(wěn)定容易失效，低溫條件下最多可保存7d左右，失效后就無(wú)法檢測(cè)。已生產(chǎn)的牛奶中本來(lái)就沒(méi)有雙甲脒或含量非常低，當(dāng)檢測(cè)的時(shí)候，牛奶中少量的雙甲脒已經(jīng)部分失效或全部失效，含量更是少之又少，所以牛奶經(jīng)前處理后進(jìn)氣質(zhì)儀檢測(cè)，未測(cè)出其代謝產(chǎn)物。

本文選擇使用氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)牛奶中的雙甲脒及其代謝產(chǎn)物2,4-二甲基苯胺，樣品中的雙甲脒在酸性條件下水解得到2,4-二甲基苯胺，該產(chǎn)物堿化后萃取到正己烷中，再用氣相色譜質(zhì)譜儀檢測(cè)和確證。該方法前處理步驟較為簡(jiǎn)單，無(wú)需衍生，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性好，靈敏度高。加標(biāo)平均回收率為104.1%和106.8%。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.77%和3.08%，能較好地滿足牛奶中雙甲脒殘留的分析要求。

［1］趙嬰榮.單甲脒在蘋果中殘留量的測(cè)定［J］.農(nóng)藥,1991,30（50）：26-30.

［2］鄭永權(quán),姚建仁,邵向東,等.蜂蜜中雙甲脒殘留量檢測(cè)方法［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理,2000,21（3）：14-16.

［3］王元鴻,榮會(huì),張瑩,等.食品中雙甲脒殘留量氣相色譜測(cè)定方法研究［J］.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2001,13（6）：20-22.

［4］楊容.氣相色譜法檢測(cè)茶葉中痕量雙甲脒［J］.食品科技, 2006,（2）：94-95.

［5］趙增運(yùn),吳斌,沈崇鈺,等.高效液相色譜法測(cè)定蜂蜜中的雙甲脒殘留［J］.中國(guó)養(yǎng)蜂,2005,56（5）：4-5.

Detection of amitraz pesticide residues in milk using GC-MS*

HUO Yan-yan，HE Yu，ZHEN Yan-jin
（School of Chemical Engineering,Xi′an University,Xi′an 710065,China）

This paper studied amitraz’s residues in milk by gas chromatography-mass spectrometry method. Under acidic conditions,the amitraz of milk sample hydrolyzes 2,4-dimethyl aniline,the obtained product was added sodium hydroxide solution（4 mol·L-1）and added an appropriate amount of n-hexane extraction,then use gas chromatography mass spectrometry to determine.In 10～150μg·L-1concentration range,the concentration of 2,4-dimethyl aniline and measured peak area has a good linear relationship,relationship equation Y=39942X（Mg· L-1）-223586,r=0.9988,the detection limit was 3.0ng·mL-1.Blank milk samples added 2,4-dimethyl aniline standard solution,do spiked recovery experiments,the results show that the average recovery rate was 104.1%and 106.8%,relative standard deviation（RSD）was 1.77%and 3.08%.The method is rapid,has a good separating degree for detecting milk amitraz content.

amitraz；2,4-dimethylaniline；gas chromatography-mass spectrometry

O625

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20170320

2016-06-23

西安市科技計(jì)劃項(xiàng)目（CXY1531WL34）；陜西省教育廳項(xiàng)目（16JK2194）

霍燕燕（1983），女，碩士，實(shí)驗(yàn)師，從事現(xiàn)代光譜分析方面的研究。